全 文 ：[ 收稿日期] 　2007-08-06
[ 基金项目] 　国家自然科学基金(30672666)
[ 通讯作者] 　＊肖永庆 ,Tel:(010)84040221;E-mai l:Xheqi@163.
com
·药理·
藏红花酸糖苷-1 、藏红花酸药效学比较
李　文 ,张　村 ,陈　红 ,殷小杰 ,王　岚 ,肖永庆＊
(中国中医科学院中药研究所 ,北京　100700)
　　[ 摘要] 　目的:通过对栀子炮制前后含量变化较大的两种色素类成分藏红花酸糖苷-1(crocin-1)和藏红花酸(crocetin)进行
药效学比较 ,探讨药理作用变化的物质基础。方法:采用炎症 ,凝血 , 化学性肝损伤和血液流变学等方法 ,观察两种成分的作用
差别。结果:两种成分对小鼠炎症和四氯化碳造成的肝损伤无明显作用;藏红花酸糖苷-1 中 ,大剂量和藏红花酸各剂量能明显
降低血瘀症大鼠高切变率下的血液黏度 、缩短凝血酶原时间(PT);藏红花酸中 、大剂量同时缩短活化部分凝血活酶时间
(APTT)。结论:藏红花酸糖苷-1、藏红花酸抗炎 、保肝作用不明显 , 对高切变率下的全血黏度有明显降低作用 , 缩短 PT 。藏红花
酸大剂量凝血作用强于藏红花酸糖苷-1。提示藏红花酸与栀子炒焦后增强止血作用有关。
[ 关键词] 　藏红花酸糖苷-1;藏红花酸;抗炎;肝损伤;肾上腺素;血瘀证;血液流变学;血液凝固
[ 中图分类号] 　R285.5　　[文献标识码] 　B　　[ 文章编号] 　1005-9903(2007)12-0024-04
Comparative Pharmacodynamic Study on Crocin-1 and Crocetin
LI Wen , ZHANG Cun , CHEN Hong , YIN Xiao-jie , WANGLan , XIAO Yong-qing＊
(Institute of Materia Medica , China Academy of Chinese Medical Sciences , Beijing 100700 , China)
[Abstract] 　Objective:To explore the pharmacodynamical active substances of Gardenia jasminds ELLis , the
comparative pharmacodynamic study was carried out on crocin-1 and crocetin.Methods:To observe the different
pharmacological influence of crocin-1 and crocetin on anti-inflammatory , blood coagulation , hepatic injury and
hemorheological changes.Results:Neither crocin-1 nor crocetin has shown obvious effects of anti-inflammaory or
protective effect against hepatic injury induced by CCl4 in mice.Crocin-1 and crocetin can decrease the blood viscosity
under high shear stress , and curtail prothrombin time(PT).Both medium and high concentration groups of crocetin can
curtail the thrombin time and activated partial thromboplastin time(APTT).Conclusions:Neither Crocin-1 nor crocetin
has shown obvious effects on anti-inflammatory ,hepatic protection.Both components Can reduce the whole blood viscosity
and PT significantly.Crocetin of high concentration showed strong effects on promoting coagulation than crocin-1.The
results suggest that crocetin may be the substance matter of hemostasis action of fructus gardeniae.
