全 文 ：Ｊ．ＳＨＡＮＸＩ　ＡＧＲＩＣ．ＵＮＩＶ．（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
学报（自然科学版）２０１１，３１（４） ００２８０２
收稿日期：２０１１－０５－１０　　　修回日期：２０１１－０６－１５
作者简介：张慧荣（１９７０－），女（汉），山西太原人，工程师，主要从事园林病虫害防治方面的研究。
通讯作者：曹挥，教授，硕士生导师。Ｔｅｌ：０３５４－６２８８３４４；Ｅ－ｍａｉｌ：ＣｈＬＳＱ＠１６３．ｃｏｍ。
基金项目：山西省青年基金（２０１００２１０３１－１）；山西农业大学科技创新基金（２００９０１９，２００９０１３）
地肤子活性成分对山楂叶螨酯酶同工酶的影响
张慧荣１，刘素琪２，王海香３，郝晓娟２，莫海波２，曹挥２
（１．太原市园林局，山西 太原０３０００１；２．山西农业大学 农学院，山西 太谷０３０８０１；３．山西农业大学 林学院，山西 太谷０３０８０１）
摘　要：实验研究了地肤子活性成分ＫＦＣＥ－２处理后，山楂叶螨体内的酯酶同工酶的影响。从聚丙烯酰胺凝胶电泳结
果来看，在处理组中，没有检测到新的其它酶带。并且其酯酶酶带Ｅ１、Ｅ２ 比对照组的颜色要浅，而且图谱面积小；而
Ｅ３ 在处理的１２ｈ后完全消失。酯酶同工酶电泳图谱经ＵＶＰ２凝胶成像系统扫描分析，从强度变化上可以看出，Ｅ２、
Ｅ３ 带的活性从处理的４ｈ（ＬＡＮＥ－ａ＇）开始活性就在逐渐减弱，尤其是Ｅ３ 带的活性在处理的１２ｈ后（ＬＡＮＥ－ｃ＇）就完全
被抑制。此外，在迁移率的变化上，处理组Ｅ１、Ｅ２ 带的迁移率有逐渐增大的趋势；Ｅ３ 带的迁移率在能观察到的两个时
间内，有减小的趋势。这表明ＫＦＣＥ－２可能通过抑制山楂叶螨体内的酯酶同工酶的活性，并且通过特异性的结合，改变
部分酯酶的活性结构，来降低其解毒代谢。这也表明了地肤子作为新型植物源农药具有良好的开发前景。
关键词：地肤；山楂叶螨；酯酶同工酶
中图分类号：Ｓ４３６．６１９　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１６７１－８１５１（２０１１）０４－０３２１－０５
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｋｏｃｈｉａ　Ｓｃｏｐａｒｉａ（Ｌ．）Ｓｃｈｒａｄ　ｏｎ　Ｓｅｖｅｒａｌ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　ｉｎ　Ｔｅｔ－
ｒａｎｙｃｈｕｓ　Ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｒｏｎｇ１，ＬＩＵ　Ｓｕ－ｑｉ　２，ＷＡＮＧ　Ｈａｉ－ｘｉａｎｇ３，ＨＡＯ　Ｘｉａｏ－ｊｕａｎ２，ＭＯ　Ｈａｉ－ｂｏ２，ＣＡＯ　Ｈｕｉ　２
（１．Ｔａｉｙｕａｎ　Ｇａｒｄｅｎｓ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｔａｉｙｕａｎ　Ｓｈａｎｘｉ　０３０００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｈａｎｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ　Ｓｈａｎｘｉ　０３０８０１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｙ，Ｓｈａｎｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ　Ｓｈａｎｘｉ
０３０８０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ　ｉｎ　Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　Ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｋｏｃｈｉａ　Ｓｃｏｐａｒｉａ（ＫＦＣＥ－２）ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＡＧＥ）ｉｎｄｉｃａ－
ｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｎｅｗ　ｂａｎｄ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｍｉｔｅｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＫＦＣＥ－２，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｏｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｂａｎｄｓ　Ｅ１ａｎｄ　Ｅ２ ｗｅｒｅ
ｌｉｇｈｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｐｓ　ｗｅｒｅ　ｓｍａｌｅｒ．Ｔｈｅ　ｂａｎｄ　ｏｆ　Ｅ３ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ
ｗｈｅｎ　ｔｒｅａｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　１２ｈ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ＰＡＧＥ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｕｓｅｄ　ＵＶＰ２ｇｅｌ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ，ｗｅ
ｆｏｕｎｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅ２ａｎｄ　Ｅ３ｂａｎｄｓ　ｔｅｎｄｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｗｅａｋ　ａｆｔｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　４ｈ（ＬＡＮＥ－
ａ＇），ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂａｎｄ　Ｅ３ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｅｎｔｉｒｅｌｙ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　１２ｈ（ＬＡＮＥ－ｃ＇）．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｈｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅ１ａｎｄ　Ｅ２ｂａｎｄｓ　ｔｅｎｄｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｅｎｌａｒｇｅｄ　ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅ３ｂａｎｄ　ｗａｓ　ｇｒａｄｕａｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ．
Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＫＦＣＥ－２ｃｏｕｌｄ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｄｏｔｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　Ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　ｂｙ　ｒｅｓｔｒａｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　ｂｙ　ｃｈａｎｇｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐａｒｔｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
