全 文 ：中南药学 2 0 03 年 1 0月第 1卷第 4 期 C en t r al Su oth h P r ame ay.O et o ber2 003 , V o l . 1 N o . 4
珍珠梅水提取物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用
张学武 ’ , 赵莲芳 2 , 全吉淑 1 , 沈明花 ` (1 . 延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室 , 延吉 1 3 3。。。 ; 2 . 延边
大学护理学院生物化学教研室 , 延吉 13 3。。 0)
摘要 : 目的 研究珍珠梅水提取物大鼠急性肝损伤的保护作用 。 方法 大鼠皮下注射 C C I宜制备急性肝损伤模型 ,
用 自动生化分析仪测定血清 A L皿、 、 A ST 活性 ; 比 色分析法测定血清 5 0 1) 、 G S H 一 P x 活性和 M l〕A 含量 。 结果
C 从肝损伤大鼠血清 A上T 、 A ST 活性和 M l〕A 含量升高 , S O D 、 GS H 一 P x 活性降低 ; 珍珠梅水提物和联苯双 醋灌
胃给药能显著降低 C1C 4 肝损伤大鼠血清 A L T 、 A ST 活性和 M l 〕A 含量 , 升高 5 0 1) 、 G S H 一 P x 活性 。 结论 珍珠
梅水提物对 CC l生 大鼠急性肝损伤有保护作用 。
关键词 : 珍珠梅 ; 肝损伤 ; 超氧化物歧化酶 ; 谷脱甘肤过氧化物酶 ; 丙二醛
中图分类号 : R 6 57 . 3 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 67 2一 29 8 1 ( 2 0 0 3 ) 0 4一 0 2 0 7一 0 2
P r o t e e t i v e e fe
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d i a ld e h y d e
珍珠梅 ( oS 动改 r ia so br ifo z故 ) 属蔷薇科植物 , 有活血
化癖 、 消肿止痛的作用 。 从中分离出胡萝 卜昔 、 甲基黄酮类
化合物 、 大黄素 、 原儿茶酸等化学成分川 。 其乙酸乙醋提取
物能使四氯化碳 ( C Ch ) 肝损伤大鼠血清丙氨酸氨基转移酶
( A L T ) 活性降低 、 肝线粒体唬拍酸脱氢酶活性升高 , 抑制
肝匀浆中脂质过氧化物的生成巨2一 3〕 , 对小鼠 51 8。肉瘤生长有
抑制作用川 。 珍珠梅水提取物的药理作用的研究未见文献报
道 。 本文研究珍珠梅水提取物对大鼠 C C甄肝损伤 的保护
作用 。
1 材料
1
.
1 药品和试剂
珍珠梅采集于吉林省延吉市市郊 。 取珍珠梅茎 、 叶 、
花 , 加水煎煮 3 次 , 收集水煎液 , 浓缩 , 使珍珠梅含量按生
药量计算为 4 9 · m L一 1 。
超氧化物歧化酶 ( S翎〕 ) 、 丙二醛 ( M l ) A ) 、 谷胧甘肤
过氧化物酶 ( G S H 一 P x) 试剂盒购自南京建成生物工程研究
所 。 联苯双酷 ( iB f en da et ) 由浙江温岭制药厂生产 , 批号 :
9 8 0 81 3
。 其他试剂均为国产分析纯 。
1
.
2 动物
Wi
s t a r 大鼠 , 雌雄各半 , 体重为 1 8 0一 2 0 0 9 , 由延边大
学医学院动物科提供。
2 方法
2
.
1 CC石肝损伤模型的制备
取 w ist a : 大鼠 50 只 , 随机分为正常组 , 模型组 , 珍珠
作者简介 : 张学武 ( 19 73 一 ) , 男 , 讲师 , 从事肝脏生物化学研究工作
2 12 2 9 1 38 3 5@ s in a
.
