全 文 ：南京农业大学学报 19 90 , 13 (4增 ) : 5 1 ~ 55
侵染豌豆的芜普花叶病毒研究
周食平 波祖芹
(植物保护学系 )
摘要 从南京郊区表现褪绿斑驳症状的豌豆病株上分离得到的卜 12 分离物 , 汁液摩擦接
种 10 科 42 种植物 , 可侵染其中的 8 科 17 种植物 , 被侵染的小白菜 (B ~ 如 ch i . 肚臼)
、 白
菜 ( .B eP 七能 nS 功 出现典型的花叶症 , 油菜 a( ` a ” p es t r司 的接种叶出现坏死斑并发展为系
统坏死 , 被侵染的豌豆 (P 自剐用 二 it ~ 梦 出现祖绿斑
. 体外抗性: 钝化温度 5 ~ 印℃ , 稀释
一` 限点 1尸一 1-0 , . 25 ℃下体外存活期 2一 3 天 . 病毒粒体线形 . 平均长度为 73 6n m , 病叶细胞
质内有风轮状内含体 . 在琼脂免疫双扩散及免疫电镜试验中 , 能与芜曹花叶病毒的抗血清呈阳
性反应 . 根据上述特征 , 卜12 被鉴定为芜普花叶病毒 . 该分离物不 能通过桃蚜
(材夕翻 J eP ” i Cae ) 、 豆蚜 ( A神臼 car c cl vo ur ) 、 碗豆蚜 ( A c y r ht o j iP h o n 沙顺 ) 以非持久性和
半持久性传毒 。 所侧定的 8个品种均能受其感染 .
关扭饲 豌豆 ; 芜份花叶病毒 ; 病毒病
芜普花叶病毒 ( ut o iP m 。跳沁 vi ur s T u M v ) 为世界性分布 、 寄主范围较广 , 危害
十字花科蔬菜的主要病毒 , iF cs he r 等 (l 976 )l 首先报道了 T u M v 通过人工接种可以侵染
豌豆 . rP 。 。 id en i(t 197 s)l 纵豌豆田间病株上分离鉴定了 T u M v , 从而证明豌豆是 T u M v
的自然寄主 . 本文报道了从豌豆上分离得到的 T u M V 研究结果 .
1 材料与方法
.1 毒源 以 1 987 年 3 月来自南京郊区表现褪绿 、 、 斑驳症状的豌豆病株为材料 , 编号为
卜 12 , 经觅色葬单斑分离后繁殖于小白菜品种苏州青上 .
L Z 寄主范围测定 用常规的摩擦接种方法接种供试的健康幼苗 . 接种后的植株置于防
虫温室内 , 观察症状类型 . 对于无症植株 , 再用觅色蔡检索 .
L 3 体外抗性测定 将病毒分离物接种在苏州青上 , 20 天后采收病叶 , 觅色葬作为测定
植物 , 测定钝化温度 、 稀释限点和体外保毒期 .
L 4 蚜虫传毒试验 供试的无毒蚜虫饲养在养虫笼内的健康青菜苗上 . 非持久性传毒是
将饥饿 1~ 2 小时后的蚜虫置于青菜病株上喂 3~ 5 分钟 , 转移至健康的幼苗上 , 每株接
种 10 头蚜虫 . 半持久性传毒试验是将饥俄后的蚜虫 , 在青菜病株上取食 30 分钟 , 再移至
健康幼苗上 , 每株接种 10 头蚜虫 . 蚜虫接种 24 小时后 , 用敌杀死灭蚜 . 供试植株置于防
, 虫温室内 . 20 ~ 30 天后观察记载试验结果 .
L S 种子传毒试验 在豌豆苗期接种 P一 12 分离物 . 将收获的病株种子播种于防虫温室
19 8 9年明 7日收稿 .
.5 2
, 南 京 农 业 大 学 学 报 13 卷
内 , 出苗 20 天后 , 观察症状 , 并用芡色蔡检索全部豌豆植株 .
L ` 病毒拉体及内含体形态观察 取病叶汁液或粗提纯液按常规方法制样 , 用 2%磷钨
酸负染 , 电镜观察粒体形态 . 用小白菜病叶 , 参照 R us so 等人的方法制备超薄切片 , 醋
酸铀和柠橄酸铅双重染色后 , 电镜观察内含体形态 .
L 7 血清学试验 免疫电镜和抗体包被试验均参照 V an R e g e n m o rt cl 描述的方法 , 用健
康的兔血清和大豆花叶病毒s( M V份别作抗血清和抗原对照 . 琼脂双扩散试验按常规方法
进行 , 以青菜病汁液作抗原 , 抗原先用超声波处理 10 分钟 , 后加等t 的 3% 十二烷基磺
酸钠s( D s) , 32 ℃解育 24 小时 , 观察结果 . 血清学试验中的芜脊花叶病毒 (T u M v) 抗血清
由上海农科院植保所衰贤溶先生惠赠 .
