全 文 ：第念 O卷
19 9 0 年
第2 期
5月
植 物 病 理 学 报
AC A TP H Y TP H O O A TL OC C G I I N I S A A
Vol
。
20
May
No
。
2
9 19 0
北京引致大丽菊花叶症的三种病毒
李汝刚
(北京农业大学植物病毒室 )
提要 大丽菊 ( D al h i a pin n t a aCv a. )花叶病已成为花卉生产出口 的严重障碍 。作者于 19 8 6 一
19 8 7年在表现花叶的北京大丽菊上分离到两种形态大小不同的病毒分离物 , 电镜检测到一直径较大
的球形病毒 , 分别定为 B D M一 l 、 B D M一 2和 B D M一 3 。 经寄主反应 、 体外抗性、 粒体形态 、 血清
学等鉴定 , 病毒分离物B D M一 1是黄瓜花叶病毒 CM V ; B D M一 2是烟草花叶病毒 T M V , B D M一 3
是大丽菊花叶病毒 D a M V 。 从寄主反应 、 粒体大小 、 衣壳蛋白氨基酸组份及沉降特性综合分析石 ,
B D M一 1可能是 C M V的另一株系 C M V一 D P 。
大丽菊 ( D . 户洲。 fa C a v . ) 病毒病的危害严重影响了大丽菊的观赏价值 。 根据已 知 报
道〔1 , 2 , 3 , 4〕有大丽菊花叶病毒 ( D a M 、 ) 、 黄瓜花叶病毒 ( C人IV ) 、 番茄斑萎病毒 ( T SW 丫 )
和烟草线条病毒 ( T S丫 ) 。 此外 , 还从大丽菊上检测到烟草环斑病毒 、 番茄环斑病毒 、 烟草
脆裂病毒及马铃薯 Y病毒 。 其中 , D a M V 和 C M V 经常复合浸染 【’ 1 , 引致大丽菊花 叶 病 , 是
大丽菊上最流行的两种病毒 。 彭加木等 ;列 曾在新疆大丽菊花叶中发现 D a M V粒 子 。 作 者 自
1 9 8 6年以来 , 对北京大丽菊病毒病进行了系统调查并得到形态大小不 同的三种病毒。 研究结
果如下 。
材料和方法
(一 ) 材料
天坛 、 中山公园及颐和园内表现脉带 、 班驳及轻微花叶的叶一 j一 }` 。
(二 ) 方法
病毒生物纯采用常规摩擦 、 液氮冷冻组织和浓缩叶片汁液三种方法孩种 , 结合单斑分离进厅犷。
1
. 病毒分离物 B D M一 1 B D M一 1的提纯参考蔡祝南〔 “ 〕的方法 。 用 J E M一 1 0 0 5 电镜观察粒体形态测
量大小 , 电镜 一误差用商业标准样品 (庵研商事株式会社 ) 校止 。 用岛青 190 型分光光度计测紫外吸收 , 并根据
0 D 2 60 和 O D 28 。值计算病毒产量 。 用 日立 2 82 型分析超离心机测沉降系数。 病毒复制型 R N A ( ds 一 R N A )
的提取参考 V al v c r d e 〔 ’ 〕的方法 , 采用聚丙烯酞胺凝胶 电泳银染色显示 ds 一R N A带。 病毒衣壳蛋白氨 基
酸组成测定根据郑巧兮等 〔 。 〕及 B a n o r of t等 〔 ’ 〕的方法 , 在日立 835 一 50 型氨基酸自动分析仪上进行 。 小白
鼠腹水抗体制备用腹腔注射 , 三次共 l . s m g 。 双扩散和微量沉淀测抗体效价。血清反应用 1% 琼脂糖双 扩散
进行 , 3种抗血倩 : C M V黄化株系抗血清 (张成良提供 ) , 番茄不孕病毒 T A V 及花生矮化病毒 P S V抗血清
(蔡祝南提供 ) 。 用 C M V 日本番茄矮化株系 (杨希才提供 ) 作阳性对照 。
2
.病毒分离物 B D M一 2 对 B D M一 2的测定均采用常规方法包括生物反应 、 体外抗性、 病毒提纯 、 电镜
观察、 紫外吸收 、 病毒衣壳蛋白亚基分子量及血清学 。
3
. 病毒分离物 B D M一 3 B D M一 3的提纯参考 B r u nt C ’ 〕的方法 , 提纯材料为田间发病的脉 带 花叶比卜
· 本工作在裘维蕃教授指导下进行并得到杨莉副教授 、 蔡祝南 副研究员及本校电镜室 的帮助 , 在此谨表谢意 .