ｗｈｉｃｈ　ｍｅａｎｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｈａｓ　ｇｏｏｄ　ｐｒｏｓｐｅｃｔ　ｏｆ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｋｏｃｈｉａ　Ｓｃｏｐａｒｉａ　ａｓ　ａ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｋｏｃｈｉａ　Ｓｃｏｐａｒｉａ；Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　Ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ；Ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ
　　酯酶（ｅｓｔｅｒａｓｅ，ＥＳＴ）是生物体内一类重要的
解毒酶系，其活性的变化会直接影响昆虫对杀虫剂
中毒和解毒过程［１］。高希武等曾对蚜虫（Ａｐｈｉｓｇ－
ｏｓｓｙｐｉ）、棉铃虫（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａ）、小菜蛾
（Ｐｌｕｔｅｌａｍａｃｕｌｉｐｅｎｎｉｓ）等昆虫进行研究发现，有机
磷农药和植物次生性物质通过对昆虫体内羧酸酯
酶的抑制，在一定程度上抑制了昆虫体内的解毒代
谢［２～４］，了解酯酶活性的变化规律在杀虫药剂和昆
虫（螨类）解毒代谢间关系的研究中具有重要意义。
山楂叶螨（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　Ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　Ｚａｃｈｅｒ．）个体
DOI:10.13842/j.cnki.issn1671-8151.2011.04.010
小，繁殖快，种群密度高，为害重，是危害果树生产的
主要害螨之一。目前喷施化学农药是有效防治山楂
叶螨的主要手段，由于其世代繁殖频繁和世代重叠
严重，一年中用药次数明显高于其它害虫的防治，并
且在用药过程中往往是单一品种的大量重复使用，
导致其抗药性逐年增加，防治费用也是逐年加大。
地肤Ｋｏｃｈｉａ　Ｓｃｏｐａｒｉａ （Ｌ．）Ｓｃｈｒａｄ．，俗名扫
帚菜，扫帚苗，属藜科地肤属一年生草本植物，是我
国的传统野菜，也是一种传统的中药材［５］。地肤提
取物有很好的杀螨活性［６～８］。地肤主要以其子入
药，因此我们以地肤子为材料，对其活性成分进行
分离，并研究了其活性成分对山楂叶螨体内的酯酶
的影响，旨在探索地肤子活性成分对螨类的影响，
为新型植物性杀螨剂的开发提供依据。
１　材料与方法
１．１　供试材料
　　试验所用地肤子采自山西农大校园内（１０月
初），将植物材料洗净后在室内阴干（约２５℃），放
入恒温箱内（４０～４５℃）烘干，磨碎，过６０目筛，放
入冰箱中储藏备用。
山楂叶螨为室内饲养的敏感品系：养虫室的温
度（２５±１）℃，相对湿度（５０±１０）％，光照（Ｌ∶Ｄ
为１８ｈ∶６ｈ）。
１．２　地肤子活性成份的分离
将植物干粉加入５倍量的氯仿，室温下（２５±
２）℃浸提３次，每次３～５ｄ，过滤，合并３次的提取
液减压浓缩，得氯仿提取物（ＫＦＣＥ）。
称取ＫＦＣＥ　１０ｇ，采用常压开管柱层析法进行
柱层析分离。洗脱后的流分经检测合并，得到１１
个流分，其中以流份２杀螨活性最高，将其减压浓
缩至稠状得ＫＦＣＥ－２。
将ＫＦＣＥ－２用少量氯仿充分溶解，再用水稀释
成浓度为１ｇ·Ｌ－１的药液作为处理药剂。
１．３　症状观察
用叶片浸渍法处理试螨，每隔２ｈ观察其中毒
症状的表现。
叶片浸渍法（Ｌｅａｆ　ｄｉｓｋ　ｄｉｐ　ｍｅｔｈｏｄ）在９ｃｍ
的培养皿中放入大小一致的吸水海绵，海绵上平铺
一层吸水纸，摘取平展的苹果叶，洗净，叶面朝下平
贴在吸水纸上，每一叶片挑入成螨，待成螨稳定后，
剔除死亡和受伤个体，保证叶片有成螨３０头，用镊
子夹取叶片浸药液５ｓ，吸去多余药液。再平铺于
叶片上置于养虫室内。
１．４　酯酶同工酶电泳
酶液制备：分别在用药剂、清水对照（用喉头喷
雾器喷雾）处理后４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１６ｈ、２０ｈ、２４ｈ取
山楂叶螨雌成螨１００头，加０．２５ｍＬ生理盐水冰浴
中匀浆后，１０　０００ｒ·ｍｉｎ－１，４℃下离心１５ｍｉｎ，取上
清液备用。另设一个不做任何处理的新鲜螨对照。
