全 文 ：高效液相法对当药中龙胆苦苷的定量测定
吴银生 (江苏省苏州市药品检验所 , 215002)
　　　　关键词　当药　龙胆苦苷　高效液相色谱法
　　当药为龙胆科獐牙菜属植物紫花当药 Swert ia
pseudochinesis Hara.的全草。 具清热、利湿、健脾等
功效 ,用于黄疸型肝炎 ,急性细菌性痢疾 ,消化不良
等。其主要成分有龙胆苦碱 ,龙胆碱 ,当药苦苷等 [1 ]。
本文探讨了当药中当药苦苷利用高效液相色谱法定
量测定条件 [2 ]。并对不同地方的当药中的龙胆苦苷
进行了含量测定。
1　仪器与试剂
岛津 LC-10A高效液相色谱仪 ; CR6A数据处
理机 ;龙胆苦苷 (中国药品生物制品检定所 ) ;乙腈
(色谱纯 )甲醇、乙醇、丙酮均为分析纯 ;样品安徽亳
州 ,河北安国 ,苏州市售品。
2　定量分析
2. 1　色谱柱条件　柱: Kromasil C18 ( 4. 6 ( 250)
mm;检出 ; SPD-10A多波长检出器 ( 274 mm) ;流动
相: 12%乙腈 ;流速: 1. 0 ml /min;柱温:室温。
2. 2　线性关系试验　精取龙胆苦苷对照品溶液
( 20μg /m l) 1～ 6μl注入柱内以龙胆苦苷的浓度为
横坐标 ,相应的峰面积为纵坐标作图 , 为一通过原
点的直线 ,其回归方程为 Y= 15 971 841X+ 28 752,
r= 0. 999 4。
2. 3　精密度试验　取上述同一浓度对照品溶液 3
m l重复进样 6次 ,求得平均峰面积 ,相关标准偏差
RSD= 1. 21% 。
2. 4　加样回收试验　取已测定含量的供试品适量 ,
分别添加一定量的龙胆苦苷对照品 ,照供试品溶液
制备与含量测定项操作 ,依法测定 ,计算供试品的加
样回收率 ,结果见表 1。
表 1　龙胆苦苷的加样回收率 ( R SD= 0. 41% )
样品中龙胆苦苷量
(μg )
添加龙胆苦苷量
(μg)
测定量
(μg)
回收率
(% )
x
0. 152 0. 203 0. 351 98. 87 99. 02
0. 152 0. 203 0. 350 98. 59
0. 152 0. 203 0. 353 99. 44
0. 304 0. 203 0. 502 99. 01
0. 304 0. 203 0. 504 99. 40
0. 304 0. 203 0. 501 98. 81
2. 5　样品溶液与标准溶液的制备
样品溶液的制备: 取当药全草 ,粉碎成粉末 ( 80
目 )置于干燥器中干燥至恒重 ,精密称取样品粉末
0. 14 g置 25 m l量瓶中 ,加适量水 (接近刻度 )超声
15 min加水至刻度 ,摇匀 ,取其溶液离心 ,取上清液
作为供试品液。标准品溶液的制备:精取龙胆苦苷对
照品约 2 mg置 10 ml量瓶中 ,加适量水振摇使溶
解 ,加水至刻度 ,摇匀作为供试品溶液。
2. 6　样品的含量测定　分别吸取上述供试品溶液
10μl,注入高效液相色谱仪 ,按前述色谱条件进行
分析 ;另取龙胆苦苷对照品溶液 ( 200μg /ml ) 5μl注
入柱内 ,同法测定 ,按回归方程式算出当药中龙胆苦
苷的含量 ,结果见表 2。
表 2　不同地方当药中龙胆苦苷的含量测定 (n= 4)
样品编号 龙胆苦苷含量 (% ) RSD(% )
1 0. 74 1. 32
2 0. 83 1. 46
3 0. 86 1. 28
　　如上表所示 ,不同地方的当药中龙胆苦苷均在
0. 8%左右。当药中龙胆苦苷的色谱图与其它成分完
全分离 ,龙胆苦苷的峰在 8 min左右出现。
3　提取条件的探讨
3. 1　提取溶媒　精密称量样品约 0. 14 g,置 25 ml
量瓶中 ,分别加水、甲醇、乙醇、丙酮作溶媒进行提
取 ,结果以水作提取溶媒 ,龙胆苦苷的提取率最高。
3. 2　提取次数　精密称取样品约 0. 14 g,置 25 ml
量瓶中 ,加水至接近刻度 ,连续提取 3次 ,然后进行
各提取液中龙胆苦苷的定量。实验证明 ,样品中的龙
胆苦苷 1次提取就几乎完全提出。
3. 3　提取时间　精密称取样品约 0. 14 g ,加水作溶
媒后分别超声 5、 10、 15、 20、 25 min,进行探讨。结果
表明 ,几个样品中的龙胆苦苷都在 15 min内就能达
到一定值 ,作者认为即便增加提取时间 ,也不会增加
其提取值。
3. 4　流动相中乙腈浓度　用不同浓度的乙腈 ,结果
以 12%乙腈的分离效果较理想 ,最大吸收波长在
274 nm ,故采用多波长检测器 ,测定波长为 274 nm。
4　小结
本文对当药中龙胆苦苷进行了分离定量 ,并对
测定条件进行了探讨 ,确立了本测定方法。作者认为
本法简便、快速 ,样品不需要提前处理 ,不需加内标
物 ,对当药及其制剂的质量评价有一定的实用性。
参考文献
1　沙世炎 ,等 .中草药有效成分分析法 .上册 .北京:人民卫生出版
社 , 1981: 96.
2　赤田良信 ,等 .高效液相法对日本当药中龙胆苦甙的定量 .日本药
学杂志 , 1980; 100( 6): 678. ( 2001-07-11收稿 )
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基层中药杂志　 2001年　第 15卷　第 6期
Prima ry Journal o f Chinese Materia Medica
DOI : 10. 13728 /j . 1673 -6427. 2001. 06. 017