全 文 ：　　表 1　桑枝 、桑白皮对 HepG2细胞的影响( x±s, n=6)
组别 培养条件药物(mg/L)胰岛素(mmol/L)
MTT
(A490)
GC
(mmol/L)
对照组 0.969±0.046 1.90±0.60
10-7 0.975±0.062 2.35±0.59
桑枝组 1.0 0.944±0.132 3.55±0.87＊＊
1.0 10-7 1.044±0.107 3.99±0.93■■
0.1 0.975±0.106 3.15±0.92＊
0.1 10-7 0.933±0.079 3.26±0.67■
0.01 1.011±0.118 2.98±0.81＊
0.01 10-7 0.992±0.076 3.32±0.81■
0.001 0.997±0.132 2.60±0.47
0.001 10-7 0.905±0.133 2.81±0.53
桑白皮组 1.0 0.926±0.089 3.14±0.98＊
1.0 10-7 0.955±0.073 3.29±0.89■
0.1 1.059±0.103 3.11±0.81＊
0.1 10-7 0.962±0.095 3.37±0.80■
0.01 0.957±0.068 2.86±0.74
0.01 10-7 0.960±0.098 3.14±0.99
0.001 0.940±0.030 2.61±0.96
0.001 10-7 0.969±0.046 2.74±0.77
二甲双胍 1.047±0.116 3.11±0.93＊
　　与不加胰岛素的对照组比较 ＊ P<0.05;＊＊P<0.01;与加胰岛素的对照
组比较 ■ P<0.05, ■■ P<0.01
3　讨论
　　糖尿病是一种伴有血糖升高的代谢性疾病 , 主要有 1型和
2型两种类型 , 临床 2型糖尿病占 90%以上。 2型糖尿病的主
要特征之一是胰岛素抵抗 , 肝脏 、骨骼肌 、脂肪等靶组织对葡萄
糖的摄取减少 ,造成血液中葡萄糖水平升高 , 形成高血糖并常
伴有高胰岛素血症。因此 ,研究提高胰岛素效能 , 包括促进器官
组织对葡萄糖的摄取 ,成为糖尿病药物研究中重要的课题。
　　在高糖环境中 ,桑枝 、桑白皮均有一定的降糖作用 , 可使培
养液中的 HepG2的葡萄糖消耗量增加 , 同时桑枝 、桑白皮对胰
岛素刺激的 HepG2葡萄糖消耗有协同增强作用。 MTT数值的
高低主要代表细胞数的多寡 ,因此可以通过 MTT法观察细胞增
殖的情况 [ 4] 。本实验中 , 桑枝 、桑白皮对 HepG2细胞的增殖没
有显著性的影响 ,也说明桑枝 、桑白皮增加葡萄糖的消耗及其
协同胰岛素的作用并非通过增加 HepG2细胞数目来完成的。
本研究提示:促进外周组织特别是肝脏的葡萄糖代谢 、提高肝
细胞对胰岛素的敏感性可能是桑枝 、桑白皮防治 2型糖尿病作
用的机理之一 ,其具体的作用机理及其效应的物质基础仍有待
于进一步深入研究。
参考文献
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toxicityagainstU 937cellsbyhumanmonocytesandmacrophagesinamodi-
fiedcolorimetricMTTassay.ImmunolMethods, 1991;141(1)∶15～ 22
StudyonhypoglycemicefectsofextractsofRamulusMori(桑枝)andCortexMori(桑白皮)invitro
WangNing1 , 2 , ZhuQuan1 , ZhouYiwei2 , TongHuangjing2
(1 NationalStandardLaboratoryofPharmacologyforChineseMateriaMedicine, NanjingUniversityofTCM, Nanjing　210029;
2 DepartmentofPharmacy, AnhuiColegeofTCM, Hefei　230038)
　　Objectsive:ToobservetheeffectsofextractsofRamulusMoriandCortexMorionglucoseuptakinginculturedHepG2celsinvitroand
investigatethehypoglycemicmechanismoftheminitialy.Methods:HepG2 cels, thephenotypeofwhichissimilartothatofthehuman
hepatocytes, wereusedtodetectthe24 hours, consumptionofglucoseinculturedfluid, MTTassaywasusedtomonitortheproliferationof
theHepG2 cels.Results:RamulusMoriandCortexMoricouldincreasetheglucoseconsumptionofHepG2 celsandenhancetheglucose
consumptionincoordinationwithinsulin.Conclusions:Promotingtheglucoseuptakerateofperipheraltissueandenhancethesensitivityof
hepatocytestoinsulinmaybeoneofthepossiblehypoglycemicmechanismsofRamulusMoriandCortexMori.
