全 文 ：— 17 —现代中药研究与实践2016年第30卷第1期Chin. Med. J. Res. Prac., 2016 Vol. 30 No.1
基金项目：广西壮药质量标准（第三卷）质量评价与标准研究项目（GXZC2014-G3-1577-YLZB-B-4）；广西特色药材粗齿冷水花的抗炎作用物质基础研究
（2014GXNSFBA118142）；粗齿冷水花、瘤果紫玉盘质量标准研究（桂中重自 201408）；广西中药药效研究重点实验室开放课题（14-045-12-K3）
作者简介：武 旭（1992—），男，在读硕士研究生，主要研究方向天然药化学成分与质量标准研究。E-mail: 1184898678@qq.com
通讯作者：刘布鸣（1956—），男，本科，研究员，主要研究方向中药、天然药化学成分与质量标准研究。E-mail: liubuming@aliyun.com
粗齿冷水花药材的薄层鉴别研究
武 旭，柴 玲，黄 艳，邱宏聪，陈明生，刘布鸣 *
（1. 广西中药大学，广西 南宁 530022 ；2. 广西中药质量标准研究重点实验室，广西中医药研究院，广
西 南宁 530022)
摘 要：目的 研究建立粗齿冷水花药材的薄层鉴别方法。方法 以 Hernandulcin为对照品，考察不
同提取溶媒、提取方法、显色剂、展开剂等对粗齿冷水花鉴别的薄层色谱的影响。结果 粗齿冷水花药材
经乙醇超声提取，以石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰ 1︰ 1）于硅胶 G板上进行薄层层析，喷以 10%硫酸
乙醇溶液显色，所得薄层色谱斑点清晰，分离度好。结论 实验方法简便可行，重复性好，专属性强，可
用于粗齿冷水花药材的质量控制。
关键词：粗齿冷水花； Hernandulcin； 薄层鉴别； 质量控制
中图分类号：R282.5 文献标识码：A 文章编号：1637-6427（2016）01-17-04
doi: 10.13728/j. 1673-6427. 2016. 01. 006
Identifi cation Research of Pileasinofasciata C. J. Chen With TLC
WU Xu, CHAI Ling, HUANG Yan, QIU Hong-cong, CHEN Ming-sheng, LIU Bu-ming*
(1. Guangxi Tradtitonal Chinese Medicine College, Nanning 530022, China; 2. Guangxi Key Laboratory of
Tradtitonal Chinese Medicine Quality Standards, Guangxi Institute of Chinese Medicine & Pharmaceutical
Science, Nanning 530022, China)
Abstract: Objective To establish a method for identify of Pileasinofasciata C. J. Chen with TLC. Methods
With hernandulcin as the references substances, the TLC conditions,such as extraction solvents,extractionmeth
od,chromogenic agent and developing solvent were investigated. Results The ethanol ultrasonic extraction of
Pileasinofasciata C. J. Chen was performed on a TLC plate with petroleumether-Trichloromethane-Acetone(7﹕
1﹕1)as developing solvent, and then sprayed with 10% sulphuricacid and ethanol solutions, the spots were clear
and the resolution was good. Conclusion The method is simple and feasible,and has a good reproducibility for
the quality control of Pileasinofasciata C. J. Chen.
