全 文 ：收稿日期:2008-08-12;　修订日期:2008-12-22
基金项目:广东医学院基金资助(No.0502)
作者简介:王　勤(1968-),女(汉族),湖北洪湖人 ,现任广东医学院讲师 ,
硕士学位 ,主要从事中药与中药制剂学工作.
鱼腥草对吸烟小鼠的抗肺氧化损伤作用
王　勤 ,李华文 ,廖芸芸 ,吴　铁
(广东医学院 ,广东 东莞　523808)
摘要:目的 观察鱼腥草对吸烟小鼠肺组织抗氧化损伤的影响。方法 以烟熏法制备被动吸烟小鼠模型。昆明小鼠 60只
随机分为 3组:A组为正常对照组;B组为吸烟模型组 , 连续被动吸烟 , 15min/次 , 8次 /d;C组为吸烟 +鱼腥草组 ,在连续
吸烟的同时 , 0.1 ml/10 g鱼腥草提取液灌胃 , 2次 /d。 60 d后处死动物 , 取肺组织做成匀浆。 观察鱼腥草对吸烟小鼠肺
组织中谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)活性 、超氧化物歧化酶(SOD)活性 、丙二醛(MDA)含量的影响。数据经 t检验统计分
析。结果 鱼腥草提取液可以明显提高肺组织中 GSH-Px活性 、SOD活性以及降低 MDA含量。结论 鱼腥草对被动吸烟
小鼠所致肺组织氧化损伤有一定的保护作用。
关键词:鱼腥草;　超氧化物歧化酶;　丙二醛;　抗氧化;　被动吸烟
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1426-01
　　吸烟虽然可以满足吸烟者的某些需要 ,但它对己对人带来的
危害 , 是不容争辩的事实。研究证实 , 吸烟过程产生含有包括超
氧自由基在内的复杂有害成分的烟气 , 可导致人体多种疾病发
生 , 而支气管 、肺组织作为烟雾直接作用器官 , 受害程度尤为严
重。吸烟所致肺氧化损伤实质上是烟雾刺激气道后氧化应激过
强所致以巨噬细胞和中性粒细胞为主的多种炎症细胞参与的气
道慢性炎症反应 [ 1] 。中医中药在抗氧化抗炎方面具有得天独厚
的优势 , 因此 ,挖掘祖国医药宝库 , 从中寻找对抗烟叶燃烧产生的
超氧阴离子自由基的有效药物 , 抑制气道炎症 , 成为防治吸烟造
成肺损伤的重要途径之一。本文通过动物实验 ,建立小鼠香烟烟
雾肺损伤模型 , 观察了中药鱼腥草对吸烟小鼠肺组织氧化损伤的
保护作用。现报道如下。
1 　材料与仪器
1.1　药品及试剂 鱼腥草 , 由广东医学院药理教研室提供。粉
碎 , 加水 10倍 , 加热提取 , 1h/次 ,共提取 3次 ,合并 3次滤液 ,浓
缩成含生药 100%提取液 , 4℃冰箱保存。其余试剂均采用国产
分析纯。 SOD、MDA、GSH-Px检测试剂盒均购自南京建成生物
工程研究所。
1.2 　仪器 752型分光光度计 ,匀浆器 、电磁振荡器等。小鼠吸
烟箱 , 自制 ,容积 10L, 有机玻璃制成 , 顶部安装玻璃漏斗存放烟
丝 , 底部与抽风系统相连 , 可以模拟人的吸烟速度 , 能使主流 、测
流烟雾全部进入吸烟箱内 , 下侧部有一直径 5 cm的孔与大气相
通。
1.3　烟丝 广东省廉江烟丝厂生产。
1.4　动物 昆明种小鼠 , 体重 18 ～ 22 g, 雌雄各半 , 由广东医学
院实验动物中心提供 。
2 　方法
2.1　分组 昆明种小鼠 60只。观察 3 d无异常后 , 按体重随机
分 3组 , 即正常对照组(A组)、吸烟模型组(B组)、吸烟加鱼腥
草组(C组),每组 20只 ,雌雄分笼饲养。 B组和 C组均连续吸烟
60 d, 8次 /d(上午 4次 , 下午 4次), 15 min/次 , 每次烟熏后换气
休息 15min;吸烟前 , B组用 0.1ml/10 g体重生理盐水灌胃 , C组
用 0.1 ml/10 g体重鱼腥草提取液灌胃 , 2次 /d。实验期内 , 动物
自由进食饮水 , 每 10天称体重 , 30 d时 , 采血测血清硫氰酸根离
子(SCN-)含量以观察模型的制成。处死前称重。
实验结束的第 2天 , 眼眶采血并宰杀动物 , 以 1%肝素抗凝 、
3 000 r/min离心 10 min制备血清;取出肺组织称重 , 剪取部分右
肺 , 用预冷生理盐水制成 10%的肺组织匀浆 , -80℃冻存待测。
2.2　测定指标及方法 血清中的硫氰酸根离子(SCN-)含量测
定参照 Bowler的硝酸高铁盐显色法测定 [ 2] 。 匀浆中的 SOD活
性 、MDA含量 、GSH-Px活性的测定均按试剂盒方法进行。数据
x±s以 表示 ,组间差异采用 t检验比较。
3　结果
3.1　实验小鼠血清 SCN-含量测定结果 小鼠血清 SCN-含量测
