全 文 :亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific Traditional Medicine
Vol. 5 No.12%
Dec. 2009
第 5 卷 第 12期
2009 年 12 月
收稿日期:2009-09-10
作者简介:朱彦殊(1978-),女,宁夏人,宁夏医科大学助理实验师。
沙枣花中总黄酮的超声波提取及鉴别
朱彦殊,姚 遥,王基云,王 妍
(宁夏医科大学,宁夏 银川 750004)
摘 要:目的:为充分利用沙枣植物资源,避免资源的浪费,探讨沙枣花中总黄酮的提取及鉴别方法。 方法:采
用超声波乙醇浸提法从沙枣花中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行鉴定,并用分光光度法测定含
量。 结果:测得样品中总黄酮的含量1.02mg / L,回收率为102.8%,其纯度和产率均较高。 结论:该方法采用全物
理过程,无任何污染,是提取沙枣花中黄酮类物质的有效途径。
关键词:超声波提取;沙枣花;总黄酮;鉴别
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1673-2197(2009)12-0013-02
沙枣花为胡颓子科植物沙枣 (Elaeagnus angustifolia.)
的花,主产于西北地区。宁夏沙枣树抗旱耐碱,具有很强的
生命力,也是宁夏防风固沙的重要植物。 椐宁夏中药志记
载,沙枣花主要含山奈酚、花白素、脂肪油和少量挥发油,
当地百姓利用它增香、驱虫、平喘止咳 [1]。 目前,对沙枣花
的研究多是花香精油的提取和应用 [2-7],但也有人研究沙
枣花中黄酮成分,已有用水、乙醇分别从沙枣花中提取黄
酮类化合物的报道 [8,9],但这几种方法提取的时间长、工艺
复杂、提取效率较低。近年来,超声技术应用于提取植物中
的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究
已有报道 [10-11],表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成
分的特点。研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加
速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的
有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提
取时间,且还可避免高温对提取成分的影响 [12],但超声技
术应用于提取沙枣花中黄酮类物质的研究尚未见报道,本
研究采用超声波提取沙枣花总黄酮及鉴别。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
KQ5200DB 型数控超声波清洗器 (超声工作频率
40KHz, 江苏省昆山市超声仪器有限公司);UV-7225N 可
见分光光度计 (北京瑞利);SHB-III 循环水式多用真空泵
(郑州长城科工贸有限公司)。
1.2 试剂
95%乙醇;无水甲醇;氢氧化钠 AR;三氯化铝 AR;盐
酸 AR;氨水 AR;乙酸镁 AR;镁粉 AR;正丁醇 AR;冰醋酸
AR;醋乙酸乙酯 AR;芦丁标准品(宁夏医科大学药学院提
供;沙枣花采自宁夏医科大学旁沙枣树林。
2 方法与结果
2.1 总黄酮成分提取
取新鲜沙枣花,烘干,粉碎。 称取沙枣花粉末约 6g,加
80mL95%乙醇 , 超声波提取 2.5h, 抽滤 。 滤渣再加
80mL95%乙醇, 超声波提取 2.5h, 抽滤, 合并 2 次滤液,
滤液过滤后,减压浓缩,蒸干溶剂后,用甲醇定容于 100mL
量瓶中,摇匀,作为供试品溶液。
2.2 测定方法
依据以芦丁为对照品测定沙枣花中总黄酮的含量,加
入铝离子试剂,同时控制适宜 pH 值,使黄酮化合物与铝
盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3 总黄酮的含量测定
2.3.1 标准溶液配制
精密称取在 120℃干燥至恒重的芦丁对照品 7mg,置
100mL 量瓶中,用甲醇溶解,定容,摇匀,即得(每 1mL 中
含芦丁 0.09mg)。 精密吸取芦丁对照液 (0.90mg / mL)
1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL 于 10.00mL 量瓶中, 各加 5%AlCl3
甲醇溶液 1.00mL,摇匀,放置显色 5min,加甲醇至刻度摇
匀。 在 510nm 波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓
度为横坐标绘制标准曲线 , 根据上表得回归方程 :A=
0.001+0.0099C,r=0.9991,线性关系良好。 (见表 1、图 1)
表 1 紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度的结果
浓度 C/mg·mL-1 吸光度 A
0.9 0.010
1.8 0.019
2.7 0.027
3.6 0.037
4.5 0.053
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第 5 卷 第 12期
2009 年 12 月
The Extraction and Identification of the TotalFlavanone of Flowers of
Ningxia Elaeagnus angustifolia L.by UltrasonicWave
Zhu Yanshu,Yao Yao,Wang Jiyun,Wang Yan
(Ningxia Medical College,Yinchuan 750004,China)
Abstract:Objective:To make use of the resources of the Flowers of Ningxia Elaeagnus angustifolia L.,avoid wasting and approach the
ex-traction of total flavanone and identification of the leaves Ningxia Elaeagnus angustifolia L.Methods:The flavonoidswere extracted by
ethanol as the solvent from the Flowers of Ningxia Elaeagnus angustifolia L. with ultrasonicwave.Spectrophotome try was used to
determine and extract the content of the flavanone from the Flowers of Ningxia Elaeagnus angustifolia L..Results:By this method the
content of the total flavanone of the Flowers of Ningxia Elaeagnus angustifolia L. was 1.02 mg/mL and the rate of recovery was 102.8%.
