全 文 ：药物分析杂志 Ch i n Jh Pa rm A n a l 2008 , 2 8 ( 2 ) 一 2 6 7 一
顶空毛细管气相法测定鸡肝散提取物中有机溶剂残留量 `
王翰华 , 王 向军 , 曾苏 , 姚彤炜` ’
(浙江大学药学院药物分析与药物代谢教研室 , 杭州 3 1 00 58 )
摘要 目的 :建立鸡肝散提取物中 3 种有机溶剂残留量的测定方法 。 方法 :用 H P 一 5 毛细管气相色谱柱 ,顶空进样 , FI D 检测
器 , 以标准溶液加人法进行计一算 。 结果 : 乙醇 、 乙酸乙醋 、 正丁醇的线性范围分别为 12 . 98 一 129 . 8 林g · m L 一 ’ ( : = 0 . 99% ) ,
2 1
.
60
一 2 16
.
0 协g · m L 一 ’ ( r = 0
.
99 9 3 )
,
62
.
7 0
一
6 2 7
.
0 卜g · n l l J 一 ` ( r = 0
.
99 94 )
, 回收率 95 . 5 2% 一 104 , 2 % , 理论板数均大于
1 3000
,相邻峰的分离度均大于 2 , 精密度 、回收率 R S D 均小于 or % 。 结论 : 本方法简单 、 准确 , 灵敏度高 、重现性好 , 适用于鸡
肝散提取物中有机溶剂残 留量的测定 。
关键词 : 鸡肝散提取物 ;顶空进样法 ; 毛细管气相色谱法 ;有机溶剂残留量 ;标准溶液加人法
中图分类号 : R g 17 文献标识码 : A 文章编号 : 02 5 4 一 17 9 3 ( 2 0 08 ) 02 一 0 2 6 7 一 03
D e te r m i n a it o n o f r e s id u a l o r g a l C
s o l v e n ts in E ls h o ltz ia
e x t r a c t s b y c a P Il l a r y g a s c h r o m a t o g r a P h y w iht h e a d s P a e e
b la n da
s a m P l i n g
’
W A N G H
a n 一 h u a , W A N G X i a n g 一 j u n
,
Z E N G S u
,
Y A O T o n g 一 w e i ”
( D
e p a ,l r rl e f 1 L .、 f P }l a ,二 l a 《
` 。 u 一i ( , : ; 1 A n il y * i 、 a n d U ,。 g M 。一a })( , 11、 : , l , C ` , 110 9 0 o f P }, a , : , , a e e u zi c a l S o i e n o e s , Z h旬i a n g U n i v o r s i t y , H a , 19` h《 ) u 3 10 0 5 8 , C l , i n a )
A b s t r a c t o bj e e t i v e
: T o d e v e l o p e h e a d s p a e e g a s e h or m a to g r a p h y m e t h o d fo r t h e d e t e mr i
n a ti o n o f r e s id u a l o r g a n i e
s o l v e , l t s i n E八h o l招 i a 乙l a , 、d a e x t r a e ts . M e t h o d s : T h e s a , n p l e s w e r e inj e e te d i n t o H P 一 5 e a p i l l a叮 e o lt ,m n b y h e a d -
s p a e e s a m p l e r a n 〔1 a n a l y s e d w i th F I D d e t e e to r w i t h s t a n d a r d a d d i t io n m e th o d
.
R e s u l t s : hT
e l i n e a r r a n g e s o f e th a n o l
,
e t ll y l a e e t a t e a n d n
一
b u t a
, 1 0 1 w e r e 12
.
9 8 一 12 9
.
8 卜g · m L 一 ’ ( r = 0 . 9 9 9 6 ) , 2 1
.
6 0 一 2 1 6
.
0 林g · m L 一 ’ ( r = 0 . 9 9 9 3 )
a n d 6 2
.
7 0 一 6 2 7
.
0 林g · m L 一 ` ( r = 0 . 9 9 9 4 ) . 科 l e ar t e o f r e e o 、 e理 w a s i n th e r a n g e o f 9 5 . 8 1% 一 1 0 4 . 2% , T h e
n u rn b e r s o f th e o r e t ie a l p l a t e s w e二 l o o r e t h a n 1 3 0 0 0 a ll d t h e re s o l u t io n s b e t w e e n t h e a dj a e e n t p e a ks w e r e m o r e t h a n
2
.