[ Key words] 　 crocin-1;crocetin;anti-inflammatory;hepatic injury;adrenalin;blood stasis syndrome;
hemorheology;coagulation
　　为进一步探讨生栀子与焦栀子相关药理作用变
化的物质基础 ,在对生栀子和焦栀子 50%乙醇洗脱
部位及 95%乙醇洗脱部位药理作用研究基础上 ,我
们对这两个部位中炮制前后含量变化最大的色素类
成分藏红花酸糖苷-1和藏红花酸进行了相关的药理
作用比较研究 ,现将实验结果总结如下。
1　材料
1.1　实验动物　昆明种小鼠 ,雌雄各半 ,体重(21 ～
23)g 。由北京大学医学部动物中心提供 ,合格证号:
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第 13卷第 12 期
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中国实验方剂学杂志
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SCXK(京)2002-2001。Wsitra大鼠 ,雄性 ,体重(180 ～
200)g 。购于解放军军事医学科学院实验动物中心 ,
合格证号 SCXK-(军)2002-001。
1.2　药物制备　实验所用药材购于江西泰和 ,经本
所胡世林研究员鉴定为茜草科植物栀子(Gardenia
jasminoides Ellis)的干燥成熟果实。焦栀子:取净选
后的栀子药材(2.5 ～ 3)kg ,置带式干燥机上 ,干燥
(15 ～ 30)min ,干燥温度(70 ～ 75)℃,履带转速:22 r·
min
-1 ;然后置旋转炒药机(设定温度 420℃,转速 32
r·min-1)炒制(4.5 ～ 5)min ,出锅 ,平摊放凉 ,包装即
得。取生 、焦栀子果实粗粉各 10 kg ,以 95%乙醇渗
漉提取 ,收集渗漉液减压回收乙醇至浸膏状 ,上硅胶
色谱柱 ,分别用石油醚(60 ～ 90)℃, 75%和 95%乙醇
洗脱 ,收集各部位洗脱液 , 减压回收溶剂。焦栀子
95%乙醇部位上硅胶色谱柱 ,用 CHCl3-MeOH(50∶1)
开始洗脱 ,合并第(47 ～ 51)份 ,再上色谱柱纯化得藏
红花酸。生栀子 95%乙醇部位上硅胶色谱柱 , 用
CHCl3-MeOH(10∶1)开始洗脱 ,合并第(307 ～ 415)份
减压回收溶剂 ,再上硅胶色谱柱 ,用 CHCl3-MeOH(6∶
1)开始洗脱 ,合并第(42 ～ 97)份 ,重结晶即得藏红花
酸糖苷-1。
1.3　主要试剂 　丙氨酸氨基转移酶(ALT)批号
060311 ,门冬氨酸氨基转移酶(AST)批号:060324 ,北
京北化康泰临床试剂有限公司生产 。凝血酶原时间
测定试剂盒(PT)批号:1050291 ,活化部分凝血活酶
时间测定试剂盒(APTT)批号:111007 ,纤维蛋白原测
定试剂盒(FIB)批号:136003 , 试剂由上海太阳生物
技术公司生产。盐酸肾上腺素注射液(1 mL:1 mg)
批号:06020141 ,北京市永康药业有限公司生产。
1.4　仪器　ZS-3半自动生化分析仪(北京中生生物
高技术公司生产);LXJ-II离心机(上海医用分析仪
器厂生产);LBY-W6A白清洗旋转黏度计 , LBY-NW1
毛细管黏度计 ,PRECIL C2000-4血凝仪(以上 3种仪
器为北京普利生公司生产);KH-120A微量毛细管离
心机(日本产)。
2　实验方法与指标
2.1　对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响[ 1] 　选健康
小鼠 64只 ,雌雄各半 ,体重(20 ～ 22)g ,按体重分为 8
组 ,即空白对照组 、吐温对照组 、藏红花酸糖苷-1 3
个剂量组和藏红花酸 3个剂量组(见表 1)。ig给药 ,
共5 d。第 6 d药后 30 min于小鼠右耳正反两面涂
抹二甲苯各 20μL , 1 h后用钢铳于两耳同一部位打
下相同大小耳片称重 ,以两耳片重量之差表示炎症
程度。
2.2　对腹腔注射醋酸(HAc)所致小鼠腹腔毛细血管
通透性增高的影响[ 2] 　小鼠分组与给药同 2.1。第
6 d药后 30min ,各鼠 ip 1%的HAc溶液0.1mL·g-1 ,
于注入HAc后30 min iv 0.5%伊文斯蓝0.1mL·g-1 ,
再 20 min 将小鼠脱颈椎处死 , ip生理盐水 5 mL ,轻
揉数下 , 剪开腹部 , 用吸管吸出洗涤液 , 3 000 r·
min
-1 ,离心15 min;取上清液于 590 nm 比色测定 ,以
OD值高低表示通透性强弱 。
2.3　对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用[ 5] 　分