采用不连续的垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳［９］：
分离胶浓度７．５％，ｐＨ　８．９；浓缩胶浓度３．３％，ｐＨ
６．７；Ｔｒｉｓ－甘氨酸高离子浓度电极缓冲液，ｐＨ　８．３；上
样量８０μＬ，溴酚兰作前沿指示。预电泳电流为２０
ｍＡ·板－１，样品进入分离胶后电流增至４０ｍＡ·
板－１，６℃稳流电泳４ｈ。
酯酶同工酶染色液以ｐＨ　６．４磷酸缓冲液配
制。内含底物０．０５％醋酸－α－萘酯（７０％丙酮溶
解）、０．１％醋酸－β－萘酯（１００％丙酮溶解）以及染色
剂１％坚牢蓝ＲＲ盐，３７℃染色约１０ｍｉｎ。染色完
毕后胶板以７％醋酸固定，电泳图在 ＵＶＰ－凝胶成
像系统下进行扫描分析。
２　结果与分析
２．１　ＦＣＥ－２症状观察
　　ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨雌成螨的中毒作用大致
可划分为以下几个阶段：
（１）静止期（０～４ｈ）：少数螨不停地运动，但大
部分静止，足呈伸展放松状态，无明显反应；
（２）兴奋期（４～８ｈ）：站立不稳，频繁爬动，步
态失调，运动不停，四处扩散；
（３）痉挛期（８～１６ｈ）：过度兴奋，身体倾斜，运
动失调，原地打转，身体重心抬高，足颤抖，有黑色
排泄物，产卵量急剧下降；
（４）死亡期（１６～２４ｈ）：身体逐渐收缩至死亡。
ＫＦＣＥ－２处理成螨后，先是静止不动，经过短
暂地兴奋后，虫体大量进入麻痹期，经过长达８个
小时的麻痹期后，进入死亡期，而且产卵量急剧下
降，蜕皮大量减少，有黑色排泄物。
２．２　ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨体内酯酶同工酶电泳
结果
　　ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨酯酶同工酶作用后的凝
胶电泳图谱见图１。
ＫＦＣＥ－２处理山楂叶螨后，在对照组的凝胶电
泳图上可明显地看到３条酯酶酶带：Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３，处
理组的凝胶电泳图上可明显地看到２条酯酶酶带：
Ｅ１、Ｅ２，而Ｅ３ 只在处理的４～８ｈ可以看到，１２ｈ后
消失。从对照组与处理组的酶带变化的情况来看，
２２３ 山 西 农 业 大 学 学 报（自然科学版） ２０１１
Ｅ１、Ｅ２ 的变化主要表现在颜色的深浅和面积的大
小上，处理组的这两条酶带比对照组的颜色要浅，
而且图谱面积小，尤其在处理的１６ｈ后，这种直观
效果更为明显；而Ｅ３ 在颜色深浅和面积大小上的
变化还要清晰，在处理组的４ｈ～８ｈ，Ｅ３ 的面积就
急剧地减少，但仍能观察到，１２ｈ后，Ｅ３ 完全消失。
此外，在处理组中，没有检测到新的其它酶带。这
表明了ＫＦＣＥ－２处理山楂叶螨后，强烈地抑制了其
体内酯酶的活性，解毒作用减弱，导致有毒物质在
其体内的积累，引起中毒。
图１　ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨酯酶同工酶活性的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＫＦＣＥ－２ｏｎ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ
　　图中ａ＇－ｆ＇为用ＫＦＣＥ－２处理山楂叶螨雌成螨４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１６ｈ、２０ｈ、２４ｈ后酯酶活性变化，ａ－ｆ为对照组处理４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１６
ｈ、２０ｈ、２４ｈ后酯酶活性变化，０为新鲜对照。
ａ＇－ｆ＇ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｏｎ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｚｙｍｅ　ｏｆ　Ｔ．Ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１６ｈ、２０ｈ、２４ｈ；ａ－ｆ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ＣＫ　ｏｆ　ｎｏ　ＫＦＣＥ－２；０ｉｓ　ＣＫ　ｏｆ　ｌｉｖｉｎｇ　ｍｉｔｅｓ．