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:
( 04 33 ) 2 6 6 0 5 8 8
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C e n t r a l So
u th P h a rm a e扒 O e t o b e r 20 0 3 , V o l . 1 N o 中南药学 2。。3 年 10 月第 1 卷第 4 期
梅大 、 小 剂量组 , 阳性 对照组 。 珍珠梅按 10 9 , k g 一 1 、
5 9
·
k g 一 `给药 , 阳性对照为联苯双醋 。 . 2 9 · kg 一 ` , 正常组
和模型对照为生理盐水 , 灌胃给药 , 体积为 10 t n L · k断` ,
每天 1次 , 给药 s d 。 给药第 4 d , 除正常组按 5 . 。 耐 , · 地一 1
背部皮下注射生理盐水外 , 其他各组按 5 . 0 m L · 吨一 `背部
皮下注射 C1C 4 , 24 h 后 , 摘眼球取血 , 分离血清 , 用全 自
动生化分析仪检测血清 A L T 、 天冬氨酸氨基转移酶 ( A ST )
活性 , 用 比色分析法检测血清 5 0 1〕、 G S H一 P x 活性和 M D A
含量 。 取肝组织 , 用甲醛固定 , 作病理检查 。
2
.
2 统计学处理
数据以x 士 、 表示 , 应用 SP S S 10 . o 统计软件进行方差
分析 。
3 结果
3
.
1 病理形态学观察
正常组肝细胞形态规则 , 排列整齐 ; 模型组可见肝细胞
脂肪变性 、 点状坏死 ; 给药组可见肝细胞轻度脂肪变性 、 少
量点状坏死 (见图 l) 。
表 2 珍珠梅水提取物对四氯化碳所致急性肝损伤大鼠血清超氧化
物歧化酶 、 谷眯甘肤过氧化物酶的活性及丙二醛含量的影响 ( 二士 : ,
月一 1 0 )
药物 剂量 超氧化物歧 谷胧甘肤过氧化 丙二醛化酶 ( U · L 一 ` ) 物酶 ( U · L一 ` ) (~ L
·
L一 ` )
对照 一 一 4 0士 1 7 . 8士 2 . 1 1 . 27士 0 . 5 6
C CI 、 模型 一 一 19士 9 + 6 . 2士 0 . 9 + 2 . 70 土 0 . 7 十
珍珠梅水 5 9 · k g 一 ` 25 士 8 ’ 10 . 2士 2 . 1 关 二 1 . 5 5士 1 . 0 2 斧
提取物
10 9
·
k g 一 1 2 4士 3 关 1 1 . 3士 1 . 7 枪 关 1 . 4 3士 0 . 6 9 开
联苯双酷 0 . 2 9 . kg ` 3 6士 10 ` 1 0 . 0士 2 . 6 ’ “ 1 53士 0 . 4 6 ,
+ 尸 < 。 . 0 5 与对照组比较 ; ’ 尸 < 。 . 05 , 共 ` 尸 < 。 . 01 与 C 工4 模型组 比较 。
A B
图 1 A . C 1C 4 月干损伤模型可见肝细胞脂肪变性 、 点状坏死 ; .B
珍珠梅大剂量组可见肝细胞脂肪变性 、 点状坏死明显减轻 。 ( H E
染色 X Zo O )
3
.
2 对血清 A L T 、 A S T 的影响
CCI
、 肝损伤模型组大 鼠血清 A l月 , 和 A ST 活性 明显升
高 。 与模型组比较 , 珍珠梅水提取物明显降低 C ( !从所致急
性肝损伤大鼠血清 A L T 、 A S I… (见表 1 ) 。
表 1 珍珠梅水提取物对四氯化碳所致急性肝损伤大 鼠血清谷草转
氨酶 、 谷丙转氨酶的影响 ` 士 、 , n 一 10 )
药物 剂量 谷草转氨酶 ( U · L一〕 ) 谷丙转氨酶 ( U · I厂 ` )
可与肝细胞内大分子发生共价结合 , 也可攻击膜下不饱和脂
质 , 引起脂质过氧化 , 使肝细胞 损伤 , 细 胞质 内 A L T 、
A ST 渗人血液 , 结果血清 A L , 、 、 A ST 活性升高川 , 而通过
预防给予珍珠梅水提取物 , 可以降低 C 1C 4 所致大鼠血清
A E r
、
A ST 的升高 。
自由基是人体正常生化过程的中间产物 , 在机体正常及
