全 文 ：皱叶甘蓝花药培养再生单倍体植株
画绣} 刘雁雨 (西南农业大学 , 重庆 。 071 6)
H a p l o id IP幼 t le t R e g e n e r iat o n f r o m A n t h e r C u lt u r e o f Br a s s i e a
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植物名称: 皱叶甘蓝 ( B ,咖如心娜 cae va 乙
那石a “ da ) 。
材料类别 : 单核期的花药 (花蕾长约 1 . 5~ 2 . 5
m m )
。
培养条件: ( 1) 诱导培养 基 : K孤山+ B A O . 5
“ g L/ (单位下同 )十 2 , ` D l + N A A o 。 1+ 5% 蔗糖
十水解酪蛋白 50 仇 (2 ) 分化培 养基 : 玩 + B A I +
N A人 0 . 5 + 3% 蔗糖 + 水解酪蛋白 5 0。 ; ( 3) 生根培
养基 : M S十 3% 蔗糖。 琼脂 0 . 8% , p H S . 8 。 外植体
接种后直接放到 2o5 C 培养室内暗培养或置 于 3 o5 C
处理 1 天后放到 25 oc 培养室内暗培养 。 花药形成
愈伤组织后进行连续胜小时光照培养 ,光强 2 00 、
25 00 1灭 。
生长与分化情况 : 花药在诱导培养基 上 9~ 加
天内形成浅褐色的愈伤组织 。 3 o5 C 处理 1 天的花药
形成愈伤组织的诱导率 ( 18 . 7% ) 高于一直 在 2o5 C
条件下培养的花药的诱导率 ( 15 . 0% )念伤组织长至
2~ 3 m m 大小时转入分化培养基 , 约 7 天后愈伤组
织上生长出绿色细胞团 , 即为芽点。 分化出的芽非
常细小 , 叶片较窄 , 其中有的再生芽有轻微玻璃化瑰
象 , 玻璃化芽逐渐停止生长 , 直至坏死。 将分化出的
芽切割继代培养 , 又能分化出不定芽 , 反复即可达到
将单倍体植株扩繁成一个纯系的目的 。 将芽转入生
根培养基 , 5 天后即可长出较粗的根。 取根尖观察染
色体 , 结果表明 n 、 9 或 n 二 9~ 18 或 Zn 一 18 , 说明
再生小植株中同时存在单倍体 、 非整倍体和二倍体。
意义与进展 : 皱叶甘蓝为异花授粉作物 , 是一
种具有较高营养价值和抗虫抗病性的甘 蓝类蔬菜 ,
在甘蓝的品质育种和抗性育种上有很大的应用价
值 , 但皱叶甘蓝的品质尚存在较多的缺陷。 通过花
药培养获得单倍体 , 再染色体加倍 , 可快速获得纯合
二倍体 , 加速突变育种的进程 , 有利于皱叶甘蓝的品
质改良。 本研究为甘蓝育种奠定了一定的基础。
参 考 文 献
1
.
K e l l e r W A
。才 a Z. C a 几 J G 。助才 C夕才口2 1 9 7氏 17 : 6 5 5 ,
收稿 1 9 9 0拍6一 2 5
粗齿冷水花的组织培养
蒋泽平 朱鹿鸣 (江苏省林业科学研究所 , 南京 : 1 工貂 )
T i s s u e C u 胜u r e o f P I l e a fa s e i a t a
J I A N G z e中10 9 , Z H U L u 一M加g (J 招” g路 尸盯韶才犷 , 丑 e s o a犷 hc 1 0 5“ 树。 , N a 叼伽夕 2 1 11 5 3 )
植物名称 : 粗齿冷水花 (别俪扣公口协at )。
材料类别 : 茎段 、 叶片。
培养条件 : 愈伤组织诱导培养基为 M S + N 人A
0
.
2~ 0
.
5 0 9 / L (单位下同 ) + 6一 B A O . 6 、 1 . 仇 分化
培养基 为 M S + ` B人 0 . 5 或 M日十卜 B A I . 0~ 2 . 0
+ 工人人。 . 1、 0 . 衍 壮苗培养基为 M S + 6毛人O · 5~
1
. 。 + IA却 . 1一 。 . 2 十 P p 3。。 。 . 05 ~ 。 . 丸诱导生根
培养基为 M S + N 人人 0 . 1~ 0 . 5。 上述每升皿日培养
基均附加普通食用绵白糖 30 9, 琼脂 7 9 , p H S . 6 左
右。 培养温度器士 oZ Q 光照强度 Z00 x1 左右 , 每
日照光越小时。
生长与分化情况
1
. 愈伤组织的诱导 取室温中生长 旺盛 的 3
年生粗齿冷水花的茎段和幼叶作外植体 , 用自来水
收稿 1卯于以一 6
致谢 移栽工作曾得到本所石鼎新、 倪竞德同志的帮助。
。 公 .
DOI : 10. 13592 /j . cnki . ppj . 1991. 01. 017
冲洗干净 , 并用 70 % 酒精擦洗 1 次 , 再在 0 . 1% 的
升汞液中浸泡 8~ 10 分钟 ; 然后用无菌水冲洗 3、 4
次 ; 最后在超净工作台上切去与药液接触伤口部分 ,
茎段切成 0 .石。 m , 幼叶切成 O . s oln 义 0
.