２．３　酯酶同工酶ＵＰＶ－凝胶成像系统扫描结果
分析
　　酯酶同工酶电泳图谱经 ＵＶＰ２凝胶成像系统
扫描分析，结果见图２和表１，可以看出：未经ＫＦ－
ＣＥ－２处理的山楂叶螨的扫描分析均可清楚检测到
Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３ 条酯酶同工酶带。经ＫＦＣＥ－２处理山楂
叶螨的扫描分析均可检测到Ｅ１、Ｅ２ 带，但Ｅ２ 带在
处理的１２ｈ后就检测不到了。
表１　ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨酯酶同工酶活性扫描分析数据
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｄａｔａｓ　ｏｆ　ｓｃａｎ　ｏｆ　ＫＦＣＥ－２ｏｎ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ
强度
Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
迁移率
Ｐｉｘ
Ｅ１ Ｅ２ Ｅ３ Ｅ１ Ｅ２ Ｅ３
ＬＡＮＥ－ａ　 １１９　 １２１　 １０１　 ８７　 １５０　 ２００
ＬＡＮＥ－ｂ　 １１４　 １０７　 ８５　 ９５　 １５０　 １９７
ＬＡＮＥ－ｃ　 １００　 １０７　 １０７　 ８１　 １６１　 １９３
ＬＡＮＥ－ｄ　 １１１　 １１９　 ７８　 ９５　 １６０　 １８４
ＬＡＮＥ－ｅ　 １２２　 １１２　 ７７　 ９２　 １６２　 １９２
ＬＡＮＥ－ｆ　 １０５　 １０８　 ７３　 ９９　 １５２　 １９０
ＬＡＮＥ－０　 １２３　 １４２　 １２４　 ９６　 １５２　 ２０４
ＬＡＮＥ－ａ＇ １２３　 ９１　 ６９　 ９７　 １５０　 １７８
ＬＡＮＥ－ｂ＇ １０９　 ８７　 ４６　 １０２　 １５１　 １８４
ＬＡＮＥ－ｃ＇ １０１　 ６７　 １０６　 １５７
ＬＡＮＥ－ｄ＇ ９２　 ６５　 １０１　 １６４
ＬＡＮＥ－ｅ＇ ８６　 ６１　 １１９　 １６７
ＬＡＮＥ－ｆ＇ ７８　 ４４　 １１７　 １７７
３２３３１（４） 张慧荣等：地肤子活性成分对山楂叶螨酯酶同工酶的影响
图２　ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨酯酶同工酶活性扫描分析结果
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｃａｎ　ｏｆ　ＫＦＣＥ－２ｏｎ　ｅｓｔｅｒａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ
４２３ 山 西 农 业 大 学 学 报（自然科学版） ２０１１
　　从观察到的３条酶带的强度变化可以看出，与
对照组相比，Ｅ１ 带的活性在ＫＦＣＥ－２处理后的４ｈ
（ＬＡＮＥ－ａ＇）有所激活，螨体加强了解毒代谢，８ｈ
（ＬＡＮＥ－ｂ＇）、１２ｈ（ＬＡＮＥ－ｃ＇）的活性变化不大，但从
１６ｈ开始到２４ｈ（ＬＡＮＥ－ｄ＇～ＬＡＮＥ－ｆ＇），其活性逐
渐减弱，活性受到抑制。Ｅ２、Ｅ３ 带的活性从处理的
４ｈ（ＬＡＮＥ－ａ＇）开始活性就在逐渐减弱，尤其是Ｅ３
带的活性在处理的１２ｈ后（ＬＡＮＥ－ｃ＇）就完全被抑
制。
在迁移率的变化上，处理组与对照组相比，在
相同的处理时间，处理组Ｅ１、Ｅ２ 带的迁移率有逐
渐增大的趋势，尤其在处理的２０ｈ（ＬＡＮＥ－ｅ＇）和２４
ｈ（ＬＡＮＥ－ｆ＇），表现更为明显；Ｅ３ 带的迁移率在能观
察到的两个时间内，有减小的趋势。谱带的迁移距
离与相应酶的分子质量呈正相关，因此处理组与对
照组相比，Ｅ１、Ｅ２ 带对应的同工酶分子质量变小，
而Ｅ３ 带对应的同工酶分子质量变大，酶分子结构
已发生改变。
３　结论与讨论
酯酶普遍存在于生物体内，在对许多种昆虫的
研究中证明其在杀虫药剂代谢中起重要作用，当外
源有害物质进入生物体内时，它会以水解蛋白和结
合蛋白两种方式积极参与解毒代谢。同时酯酶具
有广泛的底物专一性和重叠性，在杀虫药剂代谢中
不需要额外能量即可催化酯类化合物水解，这种高
