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(收稿日期:2009-12-22;修回日期:2010-01-22)
反相高效液相色谱法测定鹿衔草中梅笠草素的含量
张园园 , 王学勇 , 杨淑珍 , 吉卯祉 (北京中医药大学中药学院 , 北京　100102)
摘要:目的　建立测定中药鹿衔草中活性成分梅笠草素含量的反相高效液相色谱法。方法　采用 Cosmosil Packed
5C18 ARⅡ色谱柱 (250 mm×4.6 mm , 5μm), 以乙腈-水 (72∶28)为流动相 , 流速为 1.0 mL ·min -1 , 检测波长
为 254 nm , 柱温为室温。结果　梅笠草素在 10.17 ～ 203.4 μg · m L-1与峰面积线性关系良好 , 平均回收率为
101.8%, RSD为 1.4%。结论　该方法简便快速 、 结果准确 、 重现性好 , 可以用于鹿衔草药材及相关制剂的质量
评价。
关键词:鹿衔草;梅笠草素;反相高效液相色谱法
中图分类号:R927.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)04-0272-03
Determination of chimaphilin in Luxiancao by RP-HPLC
ZH ANG Yuan-yuan , WANG Xue-yong , YANG Shu-zhen , JI Mao-zhi (School of Chinese Materia Med ica , Beiing
University of Chinese Med icine , Bei jing 100102)
Abstract:Objective　 To establish an RP-H PLC method fo r the dete rmination of chimaphilin in Lux iancao.Methods　
Separ ation w as achieved on Cosmosil P acked 5C18 ARⅡ column (250 mm ×4.6 mm , 5 μm)using acetonitrile-wa te r
(72∶28)a s the mobile phase.The detective wavelength was 254 nm , the flow rate w as 1.0 mL ·min -1 , and the co l-
umn tempeature w as ro om tempe rature.Results　Chimaphilin showed good linea rity within 10.17-203.4 μg ·mL -1
and the recove ry w as 101.8%(RSD=1.4%).Conclusion　The method is simple and accurate.I t can be used fo r the
quality contro l o f bo th plant materials and preparations o f Luxiancao.
Key words:Luxiancao;chimaphilin;RP-HPLC
　　中药鹿衔草又称鹿含草 、 破血丹 、 鹿安茶等 , 其性温 、
味甘苦 , 具有补虚益肾 , 驱风除湿 , 活血调经之功效 , 中医
用于治疗虚弱咳嗽 , 劳伤吐血 , 风湿痹痛 , 腰膝无力 , 月经
过多 , 外伤出血[ 1] 。现代药理学实验证明该药具有明显的抗
菌 、 抗炎 、 促进免疫 、 保护心脑血管等作用[ 2] 。中国药典
2005 版一部收载的中药鹿衔草为鹿蹄草科植物鹿蹄草 Py-
rola calliantha H.Andres 和普通鹿蹄草 P yrola decorata H.
Andres 的干燥全草[ 3] 。鹿衔草中主要含有醌类 、 酚类 、 黄
酮 、 三萜等化学成分[ 4-6] 。其中萘醌类成分梅笠草素具有抗
炎 、 止痛和抑制淋巴细胞 、 白细胞等作用 , 为鹿衔草的主要
活性成分[ 7-11] 。本研究首次采用高效液相色谱法测定鹿衔草
中梅笠草素的含量。该方法将质量控制指标与活性成分相结
合 , 具有简便快速 、 结果准确 、 重现性好的特点 , 可用于鹿
衔草药材及其制剂的质量评价。