组与给药同 2.1。第 6 d药后 1 h ,除对照组外 ,其余
各组均 ip 1%四氯化碳花生油溶液 10 mL·kg-1 ,20 h
后摘眼球取血 ,3 000 r·min-1离心 15 min ,分离血清 。
按试剂盒说明测定ALT ,AST。
2.4　对血瘀症大鼠血液流变性和凝血功能的影
响[ 4] 　按体重将大鼠随机分成 8组 ,空白对照组 、模
型组 、藏红花酸3个剂量组(见表5),藏红花糖苷-1 3
个剂量组(见表 5)。动物每天给药1次 ,空白对照组
和模型组给等量常水。连续给药 4 d ,第 5 d早上开
始造模 。除对照组外 ,均先经颈部皮下注射盐酸肾
上腺素 0.001 mL·g-1(1 mg·kg-1),2 h后将造模各组
大鼠分批放置于(0 ～ 4)℃冰水中 5 min ,2 h后 ,再次
皮下注射盐酸肾上腺素1 mg·kg-1 ,血瘀症模型建立
完毕。1 h后各组给药 ,第 2 d药后 1 h ,大鼠以 20%
乌拉坦麻醉 ,由腹主动脉采取枸橼酸钠抗凝血(1∶
9)。部分血液1 000 r·min-1离心 10 min 制备富血小
板血浆(PRP), 取出一定量备用。再将剩余部分
3 000 r·min-1离心 15 min ,制备贫血小板血浆(PPP)。
将 PRP与 PPP按一定比例混合 ,用血小板聚集仪将
透光度调至4 000左右 , (此时血小板数为 3 ×912·
L
-1),以ADP 为诱导剂 ,用比浊法测定一定时间内
血小板的最大聚集率。部分全血用作全血黏度和红
细胞压积测定。剩余血浆用作血浆黏度测定 ,并按
照凝血实验测定试剂盒说明书测定 FIB ,PT ,APTT。
2.5　统计方法　实验数据以( x ±s)表示 ,结果以
SPSS 12.0软件包进行统计。
3　结果
3.1　对小鼠急性炎症反应的影响　藏红花酸糖苷-
1与藏红花酸对二甲苯所致小鼠耳廓炎症反应和醋
酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高炎症反应没有
抑制作用 ,两种成分之间无明显差异 。结果见表 1。
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表 1　对小鼠急性炎症的影响( x±s , n=8)
组别 剂量(mg·kg-1)
左右耳重差
(mg) 腹腔液 OD值
空白对照组 — 13.4±2.26 0.721±0.205
溶剂对照组 — 13.3±4.03 0.843±0.295
藏红花酸糖苷-1组 67.5 14.1±7.55 0.910±0.198
藏红花酸糖苷-1组 135.0 15.8±4.40 0.794±0.280
藏红花酸糖苷-1组 270.0 13.6±4.69 0.946±0.271
藏红花酸组 22.5 13.4±3.74 0.789±0.145
藏红花酸组 45.0 15.0±4.69 0.860±0.176
藏红花酸组 90.0 13.0±5.73 0.851±0.194
3.2　对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用　造模
后模型组血清ALT ,AST 含量明显增高 ,与对照组比
较 P <0.01 ,但藏红花酸糖苷-1和藏红花酸两种成
分对四氯化碳所致小鼠肝损伤 ALT ,AST 升高没有
保护作用 ,两样品之间无明显差别 。结果见表 2。
3.3　对大鼠血液流变性的影响　造模后血瘀症大
鼠各项指标较对照组均有明显升高 。藏红花酸糖
苷-1和藏红花酸两种成分对高切变率(200 s-1)下的
全血黏度有明显的降低作用 ,与模型组比较有显著
性差异(P <0.05 , P <0.01),藏红花酸中剂量组对
低切变率下的全血黏度也有明显降低作用 ,与模型
组比较 P<0.05。两样品之间差别不明显。结果见
表 3。
表 2　对小鼠肝损伤保护作用的影响( x ±s , n=8)
组别 剂量(mg·kg -1)
ALT
(U·L -1)
AST
(U·L-1)
空白对照组 — 65.3±11.32) 156.1±20.62)
模型组 — 301.6±2.4 283.3±5.1
藏红花酸糖苷-1组 67.5 302.8±1.2 286.0±3.7
藏红花酸糖苷-1组 135.0 303.3±5.1 285.6±8.6
藏红花酸糖苷-1组 270.0 302.0±1.5 285.0±4.3
藏红花酸组 22.5 301.8±2.7 288.9±3.5
藏红花酸组 45.0 300.9±1.9 285.8±3.3
藏红花酸组 90.0 300.6±2.8 291.0±5.0
　　注:与模型组比较2)P<0.01
表 3　对大鼠血液流变学指标的影响( x±s , n=7)
组别 剂量(mg·kg-1)
细胞压积
(%)
血浆黏度