· 作者原为北京农业大学研究生 , 现在 中国农科院生 物技术研究中心工作 .
11砚 植 物 病 理 学 报 :。春
片 。 一次或二次差速离心后电镜观察粒体形态并测量大小 。 血清反应采用 1% 琼脂糖双扩散及免疫电镜
( I E SM )装饰法进行 。 常规方法制片 、 染色观察病毒 B D M一 3诱导的内含体。
表 1B D M一 1在不同寄主上的反应
L 0 O
结果与分析
( 一 )病毒分离物B O从一 1
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黎落ó葬莱色诺生芡昆墙甜黎 科
黄西蚕见葫芦科L. 5
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豆豆 科
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叫门.
又豆莱豌
1
. 寄主反应 接种 7科2 种
( 品种 )植物中 , E D五I一 1侵染 6
科 14 种 (品种 )植物 (详见表 l ) 。
其中 , 在番茄上引起系统坏死 ,
不侵染斑豆 、 蔓陀罗 、 辣椒 、 百
日菊等 。
2
。 体外抗性 B D M一 l 钝化温
度 70 O C 以上 , 体外存活 期 2 天
室温 ) 。
3
. 理化特性 B D M 一 l 球形 ,
直径 2 7 n 二 ( 1 0 2个粒子的平均值 )
(
’图 1 ) 。紫外吸收呈典型的核蛋白
吸收曲线 , A Z 。 。 / A Z 。 。 二 1 . 6 7 5 ,
病毒产量为 5 3 1 : n g / k 、病叶 。分析
超离心得到一典型左右对称的吸
收峰 , 沉降系统 5 2。 。 w 二 92 5 .
4
. 谱带 图 2 表 明 , B D入压-
l d 、 R N A有 4条明显的谱带 ( C I ,
C Z
,
C 3
,
C 4 ) 其 位 置 类 似 于
C M V ds R N A谱带 . 无卫星 R N A ,
C 4 a来源不详。
5
。 衣壳蛋白亚基分子量及其
氮基酸组份 B D M一 1 衣 壳 蛋 白
亚基 有 一 种 多 肤 , 分 子 量 为
2 s 5 0 0 D
. 由 2 7种 2 3 0个 氮基 酸 组
成 (表 2 ) 。在数量上与 C M v 一 M ,
Q
,
5株系差别不大 , 但在相对组
成 _ L差异较大 。
茄 科
商陆科
菊 科
蔓 陀 罗
白花蔓陀罗
心 叶 烟
克利芙兰烟
三 生 烟
珊 西 N C烟
白 烟
番 茄
龙 葵
辣 椒
矮 牵 牛
洋 酸 浆
美 国商陆
金 鱼 草
百 日 菊
毯 香 菊
大 丽 菊
, . 目
注 : L 二局部坏死或退绿 斑
S = 系统侵染
0 = 不 侵染
月口
6
. 小白鼠腹水抗体效价及血清学 当抗原浓度为。 . 97 m g / m l时 , 双扩散效价为 1/ 32 , 微
量沉淀效价为 1/ 1 0 2 4一 2 0 4 8。 该病毒与C M V黄化株系抗血清呈正反应 , 与 T A V及 P S V抗血清
呈负反应 。 用此腹水抗体建立了B D M 一 1一 r于C M V 「l木吞茄矮化株系之间的血洁学关系。
2期 李坟刚 :北京引致大 丽菊花 叶症 的三种病毒 1 1 3
裹 2病毒分离物 D BM一 1与 CM V( M、 Q、
) S三株系外宪蛋白奴甚酸组份比较
局部侵染觅色 黎 ( C.a , n a r a n f i C o l o r ) 、
诺黎 ( C . q u i n o a ) 、 心叶烟 ( N . 口 l“ * i , o : a )
昆
B D M一 1
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V i r o l o g y s了: 3 0 2 .