T h e R S D
o
f p
r e e i s i o n a n d a e e u r a e y w e r e a l l le
s s t }
i a n 10 %
.
C o n c l u s i o n s : T h e m e th o d 15 s im p l e a e e u
r a t e a n d s e n
-
s i ti v e w i th g o o d r e p r o d u e ib i l i t y
.
I t e a n b e u s e d fo l
,
t} l e d e t e r m i n a t io n o f th e r e s i d u a l o r g a n i e s o l v e n ts in lsE h
o l招 ia
乙l a n d a e x t r a e t s ,
K e y w o r d s : E ls h o l t : ia b la
; z d a e x t
r a e t s : h e a d s p a e e i n j e e t io n ; e a p i ll a 翔 g a s e h r o m a t o g r a p h y ; r e s i d u a l o r g a n i e s o l v e n t s ;
s t a n d a rd a d d i ti o n m e t h o d
鸡肝散 ( E ls h o l招 i a bl a ,乙d a B e n r}, )又 名四方篙 、
滇香蕾 、 四棱篙等 , 主要产于我 国西南部温暖地区 ,
分布于云南省南部和东南部 , 贵州和广西等地也有
分布 , 资源丰富 。 鸡肝散为哈尼族民族药 , 其叶 、 花
或全草均可入药 ,用于治疗感冒 、 痢疾 、肝炎等病症 。
鸡肝散的主要成分为黄酮 , 尤以花序中黄酮含量最
高 。 现代科学研究证明鸡肝散总黄酮有保护心肌细
胞的作用 , 对心肌缺血 、 急性心肌梗死等有明显的疗
效 〔 ’ 一 ` 〕 。 鸡肝散提取物提取过程中使用 了乙醇 、 乙
酸乙醋和正丁醇 , 所以测定这 3 种有机溶剂残留量
对控制产品质量 ,确保临床疗效具有重要意义 。 为
此 ,本文首次建立 了顶空毛细管气相法测定鸡肝散
提取物中有机溶剂残留量的方法并进行了考察 ,采
用标准溶液加人法进行计算 ,排除了基质的干扰 ,方
法简单 、准确 ,灵敏度高 ,重现性好 ,分析结果令人满
意 。
1 仪器与试药
A ig le n t 68 90 N 气相色谱仪 , 配置氢火焰离子化
* 浙江省自然科学基金 ( 3 0 26 82 ) ;教育部高等学校博士学科点专项科研基金 ( 20 04 0 3 3 5 0 1 3 ) ;浙江省科技厅基金 ( 20 04 C3 30 0 9 ) [浙江省中
药现代化 专项菜金 (浙财建字 ( 20 0 2 ) 巧 5 号 ) 〕
, , 通讯作者 T e l : ( 0 5 7 1 ) 8 82 0 8 4 0 6 ; E 一 m a i l : y a汉 w @ zj u . e d u . 。 ,、
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 02. 011
一 2 6 8一 药物分析杂志 Ch i n J Ph a r m A n a l2 0 0 8, 2 8 ( 2 )
检测器 ( F I D ) ; A g i l e n t 7 6 9 4 E 顶空进样仪 ; H p C h e n 卜
tS a it o ns 软件 。 鸡肝散提取物由浙江大学药学院天
然药物化学教研室提供 ; 乙醇 、 乙酸 乙醋 、 正丁醇均
为分析纯 ,水为超纯水 。
2 色谱条件
色谱柱 : H p 一 5 毛细管柱 ( 5 % p h e n y l m e t h y l 5 1-
l o
x a n e , 3 0 m x 3 2 0 林m ) : 载气为高纯氮气 (纯度 )
9 9
.
9 9 9% )
,流速 6 . 4 m L · m i; 1 一 ` ; 柱温 3 5 ℃ , 气化
室温度 18 0 ℃ ,检测室温度 2 0 0 ℃ ;检测器 : FI D , 氢
气流速 4 5 . 0 n 1L · m i n 一 ’ ,空气流速 4 5 0 m L · m in 一 ` :
尾吹气 (氮气 ) 流速 2 0 . 0 , n L · m i n 一 ’ ;分流 比 3 : l 。
A g i l e n t 7 6 9 4 E 顶空进样仪 ,平衡温度 8 0 ℃ , 加热 3 0
m in
, 自动顶空进样 。
3 溶液制备
3
.