Conclusion:This text provides the extraction and purification methods to get the outcome. The purity of the flavanone is very high.This
method is a purely physical process and has no pollution.It is an ideal way to extract the flavanone of Flowers of Ningxia Elaeagnus
angustifolia L..
Key Words:Ultrasonic wave treatment;Flowers of Ningxia Elaeagnus angustifolia L.;Total flavanone;Identification
图 1 芦丁 UV标准曲线
2.3.2 样品测定
精密吸取供试品溶液 2.00mL 于 10mL 量瓶中,加 5%
AlCl3甲醇溶液 1.00mL,摇匀,放置显色 5min,加甲醇至刻
度摇匀。 同时精密吸取 5%AlCl3甲醇溶液 1.00mL于 10mL
量瓶中,用甲醇定容,作样品空白,在 510nm 波长处测定
吸收度。 波长的选择取样品液适量,经 AlCl3显色后,以试
剂为空白参比液在 420~700nm 波长范围测定络合物的吸
光度,络合物于 510nm 波长处有最大吸收,故测定时选用
此波长。 按标准曲线的制备方法测定吸光度 A=0.011,根
据回归方程;A=-0.001+0.0099C, 计算样品中总黄酮的含
量 C=1.02mg / mL。
2.3.4 回收实验
精密量取样品液 2.00mL 加入标准芦丁对照品
2.00mL(0.9mg / mL),同前样品测定方法操作测定吸光度,
求出回收率为 102.8%。
2.4 总黄酮的鉴别
2.4.1 颜色反应
紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤纸上,在可
见光下呈灰黄色,紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。 三氯
化铝反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加 1%AlCl3乙醇溶
液,吹干。在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑
点。 盐酸—镁粉反应: 取乙醇提取液 1mL 于试管中加镁
粉,再加入浓盐酸数滴(一次加入),在泡沫处呈紫红色。
2.4.2 纸层析
取样品溶液 10μL点在滤纸上。 用正丁醇—醋酸—水
(4:1:5,v/v)为展开剂,上行展开 5h,取出晾干。喷 1%氯化
铝—乙醇溶液,吹干后于紫外光下,可见荧光斑点。
3 讨论
实验结果表明 , 本实验方法工艺简单 , 回收率为
102.8%,提取效率高于传统方法,利用本文所提供的超声
波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。 超声
波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此
方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄
酮类物质的途径,具有广阔的应用前景。 沙枣在宁夏地区
广为种植,资源丰富,本文实验结果表明,可应用超声波乙
醇浸提法从沙枣花中提取黄酮类物质,并且沙枣花中含有
较为丰富的黄酮。 因此,超声波辅助提取法可作为从沙枣
花中提取黄酮类物质的提取方法,沙枣花具有广泛的开发
和利用价值,值得综合利用,加强资源开发。
参考文献:
[1] 邢世瑞.宁夏中药志[M].宁夏:宁夏人民出版社,1990:674.
[2] 王妍,李玲,连松刚,等.顶空—固相微萃取气质联用分析宁夏
沙枣花的香气成分[J].中草药,2007,38(11):1627.
[3] 刘晔玮,邸多隆,王勤,等.沙枣花挥发油的化学成分及其指纹
图谱的研究[J].香料香精化妆品,2003,3:11-13.
[4] 阎鸿建,王青,韦凤英 .沙地枣花挥发油和净油化学成分研究
[J].有机化学,1988,8(4):346-351.
[5] 李兆琳,陈宁,薛动渊,等.沙枣花挥发油化学成分的研究[J].
高等学校化学学报,1989,10(8):804-808.
[6] 吕金顺.沙枣花挥发性和半挥发性成分的分析[J].林业科学,
2007,43(3):122-126.
[7] 刘晔玮,邸多隆,王勤.沙枣花挥发油的化学成分及其指纹图谱
的研究[J].食品科学,2003,24(7):111-113.
[8] 石玉平,王永宁,郭珍.沙枣花中黄酮类化合物的提取[J].南京
林业大学学报:自然科学版,2005,29(2):106-108.
[9] 王永宁,石玉平,郭珍.沙枣花中黄酮类化合物对羟基自由基的
清除研究[J].青海医学院学报,2003,24(4):281-283.
[10] 郭国瑞,谢永荣,钟海山,等.超声波提取银杏黄酮苷的工艺研
究[J].赣南师范学院学报,2001(3):45.
(责任编辑:胡 静)
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