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V i r o l o g y 3 一: 30 2 .
d , T r p 易酸解 , 侧不出其存在
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.
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: 由于氧化还原作用 , 数据不可靠
曰卜
(二 ) 病毒分离物 B DM一2
1
. 寄主反应 机械接种 7科2 种 (品种 )
植物中 , 该病毒侵染 5科 15 种 (品种 ) 植物 。
图 2 B D M一 l d、 RN A谱带示愈 图
e
k
; 健康对照 : C , B D M一 l d s R N A
珊西 N C烟 ( N . t a b a c u m e X a n th i N C ) 。 系
统侵染黄化 烟 (N . r u s t i e a ) 三 生 烟 ( N -
t o b a c u m S a川 s u n ) 、 愈豆种类 (犷窟g , a s p p 。 ) 。
2
. 体外抗性 B D M一 2钝化温度 80 O C 以
上 , 稀释限点10 “ ” , 体外存活期8天以上 。
3
. 理化特性 用浸蘸法负染黄花烟浸出
液 , 该病毒杆状 , 3 0 0 n m长 ( 110 个 粒子平均
值 ) , 18 n m宽 ( 45 个粒子平均值 ) , 衣壳蛋
白亚基分子量为 1 7 5 o 0 D . 。
4
。 血清学 双扩散试验表 明 B D M 一 2 与
T M V普通株系抗血清呈正反应 , IS E M 表 明
B D M一 2粒体被T M V普通株系抗血清包被。
. 卜
图 1 B D M一 1的粒体形态 3肠 P TA负染
`放大2 6 0 0 0 x 革. 6 3 )
(三 ) 病毒分离物 B DM一 3
脉带花叶经一次或二次差速离心后 , 电
镜下均见到 直 径 48 n m 的球 形 病毒 粒 子
(图 3 ) 。 双扩散实验表明B D M一 3 与 D a M V
抗血清呈正反应 , I S E M 表明该病毒粒体 被
p a M V坑血清包被 ( D a M V抗血清由B r u o t ,
植 物 病 理 学 报2 0 卷
八. A. 博士提供 )。
感染病毒B DM 一 3的细胞形成直径 1. 6一
3
.
1林 m的球形或卵球状细胞质内含体 (图 4.
) 5
。 内含体基质呈细颖粒状 、 内有多个 电
子透明区 , 直径 37 一 3 8 n m的球形空心病 毒
粒子充满内含体 。
讨论
图 3 B D M一 3的粒 体 ( Z l 0 0 0 x 一 5 )
(一 ) 关于病毒分离物B DM ~ 1 : 根据实
验结果 , 病毒分离物B D M一 l是黄瓜花叶病毒
图 4 球状 内含体 ( 2 . 3卜m )
C M V 【’ 。 I , 定为 C M V一 D P 。 C M V 是 一世界性分布的植物病毒 , 有若干分离物 。 大丽菊上的
C M V国外虽有报道 I“ 1 , 但缺乏详细研究 , 更无株系划分 。
C M V一D P寄主范围较窄 , 寄主反应与报道株系有明显区别 【` 。 1 。 番茄坏死被认为是受到
卫星 RN A的调节 , 而 C M V一 D P没有卫星 R N人 。 C M V一 D P不侵染千 日红 、洋酸浆 、 英陀罗 、
菜豆 、 斑豆等其它已知株系侵染的植物 [` 。 1 。
C M V一D P粒体 ( 2 7n m ) 比其它株系 ( 28 一 3 0n 。 ) 略小 ,其沉降特性似乎与 C M V一 Y一
致 , 但不怪染 CM V一 Y的典型系统寄主斑豆 (犷 。 : i 。 e o s ` s ) [ ` 。 ] 。 C MV一D P 和 C入IV一 Q 。
.5 M
. 株系的氛基酸组份比例有明显差别 (表幻 。 ,
综上所述 , C M V一 D P与已报道株系不同 , 可能是 C M V的另一株系 。
(二 ) 关于病毒分离物B D M一 2 : 寄主反应 、 粒体形态大 ,;J 、 血清学反应及衣壳蛋白亚
基分子级洲定结果证明病毒分离物 B DM一 2是烟草花叶病毒 (大丽菊分离物 ) 。 这是第一次
狠道 TM v自然条件下感染大丽菊 。
空期 李汝刚 : 北京引致大丽 菊花叶症的三种病毒 15 1