1 定位溶液 取乙醇 、 乙酸乙酷和正丁醇适量 ,
分别加水适量 , 作为定位溶液 。
3
.
2 对照品溶液 量取乙醇 0 . 4 m L 、 乙酸乙酷 0 . 8
m L 和正丁醇 2 m L ,精密称定 , 置 10 0 mI J 量瓶中 ,加
水稀释至刻度 , 摇匀 , 作为对照品储备液 ;分别精密
量取对照品储备液 0 . 2 , 0 . 5 , 1 . 0 , 1 . 5 , 2 . 0 m L ,置 50
m L 量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液
l
,
2
,
3
,
4
,
5
。
3
.
3 供试品溶液 取鸡肝散提取物约 2 9 ,精密称
定 ,加水 ,超声使溶解 , 转移至 10 0 m L 量瓶中 ,加水
定容 ,摇匀 , 即得 。
3
.
4 标准溶液加人 液 精密量取供试 品溶液 2
m L
,置 10 m l」 顶空瓶中 ,分别精密加人 “ 3 . 2 ” 项下不
同浓度的对照品溶液 1 m L ,加盖密封 , 同法加入水 1
m L
,作为空白 。
4 方法与结果
4
.
1 系统适用性 取加人对照品溶液 5 的标准溶
液加人液 ,按上述色 一谱条件进行检测 ,色谱图见图 1
一 A , 在所得的色谱图中 , 各组分峰的理论塔板数均
大于 13 0 0 0 , 各个相邻峰的分离度均大于 2 。
4
.
2 线性关系考察 取 “ 3 . 4 ” 项下系列标准溶液
加人液 ,按上述色谱条件进行检测 。 以加人的对照
品溶液浓度 X 为横坐标 ,组分峰面积 Y 为纵坐标绘
制标准曲线 ,进行线性回归 ,结果乙醇 、 乙酸乙醋 、正
丁醇的回归方程分别为 :
Y = 3 8 6X 一 0
.
0 8 8 r = 0
.
9 9 9 6
Y = 6 0 9
.
9 9X 一 0
.
17 8 3 r = 0
.
9 9 9 3
Y = 3 9 5
.
1 8 X + 10 9
.
4 1 厂 = 0
.
9 9 9 4
线性范围分别为 12 . 9 8 一 12 9 . 5 , 2 1 . 6 0 一 2 16 . 0 ,
r we 一 ~~ ~ ~ ~ 丫~ ~ ~~ ~ ~ ~
0 2 4 6 亡/ m i n
图 1 标准溶液加人液 ( A ) 、 供试品 ( )B 色谱图
Fi g 1 H e ad
s p a `二e 一 G C e h lo m a t o g r a m s o f s t a n d a r d s o l u 一io n a ( ld e d l iq u i〔 l
( A ) a n d s a m p l
e
( B )
1
. 乙醉 ( e 吸h a n o l ) 2 . 乙酸 乙酚 ( e t h y l a e e t a te ) 3 . 正丁醇 ( n 一 bu l a n o l )
6 2
.
7 0 一 6 2 7
.
0 林 g · m L 一 l 。
4
.
3 精密度试验 取加人对照品溶液 2 , 4 , 5 的标
准溶液加人液 , 平行 3 份 , 按上述色谱条件进行检
测 ,记录色谱图 , 以算得 的浓度计算 R SD , 结果见表
1
。 同法平行操作 3 d , 以算得的浓度计算 日间精密
度 ,结果见表 1 。
表 1 精密度试验结果 ( R S D % , n = 3)
T a b 1 eR
s u l t s o f P er e is io n ( R S D %
, n 二 3 )
中浓 J变( .1 1 1` 1011。
〔 o ll c o n tar li o rl )
高浓度 ( il 沙
` o 一z e e n
atr l i
o n
)
有机溶剂
(
、 o l v e .I I )
低浓度 (一, w
` ,` , T ,` e 「I t。 , Lio ; 】)
日内 日间
(
In t r a 一
( i
: l re r -
日内
(
1 ,l t ar _
「1间
( i
n* e r -
d a y )
. l a y )
。 la y )
。 la y ) 。l a y )
。l a y )
乙醇 ( e th a ,、。 ,I ) 1. 0 7 . 0 4 . ] 8 . 4 0 . 5 5 . 7
乙酸乙酷 一 6 8 . 6 一 8 . 6 ] . 5 4 . 0
(
e 一1l y l a ` e 一a [ e )
正丁醇 ( n 一 Io u t a n o l ) 0 . 7 9 . 8 0 . 9 8 . 4 一 4 8 . 5
4
.