　　作者简介:张园园 , 女 , 讲师 , 主要从事中药质量控制与药物动力学研究 , Tel:(010) 84738665 , E-mai l:ch oenen@yah oo.com.cn
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C ent ral S outh Ph arm acy.Ap ri l 2010 , Vol.8 No.4　中南药学 2010年 4月第 8卷第 4期
1　仪器与试药
SHIM ADZU 高效液相色谱仪 (配备 LC-10A 泵 、 SPD
-10Avp 紫外检测器 、 LC-solution 色谱工作站 , 日本岛津
公司), AB-135S 电子天平 (瑞典 Mettler To ledo 公司),
FW177 粉碎机 (天津泰斯特仪器公司)。
　　梅笠草素对照品 [ 从普通鹿蹄草中分离纯化得到 , 采用
波谱学等方法 (1HNMR、13 CNM R、 IR)并参考文献[ 12] 确
证结构 (见图 1), 峰面积归一化法计算纯度>98%, 符合
含量测定要求] 。鹿蹄草和普通鹿蹄草药材 (分别购自北京
同仁堂药店和河北安国药材市场 , 由北京中医药大学药用植
物教研室王学勇副教授鉴定为 Pyrola calliantha H.Andre s
和 Pyrola decorata H.Andre s的干燥全草)。样品经粉碎机
粉碎 , 过 20 目筛 , 置广口瓶密闭保存。
甲醇 、 乙腈为色谱纯 , 乙醇为分析纯 , 水为二次重蒸
水。
图 1　梅笠草素的结构
Fig 1　St ructu re of chimaphi lin
2　方法与结果
2.1　色谱条件及系统适用性试验
　　色谱柱:Cosmosil Packed 5C18 ARⅡ (250 mm×4.6 mm ,
5 μm), 流动相:乙腈-水 (72 ∶28), 流速:1.0 mL ·
min-1 , 检测波长:254 nm , 柱温:室温 , 进样量:20 μL 。
理论塔板数按梅笠草素色谱峰计算>10 000 , 分离度>1.5 ,
拖尾因子 0.95 ～ 1.05。
2.2　对照品储备液的制备
精密称取梅笠草素对照品约 25 mg , 置 25 m L棕色量瓶
中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成质量浓度为
1.017 mg·m L-1的对照品储备液。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取鹿衔草药材粉末约 1.0 g , 以 15 倍体积量的
70%乙醇回流提取 2 h , 提取液滤过后蒸干 , 残渣以加甲醇
溶解并定容至 25 mL 棕色量瓶中 , 摇匀 , 过 0.45 μm 滤膜 ,
取续滤液备用。
2.4　标准曲线的绘制
精密量取梅笠草素对照品储备液 0.1 、 0.2 、 0.4、 1.0 、
1.6 、 2.0 mL 于 10 mL 棕色量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇
匀 , 得 10.17 、 20.34 、 40.68、 101.7、 162.7 、 203.4 μg ·
mL-1的对照品溶液 , 依 “2.1” 项下条件进样分析 , 以色谱
峰面积Y 对溶液浓度 X (μg ·mL -1)作图 。计算回归方程
为:Y=2.513×104X -4.717×103 , r=0.999 8 , 说明梅笠
草素在 10.17～ 203.4 μg·mL -1与峰面积线性关系良好。
2.5　精密度试验
取 “2.4” 项下含梅笠草素 101.7 μg·m L-1的对照品溶
液 , 重复进样 5 次 , 计算峰面积 , RSD为 2.0%, 表明精密
度良好。
2.6　重复性试验
称取鹿蹄草样品 5 份 , 依 “ 2.3” 项下方法操作 , 平行
制备 5 份供试品溶液 , 进样测定梅笠草素的含量 , 计算
RSD 为 1.1%, 表明重复性良好。
2.7　加样回收试验
精密称取已知含量的鹿蹄草样品 5 份 , 0.5 g ·份-1 ,
分别精密加入一定量的对照品储备液 , 依 “ 2.3” 项下方法
制备供试品溶液 , 进样分析 , 结果见表 1 , 梅笠草素的平均
回收率为 101.8%, RSD为 1.4%(n=6)。
表 1　梅笠草素的回收测定结果 (n=6)
Tab 1　Recovery of chimaphilin(n=6)
序号
(No.)