(mPa·s-1)
血小板聚集
(%)
全血黏度(mPa·s-1)
10 s-1 200 s-1
空白对照组 — 40.7±0.902) 1.27±0.271) 45.5±3.662) 4.997±0.2412) 3.252±0.152)
模型组 — 44.2±1.28 1.41±0.28 54.9±11.4 7.481±0.851 4.060±0.267
藏红花酸糖苷-1 67.5 42.7±2.81 1.36±0.27 47.0±9.1 6.827±0.911 3.800±0.2541)
藏红花酸糖苷-1 135.0 42.8±3.25 1.33±0.28 50.3±13.8 6.947±1.452 3.773±0.3971)
藏红花酸糖苷-1 270.0 43.8±2.07 1.26±0.29 57.5±11.0 6.945±0.368 3.635±0.3002)
藏红花酸组 22.5 43.9±2.07 1.34±0.30 59.5±12.6 6.668±0.572 3.770±0.1451)
藏红花酸组 45.0 42.3±1.54 1.29±0.28 51.7±11.5 6.322±0.2991) 3.682±0.1252)
藏红花酸组 90.0 43.0±1.66 1.30±0.27 55.7±9.07 6.683±0.962 3.774±0.1741)
　　注:与模型组比较1)P<0.05 , 2)P<0.01, 3)P<0.001(下同)
3.4　藏红花酸糖苷-1和藏红花酸对血瘀症大鼠凝
血功能的影响　两种成分均能使血瘀症大鼠的纤维
蛋白原(FIB)含量有所增加 ,明显缩短 PT ,藏红花酸
大剂量的凝血作用强于藏红花酸糖苷-1(P <0.05 ,
P <0.01),同时藏红花酸中 、大剂量还能缩短 APTT ,
(P<0.05)。结果见表 4。
4　讨论
环烯醚萜类化合物与二萜色素类化合物是栀子
的主要成分 ,也是主要的生物活性物质[ 5] 。栀子炮
制后药效和功能主治发生了变化 ,其根源是炮制后
内在物质基础化学成分发生了变化[ 6] 。藏红花酸糖
　　
表 4　对血瘀症大鼠凝血功能的影响( x±s , n=7)
组别
剂量
(mg·kg-1)
FIB
(g·L-1)
PT
(s)
APTT
(s)
对照组 — 2.51±0.152) 14.3±0.292) 24.3±3.682)
模型组 — 3.85±0.72 15.5±0.70 29.3±2.65
藏红花酸糖苷-1 67.5 4.12±1.37 14.8±0.51 28.8±5.48
藏红花酸糖苷-1 135.0 4.44±0.22 14.5±0.982) 28.2±1.99
藏红花酸糖苷-1 270.0 4.43±0.13 14.4±0.392) 27.6±2.05
藏红花酸组 22.5 4.57±0.26 14.3±0.462) 27.9±1.92
藏红花酸组 45.0 4.36±0.22 14.2±0.582) 27.4±1.711)
藏红花酸组 90.0 4.28±0.36 12.8±0.833) 27.1±0.721)
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2007年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.12
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苷-1是生栀子中的主要色素类成分 ,而栀子炒焦后
色素成分主要以藏红花酸为主 。药代动力学研究发
现 ,大鼠口服藏红花酸糖苷-1吸收较差 ,经体内肠道
菌群作用后 ,转化成藏红花酸糖苷-2(Croein 2)、糖苷
-3(Crocin 3)和藏红花酸(Crocetin)等 ,最终以藏红花
酸的形式被吸收 。藏红花酸糖苷-1血浆代谢血药浓
度-时间曲线下的面积(AUCt)远远小于藏红花酸。
说明口服藏红花酸比藏红花酸糖苷-1更利于吸收 ,
由于体内对该成分吸收浓度较高 ,药理作用也表现
的相对强些。
本实验结果提示 ,两种成分对于二甲苯和醋酸
所造成的急性炎症没有明显抑制作用 ,同时对四氯
化碳造成的肝损伤作用不明显 。但两种成分均能较
明显降低血瘀症大鼠高切变率下的全血黏度 ,缩短
凝血酶原时间。由于高切变率下的全血黏度的高低
可以间接反应红细胞的变形情况 ,所以两种成分都
具有降低血液黏稠度 ,改善红细胞变形性和促进血
液凝固的作用。由于焦栀子中藏红花酸含量较高 ,
止血功效强于藏红花酸糖苷-1。这也是栀子炒焦后
增强了止血作用的原因之一 ,也是临床用于凉血止
血时直接选用焦栀子的原因所在。
[参考文献]
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[ J] .山东中医学院学报 , 1994 , 18(6):416.