4 最低检测限 将对照品溶液 1 逐步稀释 , 在信
噪比为 3 ( S / N = 3) 作为有机溶剂的检测限 ;测得乙
醇 、 乙酸乙醋 、 正丁醇的检测限分别为 1 . 58 , 0 . 23 ,
1
.
62 林g
·
m L
一 ’ , 相当于在样品中能检测 到的最低
量为 7 9 . 2 0 , 1 1 . 5 3 , 8 1 . 2 0 协g · g 一 ’ 。
4
.
5 回收率试验 取加人对照品溶液 2 , 4 , 5 的标
准溶液加人液 , 平行 3 份 ,按 上述色谱条件进行检
测 ,记录色谱图 , 以标准溶液加人法计算的检测量减
去本底 , 与加人量相 比算得回收率 ,结果见表 2 。
药物分析杂志 C hin J p ha rm A n a l 0 0 8 2, 2 5 ( 2 ) 一 2 69 一
表 2 加样回收试验结果 ( n = 3)
T a b 2 R e s u l t s o f r e e o
v e yr
r a t e
高浓度 ( 1 ,g },
。 o l l o e , 1一ar ti吸,n )
有机溶剂
(
。 o lv e o l )
低浓度 ( l o w 中浓度 ( 1l li d〔i l e
〔 o t le e n t r a t i u r l )
。 o n 、 e n t r a一l u rl )
平均回收率
( m
e a ,1
er t o v e卿 ) / 叹
日5 1)
/ %
平均回收率
F SD
(
【n e a n
/ %
er o ve yr ) / %
平均回收率
R S D
(
,x le a rl
/%
二。 、 yr ) / %
乙醇 ( e 一11 a : l u l )
乙酸乙酉旨
(
e * I, y l a 、 e一a 一。 )
l王丁醇
(
n 一 Lu 一a n o l )
1
.
5 99
.
7 3 4
.
8 99
.
99 0
.
5
95
.
8 1 1
.
6 99
.
57 99
.
7 4 }
.
5
10 4 2 4
.
3 98
.
89 2
.
5 10 4 3
.
2
4
.
6 样品测定 取 “ 3 . 3 ” 项下供试品溶液和 “ 3 . 4 ”
项下标准溶液加人液 ,按上述色谱条件进行检测 ,供
试品色谱图见图 1 一 B 。 取平均值作为测定结果 , 由
公式 cx = △cx / 〔( A ` : / A, ) 一 1〕计算 。 式中 cx 为供试
品中正丁醇的浓度 ; A二为供试品 中正丁醇的色谱峰
面积 ;△cx 为所加人的标准溶液正丁醇的浓度 ; A ` :为
加人标准溶液后正丁醇的色谱峰面积 。 结果正丁醇
的含量为 1 . 13 8% ( R SD 为 2 . 1% , n = 6 ) , 乙醇 、 乙
酸乙酉旨未检出 。
5 讨论
5
.
1 20 05 年版中国药典新增加了标准溶液加人法
测定供试品中某个杂质或主成分的含量 。 特别说明
当采用顶空进样技术时 , 由于供试品和对照品处于
不完全相同的基质中 , 故可采用标准溶液加人法 以
消除基质效应的影响 ; 当标准溶液加人法与其他定
量方法结果 不 一致 时 , 应 以标准加入法结果为
准 L’ 」。 本实验也曾用外标法对鸡肝散提取物中有
机溶剂残留量进行过测定 ,发现采用外标法测定时 ,
由于受基质效应影响较大 ,线性斜率偏大 、 回收率偏
差较大 ,所以最后采用标准溶液加人法对鸡肝散提
取物中有机溶剂残留量进行了测定 。
5
.
2 考察药品中是否存在于扰残留溶剂测定 的共
出峰物质 ,需要分别配制供试品溶液和对照品溶液 ,
用 2 支不同极性的色谱柱分别测定有机溶剂的残留
量 〔6 〕。 本试验使用 了 H P 一 5 和 D B 一 62 4 两根毛细
管柱 ,结果 2 个柱系统的测定结果一致 ,表明样品中
没有共出峰干扰 ; 同时发现低极性的 H P 一 5 毛细管
柱就能使上述 3 种溶剂很好地基线分离 , 因此选择
了 H P 一 5 毛细管柱 。
5
.