Key words: Pileasinofasciata C. J. Chen; hernandulcin; TLC; quality control
粗齿冷水花（Pileasinofasciata C. J. Chen）为荨
麻科植物冷水花的全草，分布于我国广西、贵州、四
川和云南等省，生于海拔 700 ～ 2 500 m的林中阴湿
处。粗齿冷水花有较长的使用历史，具有清热解毒，
活血祛风，消炎止痛，治疗跌打损伤等功效 [1]。广西
民间用于健脾、催乳、止咳、消炎、防治附件炎和盆
腔炎等妇科疾病。目前有关粗齿冷水花的研究报道较
少，其有效成分尚不清楚。牛延慧 [2]等采用化学反
应鉴别方法对冷水花属植物的水提取液、乙醇提取
液、石油醚提取液进行鉴别，发现粗齿冷水花中可
能含有多糖、皂苷、多肽、还原糖、鞣质、有机酸、
香豆素、黄酮类、挥发油等多种化学成分。本课题组
对粗齿冷水花进行了化学成分研究，采用硅胶柱层析
分离、甲酯化和 GC-MS等方法对其石油醚部位的脂
溶性成分进行了成分分析及鉴定，鉴定了其中的 14
个成分 [3]；通过硅胶柱、凝胶柱色谱，制备型高效
液相色谱法分离纯化得到 Hernandulcin，依据理化性
质、紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱和质谱等数据
— 18 — 现代中药研究与实践2016年第30卷第1期Chin. Med. J. Res. Prac., 2016 Vol. 30 No.1
确证了 Hernandulcin的化学结构 [4]；通过对粗齿冷水
花乙醇提取液进行 HPLC分析研究，发现该药材中
Hernandulcin含量较高，可作为粗齿冷水花的指标性
成分。本研究为首次对粗齿冷水花的薄层色谱进行系
统性研究，所建立的薄层鉴别方法，可为粗齿冷水花
药材质量标准研究提供参考和依据。
1 实验材料
1.1 仪器
XS-205电子分析天平（万分之一，梅特勒 -托
利多国际股份有限公司）；KQ5200B型超声波清洗机
（昆山市超声仪器有限公司，220W，150Hz）；数显
恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）； 硅胶 G板（批号：
20150420，青岛海洋化工厂）； 薄层层析硅胶 G板（批
号： HC30863956， 默克化工技术（上海）有限公司）；
薄层色谱展开缸（上海信谊仪器厂）。
1.2 试药
甲醇（批号：150324，分析纯，西陇化工股份有
限公司）；石油醚（批号：20140807，分析纯，天津
市福晨化学试剂厂）；乙酸乙酯（批号：20140804，
分析纯，天津市福晨化学试剂厂）；三氯甲烷（批号：
20140620，分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；
乙醇（批号：20141120，分析纯，天津市福晨化学试
剂厂）；Hernandulcin对照品为实验室自制（经 HPLC
检测纯度≥ 95%），水为纯水。
粗齿冷水花采自广西百色市，经广西中医药研究
员何开家主任药师鉴定鉴定为荨麻科冷水花属植物
粗齿冷水花（Pileasinofasciata C. J. Chen）。药材信息
见表 1。
表 1 粗齿冷水花 10 批药材信息
Tab. 1 The information of 10 batchs of Pileasinofasciata C. J. Chen
编号 商品名 产地
1 粗齿冷水花 广西凌云
2 粗齿冷水花 广西凌云
3 粗齿冷水花 广西凌云
4 粗齿冷水花 广西凌云
5 粗齿冷水花 广西凌云
6 粗齿冷水花 广西那坡
7 粗齿冷水花 广西那坡
8 粗齿冷水花 广西那坡
9 粗齿冷水花 广西那坡
10 粗齿冷水花 广西那坡
2 方法与结果
2.1 粗齿冷水花药材薄层色谱条件的考察
2.1.1 提取溶媒的考察 称取 5份粗齿冷水花对照
药材粉末各约 3 g，分别置于 5个 100 ml的具塞锥形
瓶中，标记序号 1～ 5，按瓶号顺序分别加入乙酸乙
酯、三氯甲烷、甲醇、50%乙醇、乙醇各 30 ml，超
声处理 30 min，用定性滤纸滤过，滤液蒸干，残渣
加入相应的提取溶液 5 ml使溶解，即得编号 1 ~ 5的
供试品溶液。分别吸取上述供试品溶液 5μl，点于同
一硅胶 G薄层板上，用石油醚 -三氯甲烷 -丙酮 （7︰
1︰ 1）展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液
并加热至薄层板上的斑点显色清晰，日光下检视。结
果显示以乙酸乙酯、三氯甲烷为溶媒提取的供试品斑
点较少；甲醇、乙醇为溶媒提取的供试品斑点较多，
斑点信息相似；50%乙醇为溶媒提取的供试品斑点
较甲醇、乙醇少（见图 1）。考虑到乙醇的毒性较小，
拟采用乙醇作为提取溶媒。
图 1 粗齿冷水花药材在不同溶媒提取下的薄层色谱图
Fig. 1 The TLC of Pileasinofasciata C. J. Chen of different extraction
solvents
2.1.2 显色剂的考察 分别吸取“2.1.1”项下的
供试品溶液各 5μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以石
油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂展开，