效的解毒代谢体系在生物体与外界不良环境因子
的斗争过程中很可能发挥重要作用［１０～１１］。
从本实验的结果可以看出，ＫＦＣＥ－２处理山楂
叶螨后，其酯酶同工酶的活性受到了不同程度的抑
制，并且出现了Ｅ３ 酶带的消失，这表明ＫＦＣＥ－２可
能通过抑制山楂叶螨体内的酯酶同工酶的活性，并
且通过特异性的结合，改变部分酯酶的活性结构，
来降低其解毒代谢，导致其中毒，最终死亡。
为了更好地了解ＫＦＣＥ－２对山楂叶螨的影响，
我们对药剂处理后试螨的症状进行了观察，发现其
中毒过程可分为四个时期：静止期（０～４ｈ）：少数
螨不停地运动，但大部分静止，足呈伸展放松状态，
无明显反应；兴奋期（４～８ｈ）：站立不稳，频繁爬
动，步态失调，运动不停，四处扩散；痉挛期（８～１６
ｈ）：过度兴奋，身体倾斜，运动失调，原地打转，身
体重心抬高，足颤抖，有黑色排泄物，产卵量急剧下
降；死亡期（１６～２４ｈ）：身体逐渐收缩至死亡。
从酯酶同工酶电泳结果和药剂处理后试螨的
中毒症状结果可以看出，试螨进入痉挛期的时间正
好是其体内的Ｅ３ 带消失的时间，而引起痉挛的主
要原因可能是中枢神经系统轴突传导被阻断，周缘
神经正常突触传递受阻严重［１２］。酯酶的种类很
多，乙酰胆碱酯酶是其中重要的一类，它主要存在
于中枢神经灰质、交感神经节等处，能够迅速水解
兴奋性神经递质乙酰胆碱而保持神经突触传递的
正常功能，ＫＦＣＥ－２处理山楂叶螨后，其活性可能
会被抑制，而它的被抑制会引起胆碱在突触处的积
累，从而导致神经传导阻断，而消失的Ｅ３ 带是否就
是乙酰胆碱酯酶，仍需进一步研究。
参　考　文　献
［１］宗静，张帆，孙光芝，等．繁殖寄主对赤眼蜂羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的影响［Ｊ］．昆虫学报，２０００，４３（Ｓ１）：７０－７６．
［２］高希武，赵颖，王旭，等．杀虫药剂和植物次生物质对棉铃虫羧酸酯酶的诱导作用［Ｊ］．昆虫学报，１９９８，４１（Ｓ１）：５－１１．
［３］王 旭，高希武，郑炳宗，等．有机磷药剂对棉铃虫羧酸酯酶的抑制作用［Ｊ］．昆虫学报，１９９８，４１（Ｓ１）：１２－１８．
［４］李腾武，高希武，郑炳宗，等．不同地区小菜蛾种群羧酸酯酶的毒理学性质研究［Ｊ］．昆虫学报，１９９８，４１（１）：２６－３３．
［５］曹瑞玲，王兴邦，梁莉红，等．浅谈地肤的价值与栽培技术［Ｊ］．中国农业信息，２００３（３）：３３．
［６］侯辉，赵莉蔺，师光禄，等．地肤提取物杀螨活性的研究［Ｊ］．植物保护，２００４，３０（３）：４２－４５．
［７］侯辉，赵莉蔺，曹挥，等．地肤中杀螨活性成分的提取与初步分离［Ｊ］．山东农业科学，２００４（１）：４７－４８．
［８］曹挥，王有年，刘素琪，等．地肤提取物对山楂叶螨体内几种酶活性的影响［Ｊ］．林业科学，２００７，４３（２）：６８－７２．
［９］王金胜．农业生物化学技术［Ｍ］．太原：山西科学技术出版社，１９９７：７２－７４．
［１０］深见顺一．农药实验法：杀虫剂篇［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９４：３７３－３７９．
［１１］张宗炳，樊德方．杀虫药剂的环境毒理学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９８９：１８－２５．
［１２］Ｋｏｎｄｏ　Ｍ，Ｈａｄａ　Ｔ，Ｆｕｋｕｉ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｎｚｙｍｅ～ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）ｆｏｒ　Ａｌｅｕｒｉａ　ａｕｒａｎｔｉａ　ｌｅｃｔｉｎｒｅａｃｔｉｖｅ　ｓｅｒｕｍ　ｃｈｏｌｉｎｅｓ－
ｔｅｒａｓｅ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｌｉｖｅｒ　ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａ～ｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，１９９５，２４３：１－９．
（编辑：武英耀）
５２３３１（４） 张慧荣等：地肤子活性成分对山楂叶螨酯酶同工酶的影响