3 试验考察了 70 , 80 , 90 ℃ 3 个顶空温度对样品
测定 的影响 , 结果表明样品在 3 个顶空温度下均稳
定 ,但是正丁醇在 70 ℃ 时挥发不完全 ,而在 80 ℃和
90 ℃时挥发完全 。 因此试验选择 80 ℃作为顶空温
度 。 选择较低的顶空温度是为了排除热降解的干
扰 [“ 〕。
5
.
4 根据 2 0 05 年版中国药典有关规定 , 乙醇 、 乙酸
乙醋 、 正丁醇均属 于第三类残 留溶剂 , 为低毒性溶
剂 ,限度为 0 . 5% 川 。 实验 中的最低检测浓度均低
于上述限度 , 因此本法能有效控制以上残留溶剂 。
6 结论
采用顶空毛细管气相法测定鸡肝散提取物中 3
种有机溶剂残留量 ,色谱条件分离良好 ,用标准溶液
加人法排除了基质的干扰 。 本方法简单 、 准确 , 灵敏
度高 、 重现性好 , 可作为鸡肝散提取物中有机溶剂残
留量的测定方法 。
参考文献
1 L i n g H y
,
L o u y j
,
P功t e e t i v e e fe e t o f t o t al fl av o n e s fr o m E l sh o l此 i a
bl a n da ( TF E B )
o n n l y o e ar d i
a
l i
s e h
e
m i a i n d u o e d b y
e o
or n a 尽 o e e lu s i o n
i n e a n i n e s
·
J E t h 月 pl jh a
~
e o l
,
2 004
,
94 ( l )
:
1 0 -
2 L i n g H y
,
oL
u yj
.
OT tal fl
a v o n e s
iof m E IS h
o l琉a bal n da r e d u e e i l l几 l e l
s i z e d哪 n g a e u t e m y o e adr ial i s e h e m i a b y i n hi b i t i n g m y o e ar d i a l 叩 o p -
t o s i s i n ar t s
.
J Eht m , h
a
n
a e o l
,
2 0 05
,
10 1 ( l 一 3 ) : 16 9
3 L i n g H Y
,肠 u Y J , W u H H , e t a l . T o t a l fl a v o n e s 肠m E l s h o l tz i a b l a n d a
r e
d u
〔二e i n f u , t s i z e a n (1 im p or v e h e art fu
n e t i o n d
u
ir n g
a e u te m y o e ar d i
a
l
i n fa cr t i o n b y i n h ib i t i n g
n 一y o e ar d i a l a p o p to , 15 i n e a n i n o s
.
J A e t a aC
几 il -
。 l , 2 00 5 ;的 ( 3 ) : 2 9 5
4 L O U H o ,19 一 g a n g (楼洪刚 ) , H E Qi a o 一 J u n (何俏军 ) , W U H o n g -
h a i ( 吴洪海 ) . E x p e r i m e n t a l r e s e a r ( h o n t o 一al fl a v o n e ofr m lsE ho l , -
蕊 a bla dn a 娜 i n s t X i o n gb i Sy呷 t〔〕m (鸡肝散总黄酮抗胸痹证的实
验研究 ) . J hC i n eM d aM “ r (中药材 ) , 2 0 0 3 , 2 6 ( 12 ) : 8 7 5
5 e h P (中国药典 ) . 2 00 5 . v o l l (二部 ) : Ap p e n d i x (附录 ) V E
6 QI N L i (秦立 ) , H u e h a n g 一 q i n (胡昌勤 ) , L l u w e n 一 y i n g (刘文
英 ) . R e s e a r e h o n Lh e i n t e rfe re n e e i n d e t e rm i n a l i o n 。 f r e s id u al 5 0 1-
V e n Ls i n ph a rm
a C e u t i e al s b y h e a d
s
p a
e e 群 5 e h ro m a t o邵a p h y (顶空气
相色谱法测定药品中残留溶剂的影响因素考察 ) . hC in J hP a 7nI
An a l (药物分析杂志 ) 20 0 5 , 2 5 ( 7 ) : 82 3
7 C h P (中国药典 ) . 2 0 0 5 . V o l fl (二部 ) : Ap p e n d sx (附录 ) 姗 p
(本文于 20 06 年 1 月 6 日收到 )