定见表 1, 吸烟 30 d时 , B、C组的小鼠的血清 SCN-含量均高于
40 ng/ml,显著高于 A组(P<0.05)。吸烟 60 d后 , B、C组的小
鼠的血清 SCN-含量增高到 50 ng/ml左右 ,极显著高于 A组(P
<0.01)。表明小鼠已经有效吸入香烟烟雾。
表 1　小鼠血清 SCN-含量( x±s) ng· ml-1
组别 血清 SCN-含量
30d 60d
A 34.23±2.45 36.43±3.65
B 42.43±3.98＊ 49.23±6.23＊＊C 43.34±4.23＊ 51.12±3.56＊＊
　　与 A组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
3.2　吸烟小鼠体重和肺重的变化 实验期内动物摄食 、饮水及
活动等均未见异常。各组小鼠体重增长情况见表 2。吸烟 30 d
后 , 吸烟各组的体重增长与正常对照组无明显差别 , 吸烟 60 d
后 , 吸烟模型组小鼠体重明显低于正常给药组(P<0.05), C组
和正常对照组的体重无显著性差异。各组小鼠肺重的情况见表
3。 B、C组肺重均低于 A组 , 其中 , B组和正常对照组之间有显著
差异(P<0.05)。
表 2　实验期小鼠的体重变化( x±s) g
组别 0d 30 d 60d
A 19.3±2.22 26.5±2.43 30.8±2.32
B 19.2±2.89 26.3±2.91 26.3±1.56＊
C 19.4±2.1 27.0±1.89 29.6±2.05
　　与 A组同时期比较 , ＊ P<0.05;n=10
表 3　吸烟对小鼠的肺重的影响( x±s) g
组别 肺重
A 0.25±0.04
B 0.21±0.02＊
C 0.23±0.04
　　与 A组同时期比较 , ＊ P<0.05
3.3　小鼠肺组织中的生化指标测定结果 各组小鼠肺组织的
MDA含量 、SOD活性以及 GSH-Px活性比较见表 4。 结果表明 ,
B组小鼠肺组织中的 MDA含量显著高于对照组 A组 (P<
0.05), SOD活性 、GSH-Px活性显著性的低于 A组;C组小鼠肺
组织中 MDA含量 、SOD、GSH-Px活性水平接近 A组 , 说明了鱼
腥草对被动吸烟小鼠的脂质过氧化损伤有保护作用。
4　讨论
香烟的烟雾中含有数千种对人体的健康具有严重危害的复
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6
杂化学物质 , 氢氰酸是其中之一 ,它在体内被肝脏解毒 ,而生成硫
氰化物。 SCN-的半衰期较长 , 可达 10 ～ 14 d, 因此可以通过测定
血清的 SCN-含量考察吸烟模型是否建立。本研究中染毒小鼠
吸烟模型的设计符合实验要求。
表 4　小鼠肺组织中的 MDA含量 、SOD活性和 GSH-Px活性( x±s)
组别 n MDA含量C/nmol· mgprot-1
SOD活性
C/U· mgprot-1
GSH-Px活性
C/U· mgprot-1
A 19 9.96±1.09 110.17±27.65 28.91±5.08
B 18 11.90±1.54＊ 78.56±21.04＊ 21.26±2.26＊C 19 10.41±1.03 101.24±30.41 27.36±3.61
　　与 A组比较 , ＊P<0.05
大量文献报道吸烟会影响动物机体的正常代谢 ,导致吸烟者
体重下降 [ 3] 。本次研究中也发现了烟雾使小鼠体重和肺重明显
减轻的现象。而服用鱼腥草的小鼠这种减轻趋势明显减缓 ,鱼腥
草对抗烟雾对小鼠的体重 ,特别是肺重的减轻作用是否同它的抗
氧化损伤作用相关 , 还是同其直接影响小鼠的营养生长有关 ,有
待进一步研究。
机体抗氧化系统主要包括 SOD和 GSH-Px等 , 它们协调作
用共同完成体内的抗氧化任务。 SOD是存在于生物体内的一种
重要的金属酶 , 它能催化生物氧化而产生的阴离子自由基 O
2
-·
转变成 H
2
O
2
和 H
2
,进一步由 GSH-Px分解 H
2
O
2
或 LOOH为水
或醇(LOH), 起到消除自由基的毒性 , 保护细胞的作用。 GSH-
Px的主要功能是清除生物体内的脂质过氧化物 , 其抗自由基损
伤的机制为:脂质过氧化物在 GSH-Px的催化下 , 从 NADPH接
受氢而重新被还原为 GSH。 GSH的主要生理作用是对抗氧化剂
对 -SH的破坏 , 保护细胞膜中含 -SH的蛋白质和酶不被自由基
和其它氧化剂所破坏。 MDA是脂质过氧化反应的产物 , 其水平
的高低间接反映机体内自由基生成与清除的平衡状态。