L S 病雄提纯及抗血清制备 参照 hc io l 和朱培坤 I’l 的方法 , 略加修改后提纯病毒 , 并参
照朱培坤的方法制备抗血清 .
2 试验结果
.2 1 寄主反应与徒状 汁液摩擦接种 10 科 42 种植物 , P一 12 侵染其中的 8 科 16 种植
物 . 被侵染的小由菜 (价。 ” ica eP k俪。动 、 白菜佃 . hc i。 功出现典型 的花叶症状 , 油菜
.(B ca
月户绍扮功接种吟出现坏死斑 , 后发展为系统坏死 . 豌豆伊臼“ 从 sa vlt um决病后出现褪
绿斑驳 , 蚕耳(八奴 fab a) 出现白色斑驳 , 胡卢巴 ( rT lg o en la foe ~ g aer ~ )出现花叶 .觅色葬 ( C h e n o p口成叨呻~ ar 附cI o la ,) 接种叶枯斑 , 上位叶为系统褪绿斑 , 叶片扭曲 ; 昆诺蔡 c( .q ` 肋司为 系 统褪 绿 斑 ; 甜 菜伽 at , u lga r幼只 产 生 局 部 枯 斑 . 千 日 红
(G om神er 朋 g lu b o sa )和 老 枪 谷 扭脚~ n ht su cau 内 tsu) 均 为 局 部 枯 斑
. 百 日 菊
(Z i~ 勿
e拒g口间和罗吻 (O c如um bac i il cum )均为花叶
. 矮牵牛 (eP 扭。如 h劝 r妇加川 )为花
叶 , 大千生 (招“ 翔* 口 砷ys 口 fo 山 s ) 为局部侵染 . 番杏 (eT t agr on 勿 e 戈刀吧“ )为局部环斑 .
卜 12 不能侵染大豆 、 菜豆 、 绿豆 、 赤豆 、 利马豆 、 扁豆 、 班豆 、 红三叶草 、 决明、 辣
椒 、 普通烟 、 心叶烟 、 番茄 、 蔓陀罗 、 萝 卜、 芹菜 、 黄瓜等植物 .
.2 2 体外抗性 P一 12 的钝化温度为 5 ~ 60 ℃ , 稀释限点 10一 10 弓 , 25 ℃下体外保毒期
6 天。
23 蚜虫传毒试脸 P一12 分离物不能通过挑蚜 、 豆蚜 、 碗豆蚜以非持久性和半持久性方
式传播 。
.2 4 种子传毒试验 从苗期人工接种的碗豆病株上采收种子 , 育苗 50 株 , 未发现病毒病
症状 , 用觅色票检索也未发现带毒病株 , 表明 P一 12 不能经豌豆种子传毒 .
幼 病毒拉体及内含体形态观察 卜 12 的粒体为线形 , 长度分布在 690 ~ 770 n m 之间 ,
平均长度为 7 36 nr (附图一 1) , 病株的细胞质内有风轮状内含体 (附图一2) .
.26 血演学试验 在免痊电镜哪E M )试验中 , 吸附了 uT M V 抗血清的铜网能捕捉到大且
的卜 12 粒体 , 但只能捕捉到少且的 SM V 粒体 , 健康兔血清也只能捕捉到少盆的 T u M V
粒体 (附表 ) .
4 期 (增) 周雪平等 : 傻染碗豆的芜普花叶病毒研究 5 3 -
附表 . 免疫电镜试验结果
3 6以犯 倍下每视野的粒体数 .
抗原
T u M V 抗血清 健康兔血清
t界.
P一 12 37 . 3 5 1 . 2 5
SM V 0
.
7 5
. 表中数字为 20 个视野的平均值.
在抗体包被试验中 , T u M V 的抗血清
对 P一 12 的粒体有 明显的修饰作用 (附图
一
3 ) 对 SM V 粒体无修饰作用 . 健康兔血
清对两者均无修饰作用 .
在 SD S一球脂双扩散试验中 , P一 12 分
离物与 uT M V 抗血清之间能形成乳白色的
沉淀线 .
以上试脸均表明卜 12 与 T u M V 有十分密切的血清学关系 .
峰
附图 卜 12 病毒较休的电债服片
I P一 12 病毒粒体 ( x 360 0 )
2 卜 12 分离物在小白菜病叶中的风轮状内含体 ( x 36 0加)
3 抗体包被试验中 , T u M V 抗血清对 P一 12 粒休有修饰作用 ( x 29 00 )
.27 P
e 12 分离物的提纯及抗血清制备 用 600 9 病叶部分提纯后得到 10 m l病毒悬浮液 .