平行试验 3次，得 A、B、C三块薄层板。取出晾干后，
分别喷以 10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、
5%磷钼酸溶液，加热至薄层板上的斑点显色清晰，
在日光下检视。结果：A板斑点颜色鲜艳，较清晰；
B板和 C板显色斑点颜色较淡（见图 2）。故本实验
采用A板的显色溶剂即10%硫酸乙醇溶液为显色剂。

注：A. 10%硫酸乙醇显色；B. 5%香草醛显色；C. 5%磷钼酸显色
图 2 粗齿冷水花药材在不同显色剂的薄层色谱图
Fig. 2 The TLC of Pileasinofasciata C. J. Chen of differentchromogenic
agents
A B C
— 19 —现代中药研究与实践2016年第30卷第1期Chin. Med. J. Res. Prac., 2016 Vol. 30 No.1
2.1.3 提取方法的考察 称取粗齿冷水花对照药材
粉末 3份，各约 3 g，分别置 100 ml的锥形瓶中，同
时加入乙醇 30 ml，分别以超声、回流和冷浸法提取
30 min，滤过，滤液蒸干后残渣加乙醇 5 ml使溶解，
作为供试品溶液。吸取上述供试品溶液各 5μl，点于
同一硅胶G薄层板上，以石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰
1︰ 1）展开，晾干后喷以 10%硫酸乙醇溶液并加热
至薄层板上的斑点显色清晰，于日光下检视 [5]。结果：
薄层板中以冷浸法提取的供试品溶液显色斑点较少，
而用超声法提取和加热回流法提取所得的供试品溶液
斑点较丰富，同时后两种提取方法得到的供试品结果
差别不大（见图 3）。因超声法操作简便，故选用超声
提取为粗齿冷水花药材供试品的提取方法。
图 3 粗齿冷水花药材在不同提取方法的薄层色谱图
Fig. 3 The TLC of Pileasinofasciata C. J. Chen of different extraction
method
2.1.4 提取时间的考察 称取粗齿冷水花药材粉
末 5份，每份 3 g，分别置于 100 ml锥形瓶内，标记
序号 a ～ e，加入乙醇 30 ml，分别按所标记序号用
超声法提取 5、15、30、45、60 min，定性滤纸滤过，
滤液蒸干，残渣加乙醇 5 ml使溶解，作为供试品溶
液。分别吸取不同提取时间制得的供试品溶液 5μl，
点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚 -三氯甲烷 -丙
酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂展开，晾干后喷以 10%硫
酸乙醇溶液并置烘箱中加热至薄层板上的斑点显色
清晰，于日光下检视。结果超声处理 30、45和 60
min的样品斑点信息相似，且较超声处理 5和 15 min
的样品斑点更多，更清晰（结果见图 4）。因而选用
超声处理 30 min为样品提取的时间。
2.1.5 展开剂选择 称取粗齿冷水花对照药材粉
末 3 g，置于 100 ml的具塞锥形瓶中，同时加入乙醇
30 ml，超声提取 30 min后，用定性滤纸滤过，滤液
蒸干，残渣加乙醇 5ml使溶解，作为对照药材溶液。
吸取对照药材溶液 5μl，点于硅胶 G薄层板上，分别
以石油醚 -乙酸乙酯（8︰ 2）、石油醚 -三氯甲烷 -
丙酮（7︰ 1︰ 1）及环己烷 -丙酮（7︰ 3）为展开
剂展开，晾干后喷以 10%硫酸乙醇溶液并加热至薄
层板上的斑点显色清晰，于日光下检视，结果表明：
以石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂
斑点丰富且清晰，分离度高（结果见图 5）。因而确
定石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂。
图 4 粗齿冷水花药材在不同提取时间的薄层色谱图
Fig. 4 The TLC of Pileasinofasciata C. J. Chen of different extraction
time
注： A. 石油醚 -乙酸乙酯（8︰ 2）；B. 石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰
1︰ 1）；C.环己烷 -丙酮（7︰ 3）
图 5 粗齿冷水花药材在不同展开剂的薄层色谱图
Fig. 5 The TLC of Pileasinofasciata C. J. Chen of different developing
solvent
2.1.6 系统耐用性实验 点样量考察：按“2.1.5”
项制备对照药材溶液，分别吸取 1、3、5、7、10
μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚 -三氯甲烷 -
丙酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂展开，晾干后喷以 10%
硫酸乙醇溶液并加热至薄层板上的斑点显色清晰，结
果：点样量为 5 μl时斑点已较清晰，因此确定本薄
层鉴别的点样量为 5 μl。
不同薄层板的考察：吸取按上述方法制备的对照