吸香烟时 , 吸入的烟雾中含有大量的自由基 , 机体长期处于
过度氧负荷状态 , 这使体内的抗氧化物质和抗氧化酶类耗竭或失
代偿。而当自由基的数量超过体内氧化防御能力 ,则可对生物大
分子物质如 DNA、RNA、蛋白质和脂肪造成损伤 , 这就是吸烟相
关慢性病发生的基础 ,故抗氧化功能已成为吸烟危害研究的重要
观察指标 [ 4] 。本研究观察到小鼠长期被动吸烟可造成体内自由
基代谢失常 , 表现为吸烟模型组的肺组织中 SOD和抗氧化酶
GSH-Px活力下降 , MDA含量增多 , 表明其受自由基攻击 , 体内
抗氧化酶类被耗竭或被自由基损伤后活性降低及合成减少。 而
小鼠在吸烟过程中同时给予鱼腥草灌胃时 , 其肺组织的 SOD活
性 、GSH-Px活性升高 ,提示鱼腥草可通过捕捉自由基而减轻因
吸烟造成的自由基增加和抗氧化酶活性降低的影响。
鱼腥草中含有多种黄酮类物质 , 鱼腥草花 、叶和果中含有槲
皮素 、槲皮苷 、异槲皮苷 、瑞诺苷 、金丝桃苷 、阿芙苷和芦丁
等 [ 5, 6] 。黄酮类化合物有很好的清除自由基和抗氧化能力 , 能阻
止自由基在体内的产生 , 其作用机理包括:与超氧阴离子
(O2 -· )反应阻断自由基引发的连锁反应;与金属离子螯合阻断
自由基生成;与脂质过氧基(RO· )反应阻断脂质过氧化过程。
但鱼腥草抗氧化的作用报道较少。本研究发现 , 鱼腥草组 MDA
含量明显低于吸烟组 ,与正常对照组无显著差异 , 表明鱼腥草不
仅可保护吸烟对机体的脂质过氧化损伤 ,还可以降低机体自身的
脂质过氧化水平。
综上所述 ,吸烟的烟雾在减轻动物体重的同时 , 还可以造成
体内脂质过氧化损伤 ,而鱼腥草可以有效地减轻香烟烟雾对肺组
织造成的这种氧化损伤。
参考文献:
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收稿日期:2008-06-24;　修订日期:2008-12-24
基金项目:安徽省高校自然科学研究项目(No.KJ2008A03ZC)
作者简介:卫修来(1969-),男(汉族),安徽合肥人 ,现任安徽医科大学药剂
科主管药师 ,学士学位 ,主要从事中药活性成分及质量标准化研究工作.
＊通讯作者简介:许杜娟(1963-), 女(汉族),安徽宿县人 , 现任安徽医科
大学药剂科主任药师 、副教授 ,博士学位 , 主要从事中药药理和中药活性
成分及质量标准化研究工作.
索氏提取法提取白术内酯 Ⅰ的工艺研究
卫修来 ,陈　镇 , 夏　泉 , 许杜娟＊
(安徽医科大学第一附属医院 ,安徽 合肥　230022)
摘要:目的 建立白术内酯Ⅰ索氏提取的最佳工艺。方法 采用正交设计优化的索氏提取工艺 , 以石油醚为提取溶剂 , 从
白术(炒)中提取白术内酯Ⅰ , 高效液相色谱法测定提取物中白术内酯Ⅰ的含量。结果 采用索氏提取法提取白术(炒)中
白术内酯Ⅰ的最佳工艺为白术(炒)的粒度为 80目 ,加 120ml石油醚提取 12 h。结论 所确定的炒白术中白术内酯Ⅰ 提
取工艺合理可行 , 值得进一步向工业化生产推广。
关键词:白术内酯Ⅰ ;　索氏提取;　正交设计
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1427-02
　　白术始载于《神农本草经》并列为上品 , 原名 “术”, 来源于菊
科植物白术 AtractylodesmacrocephalaKoidz干燥根 , 主产于浙江 、
安徽 、湖北 、湖南等省。 其性味甘 、苦 、温 , 具有健脾益气 、燥湿利
水 、止汗 、安胎等功效 [ 1] 。白术的主要化学成分为挥发油 、内酯
类化合物及多糖 [ 2] 。其中内酯类成分具有抗炎 、抗肿瘤作用 , 该
类成分还具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的功能 ,尤以
白术内酯Ⅰ作用明显 [ 3] 。本研究通过对白术内酯Ⅰ索氏提取工
艺的最佳条件的研究 ,为今后进一步研究其药理作用提供实验基
础。
1　仪器与试药
1.1　仪器 索氏提取器(中国科学技术大学玻璃仪器厂);XW-
80旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);TGL-16H高速离心机
(珠海黑马医学仪器有限公司);硅胶 G板 ,规格 5 ×10cm(青岛
海洋化工厂);Agilent1100系列高效液相色谱仪;Agilentchem-
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期