5恤 的小
块 ,具腋芽的茎段 , 接种于分化培养基上 , 1而茎段 (不
具腋芽 ) 和幼叶小块接种于诱导愈伤组织培养基乌
置于培养室内照光培养 , 20 天左右出现愈伤组织 。
2
. 羊的分化 具腋芽的茎段在分化培养基上 ,
2周左右芽增殖 , 1 个月左右大量增殖 , 需进行继代
培养 ; 诱导而成的愈伤组织切成小块转到分化培养
基上 , 2 周后出现绿色小芽点全 幼叶小块愈伤 组织
20 天左右开始具绿色芽点。 这些绿色小芽点 , 进一
步分化形成小芽 ,逐渐增殖长成丛生芽苗。
3
. 壮苗培养 在分化培养基上的芽苗增殖能
力强 , 但是叶嫩、 茎细弱 , 不利移栽成活 。 在移栽前
需要壮苗培养。 壮苗培 养基为 M S + 小 B A O . 5~
1
.
0 + I入人 0 . 1~ 0 . 乌 附加 p p a 3 o . o s , b . 1 , 0 . 2 ,
。 . 5 , 0 . 4 , 0 . 5 , 1 , o 七个浓度梯度。 结果表明 : }附加
P P 33 3 的量小于 0 . 05 p p ln , 对壮苗生长无效 ; 附加
.0 1~ o
·
2 p p m 的 P 3P 3 3 效果好 , 芽苗色泽浓绿 ,茎
粗 ; 随着 P 3P 3 浓度的增加 ,超过 o · 4 p p m 时 ,开始
抑制芽苗的生长 ; 当浓度大于 0 . s p pm 时 , 表现明显
的负效应 。
` . 根的诱手 将高 3 o m 左右的健壮芽苗 (单
芽或丛芽 )转移到诱导生根培养基宁, 7一 10 天茎羞
具小突起 , 但根未长出。
5
. 移栽 将茎基具小突起 (未长出根 )的芽苗 ,
直接移栽至含有等体积的碧糠灰与土的混合营养钵
中 , 浇透水 , 用塑料薄膜翰封保持相对湿度 90 % 以
上 , 温度 2 0` 2 5 o C , 10” 15 天生根成活 , 成活率达
90% ~ 9 5%
。
意义与进展 : 粗齿冷水花是算麻科 , 冷永花属
植物 , 观赏价值高。 其整株能入药 , 具有药用价值。
国内尚未见用茎段 、 叶片组织培养成功的报道。 通
过本文的组培方法 , 可大大提高繁殖系数 , 可能为商
品化生产粗齿冷水花提供捷径。
山杨叶柄的离体繁殖
蒋泽平 朱鹿鸣 (江苏省林业科学研究所 , 南京 21 1 53)
P r o p a g iat on
o f L e a f一 st a l k o f P o p u l u s d a 砂 i d i n a i n iV t r o
J I A N G Z卜P垃 .g 么H U L u一M in g (几。 gs “ 几介时卿 及 se哪 h l 几时衬“ 妇 , N 口 刃弃呵 21 1 53 )
植物名称 : 山杨 (oP 夕琳讹 da 。记`加 ) 。
材料类别 : 选用长 20 o m 左右的山杨萌 条 , 放
人清水中水培 (温度 20 O )C 。 20 天开始萌芽 , 待其萌
芽长至 1~ 2恤 时 , 切取腋芽 , 经 70 % 的酒精浸泡
1 分钟、 0 . 1% 升汞溶液消毒 6~ 8 分钟 、 无菌水冲
挑 3 ~ 4 次后 , 接种在 W P M + B人 1 · 。 p mP (下同 )
+ N人 A O . 01 + 2% 蔗糖 + 。 . 5% 琼脂的培养基上 ,
助 天左右获得无菌材料。 1 个月后 , 切取叶柄 (带叶
片 )进行培养。
培养条件: 不定芽诱导 培养基 W P M + B A
0
.
85 + N A人 0 . 1乓 继代培养基 W P M + B人 1 . 25 +
N A OA
.
20 ; 壮苗培养基 W P M 十 B A .0 25 十 N人 A
0
.
1+ P P3 3 0
.
5 ; 诱导根原基的培养基为 W P M +
N人A O . 5 。 以上培养基均加入 2 % 蔗糖 , 0 . 6% 凉
脂 , p且 6 . 。。 培养温度 25 士 20 0, 每日光照 12 小时 ,
光照强度为 150 x1 。生长与分化情况 :
1
. 不定芽的诱导 将无菌苗的叶柄 (带叶片 )
接种在不定芽诱导培养基上 。 15 夭左右 , 叶柄伤口
处膨大并开始出现绿色芽点 , 但未见大块愈伤组织 。
第 2。 天出现小芽 , 以后逐渐增多, 3 0~ 35 天整个叶
柄长满小芽。 在同样条件下 , 叶片不产生愈伤组织
和不定芽 。
2
. 继代培养 切取不定芽芽丛转移到 继代 培
养基上 , 试管苗 20 天增殖近 5 倍 , 但苗高不足 1 o m’
且芽苗细弱 。
3
. 壮苗培养 为获得健壮优质的试管苗 , 在
W P M 十 B人 0
.
25 + N A A o
.
1 的培养基 中, 附加了
P 3P 3凡浓度梯度为 0 , 0 . 2 , 0 . 5 , 1 , o , 5 . o P p m , 结
果表明 , P P O3 3 浓度大于 5 . O p p m 时 , 试管苗生长
明显受抑制 , 1个月生长高度不足 0 . s o m , 而且幼
芽几乎不增殖 ; P 3P 3 浓度过小 (小于 0 . 2 P p m ) , 试
管苗的生长和分化与对照无差异 ; 当 P P 3拐附加量
收稿 1如` 。 8~以
致谢 黑龙江省林业科学研究所育种盆提供试材.