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社 , 1993 , 306.
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[ 4] 　毛腾敏 , 林建和.“血瘀”病例模型探索(一)[ J] .北京
医科大学学报 , 1985 , 17(4):246-248.
[ 5] 　车双辉 , 杜琪珍 , 钟立人.栀子成分的开发研究进展
[ J] .天然产物研究与开发 , 2002 , 14(5):57-59.
[ 6] 　黄榕 , 叶嫫嫫 ,梁冬.中药栀子炮制的研究概况[ J] .海
峡药学 , 2003 , 15(1):37-39.
归知糖疽颗粒对实验性糖尿病大鼠皮肤溃疡的影响
洪晓华 ,张金妹 ,刘建勋＊
(中国中医科学院西苑医院基础研究室 ,北京　100091)
　　[ 摘要] 　目的:观察归知糖疽颗粒对实验性糖尿病大鼠皮肤溃疡模型创面愈合率 、病理组织学 、血糖及小鼠微循环障碍的
影响。方法:1.链脲佐菌素(STZ)腹腔注射造成大鼠糖尿病模型再以外科手术方法制作皮肤损伤;用医学病理图象分析仪计算
创面愈合率 ,用血糖检测仪检测血糖值 , 创面皮肤常规 HE 染色光镜观察病理变化。 2.末次给药后 30 min 经尾静脉注射高分
子右旋糖酐诱发小鼠耳廓微循环障碍模型 ,在显微镜下观察不同时段血液流态的改变。结果:归知糖疽颗粒 0.81 , 1.62 , 3.24 g
·kg-1组治疗性灌胃给药 4 周糖尿病大鼠皮肤溃疡模型创面愈合率明显升高 , 分别为 88.55%、89.49%和 89.69%(均 P <
0.001);血糖值明显降低(均 P <0.05);改善溃疡创面病理改变 , 胶原纤维细胞增多 ,炎性细胞减少。 归知糖疽颗粒灌胃给药 3
d , 1.17 g·kg , 4.68 g·kg-1组在 20 min , 30 min 时段明显改善小鼠耳廓微循环障碍的血液流态(P<0.05～ 0.01)。 结论:归知糖疽
颗粒有促进糖尿病大鼠皮肤溃疡模型皮肤溃疡创面愈合 、降低血糖 、改善微循环障碍作用。
[ 关键词] 　糖尿病;皮肤溃疡;血糖;微循环
[ 中图分类号] 　R285.5　　[文献标识码] 　B　　[ 文章编号] 　1005-9903(2007)12-0027-04
Effects of Guizhi Tangju Granules on Dermal Ulcer in Diabetic Rats
HONGXiao-hua , ZHANGJ ing-mei , LIU Jian-xun＊
(Department of Basic Theory ,Xi Yuan hospital , China Academy of Chincse Medical Sciences , Beijing 100091 , China)
[ 收稿日期] 　2007-06-12
[ 通讯作者] 　＊刘建勋 , Tel:(010)62875599-6176
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.12
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