悬浮掖稀释 50 倍后 , 用紫外分光光度计测定紫外吸收曲线 , 最大吸收峰为 260 n m , 最小
吸收峰为 2 4 0 n m , A , / A 2 80 = 1 . 36 , 每公斤新鲜病叶可提取 17 3 . 3m g 病毒 .
用部分提纯的病毒免疫家兔 , 制备的抗血清的微量沉淀反应效价为 1: 512 , 琼脂双扩
散效价为 :1 8 .
.2 8 碗豆品种对 P一 12 的抗性反应 汁液摩擦接种 8 个豌豆品种 , P一 12 均能侵染发病 ,
但症状表现有差别 . 表现为轻斑驳的品种有甜豌豆 , 矮软 1号 、 食英大豌 ; 表现为重花叶
的品种有启东白皮 、 无须豆尖 、 泰县黑皮 、 上海小青荚和淮阴青皮 . 不同品种的发病率也
, 存在着差异 , 以甜豌豆和矮软 1 号的发病率为最低 , 分别为 12 .5 % 和 25 % , 淮栩青皮为
4 %
, 其余均在 80 % 以上 .
·
5 4
· 南 京 农 业 大 学 学 报3 1 卷
3 讨 论
芜芬花叶病毒口 uM V提引起蔬菜病毒病的主要病原 .T uM V 的寄主范围广 , 至少可以侵染 20 科 202 种植物 , 尤以十字花科和茄科为多 . 已报道 T u M v 可 自然侵染花生【我
豌豆 lz 、 蚕豆闷等 . 人工接种时 , T u M v 还可侵染白羽扁豆 ( L uP in us alb u s) 、 白香草木犀
口才e ilo tus a 乃 a) 和印度草木犀 (材滋耐“ ) , 这 3种寄主均为无症带毒 . 胡稳奇等从蚕豆田
间病株上分离到一个非蚜虫传播的 T u M V 分离物 B一 8 , 它不能由桃蚜等 7 种蚜虫以非持
久性方式从蚕豆病株传至健株闭 . 作者从豌豆上分离得到的 T u M v 分离物 P一 12 , 用桃
蚜 、 豆蚜及豌豆蚜做传毒试验 , 虽然这 3 种蚜虫都是传播 T u M V 的主要介体 , 但均未获
得成功 . 根据寄主范围 、 体外抗性和蚜虫传播等特性 , 卜 12 与 B一 98 十分相似 .
多种由蚜虫非持久性传播的病毒 , 在自然界存在着非蚜虫传播株系或分离物 , 如花椰
菜花叶病毒 c( a M V ) 、 黄瓜花叶病毒 c( M V )、 菜豆黄花叶病毒 (8 Y M V ) 、 芜普花叶病毒
口 u M v) 和烟草蚀纹病毒 (T E v) . G a r d n 亡r 指出 , C a M V 的非蚜虫传株系与蚜传株系在
D N A 的孩基顺序上有一定的差异 . 有的学者认为 , 蚜虫不传株系侵染的植株中缺乏蚜虫
传播所必需的辅助物质似cl p co m p o en nt , H )C . P如en 报道了受 B Y M V 侵染的植物中提
取的辅助物质 H C , 险影响 B Y M v 蚜虫传播外 , 还可影响马铃薯 Y 病毒 ( Pv Y )和烟草脉
斑驳病毒汀u M v )的蚜传18] . D va id 等从 vP Y 和 uT M v 侵染的烟草中提纯得到与辅助物
质活性有关的蛋 白 , 其分子量分别为 53 00 和 58 0 0 , 并证明这些蛋白是病毒基因产
物 1, . 辅助物质可能具有两个专化性作用点 , 一个作用于病毒 , 另一个作用于蚜 虫 口
针 lot .目前 , 对这些蚜虫不传株系或分离物丧失蚜传能力的机制及它们在田间传播的方
式 , 尚了解很少 .
本试验用挑蚜等 3 种传毒能力强的蚜虫不能传播 卜 12 分离物 , 说明该分离物与典型
的 T u M V 有一定的差异 . 但是 , 传播 uT M V 的蚜虫种类约有 50 种 , 是否还有其它蚜虫
可以充当卜 12 的传毒介体 , 尚有待于证实 .
参 考 文 献
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体川 d e s w e r e n cx o u s r od s w iht 7 36n m in len g th . P in w h e l in d u s io n s w er fo u dn in
叮 t o P l a sm o f i fn 忱 t ed l e af ist sue
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mI m un -o
s e r o l o g i c al cl eC tor n m icr o sc o P y 仃S E M ) a n d
SD S一gcl d o u b le d i n恤ia o n t e s st 血 o w ed P一 1 2 p a币c 】e s s t r o n gl y er a e t ed w iht t h e an ibt o d记s
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T u M V
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