病理过程中都存在 , 同时机体在进化过程中获得了灭活氧自
由基的一些酶 , 如 5 . 1〕、 G S H 一 P x 等 。 因此 , 只有当自由基
产生过多或者机体内的酶系统过少时才导致疾病 。 氧自由基
可促使不饱和脂肪自由基形成 , 脂质 自由基可引起细胞膜的
流动性 、 通透性和完整性的破坏 , 进而使其双层结构发生断
裂 , 引起膜镶嵌的一系列酶的排列紊乱 , 功能丧失 , 细胞的
能量产生系统瘫痪 。 SO D 、 G S H 一 P x 的变化可以间接地反映
疾病情况下自由基的变化 。 S O D 为高效的清道夫 , 可抑制
自由基启动的脂质过氧化 , G S H 一P x 是重要的催化过氧化氢
分解的酶 , 它特异地催化还原性 G S H 对过氧化氢的还原反
应 , 从而起到保护细胞膜结构与功能的完整作用 。 M l ) A 是
脂质过氧化的最终产物 , 可严重破坏细胞膜的结构 , 导致细
胞肿胀 、 坏死 , 其含量反映了组织过氧化的损伤程度困 。 本
实验中给药组血清 5 0 1) 、 (玉S H 一P x 较模型组显著升高 , 而
M l〕A 含量显著降低 , 这说明珍珠梅水提取物的保肝机制与
其对抗 自由基脂质过氧化密切相关 。
对照
C C 14模型
珍珠梅水
提取物
5 9
· 吨一 `
10 9
· 比 一 `
8 4士 8 爷 ,
7 5 9士 2 6 8+ +
4 1 2士 9 8 登
1 5 6士 4 5 关 芳
6 9 9士 2 6 1+ +
3 1 2士 7 6 关
n八苦O4
勺.一八匕+一门乙7乃了O门O`l
联苯双醋 。 . 2 9 · k g一 `
3 8 8士 1 04 关
3 4 5士 8 6 关
+ + 尸 < 。 . 。 1 与对照组比较 ; · 尸之玩厄乔不砚不不薪石藻型组比较 。
3
.
3 对血清 S ( )D 、 G S件 P x 、 M l孙、 的影响
CC h 肝损伤模型组大鼠血清 S O D 和 G S玲 P x 活性明显
降低 , M l ) A 含量明显升高 。 与模型组比较 , 珍珠梅水提取
物明显升高 C CI 呼 所致急性肝损伤大鼠血清 5 0 1) 、 G S H 一P x
的活性 , 降低 M l〕A 的含量 (见表 2) 。
4 讨论
目前公认 C C 14 引起肝损伤的机制系 C1C 4 在肝微粒体细
胞色素 P 45 。激活下生成自由基 C CI : · 及 1C · , 这些自由基
参考文献
[ 1 ] 李孝栋 , 吴立军 , 减晓燕 , 等 . 东北珍珠梅化学成分的研究
仁J」. 中国中药杂志 , 2 0 0 2 , 2 7 ( 1 1 ) : 8 4 1
肆皿 张学武 , 金海玲 , 朴春梅 , 等 . 珍珠梅对亚硝酸钠和 四氯化碳
所致肝损伤的保护作用 仁J」. 延边大学医学学报 , 2 0 01 , 24
( 3 )
:
18 6
口口 张学武 , 金海玲 , 赵红 , 等 . 珍珠梅对四氯化碳致肝损伤大鼠
自由基的影响 [ J] . 中国中医药科技 , 2 00 1 , 8 ( 6 ) : 3 7 3
少」 金海玲 , 张学武 , 朴春梅 , 等 . 珍珠梅提取物对小鼠 51 8。肉瘤
的抑制作用 〔J」. 延边大学医学学报 , 2 0 0 2 , 2 5 ( 1 ) : 14
[ 5」 W e i H S , L I gD , L u H m , 。艺 a z . E ff e e t S o f A T l r e e叩 t o r ant a g -
o而 、 t , lo s a r t an , on : a t h卿t iC if bor is s i耐 ucde b y C C 14 「J ] .
W乙,一d J aG s t or e n z e or , 2 0 00 , 6 ( 4 ) : 5 4 0
仁6」 Iw a rn o t o A , E g a s hi r a T , T a k a y a nr a F , 。 t a乙. hC a n g e S in f r e e
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