药材溶液，分别点于三种不同厂家生产的硅胶 G薄
层板上，以石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰ 1︰ 1）
为展开剂展开，晾干后喷以 10%硫酸乙醇溶液并在
105 ℃加热至薄层板上的斑点显色清晰，于日光下检
A B C
— 20 — 现代中药研究与实践2016年第30卷第1期Chin. Med. J. Res. Prac., 2016 Vol. 30 No.1
视。结果三种不同的薄层板均能有效分离供试品溶
液，而默克硅胶 G板的分离效果较青岛海洋和自制
硅胶 G板更佳。
展开温度和湿度的考察：吸取按“2.1.5”项制备
的对照药材溶液 5 μl，点于同一硅胶 G薄层板上，
以石油醚 -三氯甲烷 -丙酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂，
分别在温度（20 ℃）湿度（32%）、温度（40 ℃）湿
度（32%）、温度（40 ℃）湿度为（77%）及 温度（20 ℃）
湿度为（77%）环境下展开，晾干后喷以 10%硫酸
乙醇溶液并加热至薄层板上的斑点显色清晰，于日光
下检视，结果：在温度为 20 ℃，湿度为 77%条件下，
斑点清晰，分离效果较好（见图 6）。
注： A. 温度（20 ℃）湿度为（32%）；B. 温度（40 ℃）湿度为（32%）；
C. 温度（40 ℃）湿度为（77%）； D. 温度（20 ℃）湿度为（77%）
图 6 不同温湿度粗齿冷水花药材的薄层色谱图
Fig. 6 The TLC of Pileasinofasciata C. J. Chen of different temperature
and humidity
2.2 粗齿冷水花药材的薄层鉴别
2.2.1 供试品溶液的制备 取粗齿冷水花药材 3
g，精密称定，置于 100 ml的具塞锥形瓶中，加乙醇
30 ml，超声处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加
乙醇 5 ml使溶解，作为供试品溶液（n = 10）。
2.2.2 对照药材溶液的制备 取粗齿冷水花对照
药材 3 g，按上述供试品溶液制备方法制得对照药材
溶液。
2.2.3 对照品溶液的制备 取对照品 Hernandulcin
适量，加乙醇使溶解，制成 1mg/ml的对照品溶液，
即得。
2.2.4 粗齿冷水花药材的薄层色谱鉴别 照薄层
色谱法 [《中国药典》2010年版（一部）附录 IV B]
试验，分别吸取“2.2.1 ~ 2.2.3”项中的 3种溶液，分
别点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚 -三氯甲烷 -
丙酮（7︰ 1︰ 1）为展开剂展开，晾干后喷以 10%
硫酸乙醇溶液并在 105 ℃的烘箱中加热至薄层板上的
斑点显色清晰，于日光下检视。结果：10份粗齿冷
水花药材的供试品溶液和对照药材溶液的薄层色谱
图，在对照品溶液色谱图的相应位置上均显有相同颜
色的斑点（见图 7）。
图 7 不同批次粗齿冷水花药材的薄层色谱图
Fig. 7 The TLC of different batchs of Pileasinofasciata C. J. Chen
3 讨论
粗齿冷水花药材薄层色谱鉴别方法未见报道，
Hernandulcin为粗齿冷水花中的化学成分，属于一种
红药类的倍半萜烯，是一种比砂糖甜 1 000倍的高
甜度化合物，无毒无害，且能克服多数甜味剂的不
足，是一种理想的低热值的食品添加剂 [5, 6]。本文以
Hernandulcin为指标性成分，建立了粗齿冷水花药材
的薄层鉴别方法，得到的薄层色谱图分离效果尚佳，
方法的专属性强、重现性好，为粗齿冷水花药材质量
的有效控制以及该药材的开发利用提供了科学方法
和理论依据。
参考文献
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会 . 《中华本草》[M]. 上海 : 上海
科学出版社 , 1999: 568-577.
[2] 牛延慧 , 梁志远 , 甘秀海 . 贵州三种冷水花化学成分预试研究 [J]. 贵州
师范学院学报 , 2010, 26(3): 26-28.
[3] 文建文 , 黄 艳 , 何开家 , 等 . GC-MS法分析粗齿冷水花石油醚部位的
脂溶性成分 [J]. 安徽农业科技 , 2010, 41(36): 14156, 14168.
[4] Cesar M. Compadre, Raouf A. Hussain, R. Lilia Lopez de Compadre, et
al. The Intensely Sweet SesquiterpeneHernandulcin:Isolation, Sythesis,
Characterization, and Preliminary Safety Evaluation. J. Agric. Food Chem,
1987, 35(2): 273-279.
[5] 贺庭云 , 屈永年 , 蒲启玲 , 等 . 新型甜味剂 - Hernandulcin的合成 [J]. 郧
阳医学院学报 , 1996, 15(4): 218-219.
[6] 向仕龙 . 谁最甜 [J]. 科学实验 , 1986, (6): 31.
收稿日期： 2015-08-05
A B
C D