(三 )关于病毒分离物 B D M一 3:
B D M一 3是大丽菊花叶病毒 Da V M【” ]
图 5卵球状内含体 ( 2. 7林 n I)
根据病毒粒体及内含体形态 、 血清反应 , 病毒分离物
( 1988年 9月 19日收稿 )
参考文做
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, p h y s i e a l P r o p e r t i e s
, p a r t i e l e s t y p e
a n d s i z e
, s e r o l o g y a n d 5 0 o n
, t h e t h
r e e v i r u s i s o l a t e s w e r e i d e n t i f i e d t
o b e
e u e u m b e r m o s a i e v i r u s ( C M V )
, t o b
a e e o m o s a i e v i r u s ( T M V ) a n d d a h l i a
m o s a i e v i r u s ( D a M V ) r e s p e e t笼v e l y . H o w e v e r , a e e o r d i n g t o h o s t r e a e t i o n ,
p a r t i e le s s i z e
, s e d im e n t a t i o n P r o p e r t y a n d a m i n o a e i d e o m P o s i t i o n o f e o a t
P r o t e i n
, th e v i r u s i s o la t e B D M一 1 w a s P o s s i b l y a n o t h e r s t r a i n o f C M V 。
篆砚彬
用徽电脑 , 理植物病舟信息的研究
郑燕棠 曹为玉 孙广利
赵万 英 “ 朱海英 王 民(天津市农科院 中心实验室 )
从 19 8 6一 19 8了年开展 了徽电脑管理植物病毒信息的研究 , 在 国 内首次对植物病毒有关信息实现 了自动化管理 的实用 系
统 , 获天津市 19 8 8年度科技进步三等奖 . 它的应用 , 将会改 变和解决长期以来国内植物病毒鉴定中查阅资料单非人工检 索
的落后局面 , 它的工作效率提高了几十倍至几百倍 . 本系统 以C M I / 人人 B为主要文献资料依据 , 病毒分离原理 参照 l蛇 生一
19 84 年 IC T V 的分类 , 命名方 法 . 它在 《 I B M一 P C / X T 》 徽机上 实现的 , 设计原理上采用棋块结构和汉字操作系统支持 下
的 dB人 S E , 关系数据库 语言编制应用程序 . 设里四 大功能系统 , 建 立了 5 1个病毒组4 54 个病毒成员 , 3 79 个寄主病 毒索引 ,
15 6 5个病毒名称 中拉对照索 引等 6 个数据文件和 1 1个索引文件以及 4 1个命令文件 . 自系统投入运行深受用 户欢迎 . 目前 己
推广到国内 3市了省 ” 个 使用单位 . ,
大豆饱班线虫危容大豆损失率研究
周 书其 王 振荣 高同春
、安徽省农科院植保所 ,
孙明安 刘 树鼎
(场山县农科所 )
大豆抱襄线虫对大豆危害极大 , 但土坡中大豆抱级线虫的密度与大豆产 t 损失之间 的关系 , 国 内尚未 见 报 道 . 作者
一九八六年采用中感品 种盆栽 (黑土和砂土 ) 进行人工接种不 同抱襄线虫密度对大豆产 盆危害损失 率 的 测 定 。 结 果 表
明 , 大豆抱班线虫种群密度不私 君大 豆产盆的形响极为显著 , 随抱囊线虫密度增大 , 产 t 相应降低 · 实测百克 土 中接种
一个城虫抱工 , 可造 成大豆产 t 损失 15 肠 . 百克土 中有 10 个线虫抱囊 , 可造成大豆 减少 36 肠 , 有 3。个抱连可减少 48 怜 , 石
有 1 0 个抱襄可减产 75 肠 , 用 回归分析方法 , 导出一个 由不同密度下的抱囊线虫引起的大豆产 t 拐失率的 回归方程式 : Y ”
32
.
86 + 。 . 38 x (空为理论产 t 损失率 , x 为百克土 中抱或线虫数量 ) , (一九八七年我们采用含不 同密度梯度 的泡囊线虫
田块进行田间担失率的阅定 , 资料在盆理中 ) ,