称样量
(sam ple
w eigh t)
/ g
已知量
(s amp le
content)
/mg
加入量
(added
content)
/m g
测得量
(detected
con tent)
/m g
回收率
(recovery)
/ %
平均
回收率
(average
recovery)
/ %
RSD
/ %
1 0.503 7 1.415 1.424 2.860 101.5
2 0.500 3 1.406 1.424 2.844 101.0
3 0.501 3 1.409 1.424 2.866 102.4
4 0.505 5 1.420 1.424 2.907 104.4 101.8 1.4
5 0.502 0 1.411 1.424 2.837 100.2
6 0.501 0 1.408 1.424 2.852 101.4
2.8　稳定性试验
取 “2.3” 项下鹿蹄草供试品溶液 1 份 , 室温放置 , 分
别于 0 、 2、 4 、 6、 8 、 12 h 进样分析 , 梅笠草素的平均峰面
积 RSD为 2.2%, 表明供试品溶液在室温下 12 h 内稳定性
良好。
2.9　样品测定
依 “2.3” 项下方法对药材进行处理 , 每种药材平行制
备 3 份溶液 , 分析测定。鹿蹄草及普通鹿蹄草中梅笠草素的
平均含量分别为 0.281%、 0.167%, RSD 分别为 0.5%、
1.1%(n=3), 结果见表 2 , 色谱图见图 2。
表 2　梅笠草素的含量测定结果(n=3)
Tab 2　Content of chimaphilin in Luxiancao(n=3)
样品
(sam ple)
序号
(No.)
含量
(content)
/ %
平均含量
(average
con tent)
/ %
RSD
/ %
鹿蹄草 1 0.281
2 0.282 0.281 0.5
3 0.279
普通鹿蹄草 1 0.166
2 0.169 0.167 1.1
3 0.166
3　讨论
3.1　提取溶解及方法的选择
以超声提取法考察了氯仿 、 乙醇 、 70%乙醇 、 甲醇作为
提取溶剂的提取效果 , 发现梅笠草素在 70%乙醇中提取率
最高。以 70%乙醇为提取溶剂 , 考察了超声法 、 浸泡后超
声和回流提取法的提取效果 , 发现加热回流法的提取效果明
显优于其他 2种方法 , 以 15 倍量的溶剂提取 2 h , 可将指标
成分基本提取完全。
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中南药学 2010年 4月第 8卷第 4期　Cent ral S outh Ph armacy.Ap ri l 2010 , Vol.8 No.4
图 2　对照品 (A)和鹿衔草样品 (B 、 C)色谱图
Fig 2　Ch romatogram of reference(A)and samples(B , C)
A.对照品 (reference);B.鹿蹄草药材 (Py rola cal l iantha);C.
普通鹿蹄草药材 (P yro la decorate);1.梅笠草素 (chimaphilin)
3.2　检测波长的选择
经 H PLC-DVD 测定表明在 254 nm 处梅笠草素有最大
吸收且干扰较少 , 分离效果良好 , 因此选用 254 nm 作为检
测波长。
3.3　小结
中国药典 2005 年版的鹿衔草项下无质量控制方法 , 本
文建立了定量分析该药材中活性成分梅笠草素的高效液相色
谱分析方法 , 并对鹿衔草的 2 种基源鹿蹄草和普通鹿蹄草进
行了测定。从测定结果看出 , 梅笠草素为鹿蹄草和普通鹿蹄
草的共有成分 , 可作为中药鹿衔草的质量控制指标;另外 ,
鹿蹄草和普通鹿蹄草虽为同属植物 , 但梅笠草素的含量不尽
相同 , 在鹿蹄草中含量较大。
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(收稿日期:2009-12-14;修回日期:2010-01-29)
高效液相色谱法测定新乐康片中钩藤碱的含量
彭国庆 , 曹岳华 (岳阳市二人民医院药剂科, 湖南 岳阳　414000)
摘要:目的　建立新乐康片中钩藤碱的含量测定方法。方法　采用 HPLC 法 , Phenomexne BDS C18柱 (4.6 mm×
250 mm , 5 μm), 流动相为甲醇-0.5%三乙胺 (冰醋酸调节 pH 值 5.2) (70∶30);检测波长为 254 nm;流速为
0.8 mL ·min -1 , 柱温为室温。结果　钩藤碱进样量在 0.010 2 ～ 0.061 2μg 与峰面积呈良好的线性关系 , 平均回收
率 101.7%, RSD 为 1.87%。结论　该方法可靠 、 简单可行 , 为控制新乐康片的质量提供了科学依据。
关键词:新乐康片;钩藤碱;高效液相色谱
中图分类号:R927.2　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672-2981 (2010)04-0274-03
　　作者简介:彭国庆 , 男 , 主管药师 , 主要从事医院制剂工作 , Tel:(0730) 8713793。
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C ent ral S outh Ph arm acy.Ap ri l 2010 , Vol.8 No.4　中南药学 2010年 4月第 8卷第 4期