Keywords　HepG2 cell;RamulusMori(桑枝);CortexMori(桑白皮);glucoseconsumption
竹节人参对脑缺血大鼠兴奋性氨基酸的影响
肖本见 ,陈国栋 ,谭志鑫 ,李玉山 ,梁文梅 1
(湖北民族学院医学院 ,恩施　445000;1湖北施恩堂制药有限公司 ,恩施　445000)
　　摘　要　目的:探讨富硒竹节人参对大鼠脑缺血及其再灌注后脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响。方法:将大鼠用富硒
竹节人参处理后 , 建立大鼠脑缺血模型 , 观察富硒竹节人参对大鼠脑组织中的谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、
甘氨酸(Gly)的影响。结果:富硒竹节人参对正常大鼠脑组织 EAA含量无影响 ,可使脑缺血及其再灌注损伤大鼠脑组织 Glu、Asp含
量降低 , 对 GABA、Gly无明显影响。结论:富硒竹节人参可对抗缺血性脑损伤 ,防止缺血时 EAA的升高 , 从而发挥对脑损伤的保护
作用。
　　关键词　竹节人参;脑缺血;兴奋性氨基酸
36 中药药理与临床 2005;21(6)DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2005.06.018
　　兴奋性氨基酸(excitatoryaminoacid, EAA)在脑缺血缺氧
及其再灌注后的脑组织损伤中起重要作用。竹节人参兼有人
参和三七两药之功效 ,能滋补强壮 、活血化瘀。而生长在有 “中
国硒都”之称的湖北恩施的竹节人参 , 由于其富硒而使药效独
特 , 疗效显著。现已大规模种植 ,家种竹节人参具有野生竹节人
参一样的药用价值 [ 1] 。本实验研究了富硒竹节人参对大鼠脑
缺血及其再灌注后脑组织中兴奋性氨基酸的影响。
1　实验材料
1.1　试验药物　富硒竹节人参由恩施峰岚板桥党参有限公司
提供。由本院中药制剂实验室取根粗粉用水煎煮后采用沉淀
法制备成注射剂。含量为 2g生药 /ml, 采用双道束原子荧光光
谱法测定硒的含量为 820μg/L, 用时以生理盐水稀释成 0.4g/
ml。
1.2　动物　Wister大鼠 60只 ,体重 200 ～ 250g, ♂♀各半 ,由湖
北省实验动物中心提供。
1.3　试剂　谷氨酸(glutamate, Glu)、天冬氨酸(asparate, Asp)、
γ-氨基丁酸(gama-aminobutyricacid, GABA)、甘氨酸(glycine,
Gly)标准品均为美国 Sigma公司产品 , 纯度为 99.99%, 其它试
剂均为国产分析纯。
1.4　方法　大鼠随机分为 6组 , ip药物或等量生理盐水 10ml/
kg,每日 1次 , 连续 2d,实验前 30min给药 1次。 ip盐酸氯氨酮
60mg/kg(1.2 ml/kg)麻醉 ,分离两侧颈总动脉 ,除正常对照组和
竹节人参对照组外 , 各组均以无创性小动脉夹夹闭两侧颈总动
脉造成脑缺血。缺血模型组和缺血竹节人参组于缺血 15min后
迅速处死 , 取脑置冰箱内保存待测;再灌注模型组和再灌注竹
节人参组在缺血 15min后松开动脉夹再灌注 ,缝合皮肤继续饲
养 , 二组均于再灌注后 12h、24h、36h按上述剂量 ip药物或生理
盐水 , 再灌注后 48h立即处死 ,取脑待测。正常对照组和竹节人
参对照组不结扎两侧颈总动脉 , 其他操作与再灌注各组相同。
各组大鼠处死后取出两侧脑组织 , 在冰台上迅速分离双侧前脑
皮质和海马 , 以冰生理盐水冲洗后除去残血 , 吸干后称重 , 按 1
∶9比例加入无水乙醇 , 以高速匀浆机在冰浴下制成 10%脑匀
浆液。匀浆条件为 10s/次 , 停 15s, 共计 4 次。将匀浆液于
3500rpm(4℃)离心 5min,分离上清液 , 于 -30℃保存待测。测
试前标本复溶 , 再 1000rpm(4℃)离心 10min, 取上清液 , 检测条
件及方法按 Chen等 [ 2]建立的高效液相色谱仪法进行 , 进样量
为 100μl, 检测大鼠脑组织中谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-
氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的含量。
2　结果
2.1　对脑组织中兴奋性氨基酸 Glu、Asp含量的影响　富硒竹
节人参对正常大鼠脑组织 Glu、Asp含量影响不大 , 缺血 15min
后 , 缺血模型组脑组织 Glu、Asp含量明显高于正常对照组;缺血
竹节人参组脑组织 Glu、Asp含量低于缺血模型组。再灌注 48h
后模型组脑组织 Glu、Asp含量明显高于正常对照组;再灌注竹
节人参组脑组织 Glu、Asp含量低于再灌注模型组 , 结果见表 1。
2.2　对脑组织中抑制性氨基酸 GABA、Gly含量的影响　富硒
竹节人参对正常大鼠脑组织 GABA、Gly的含量影响不大 , 除缺
血模型组及再灌注模型组脑组 GABA含量高于正常对照组外 ,
其他各组相比均无统计学意义。各组脑组织 Gly含量比较差异
均无统计学意义 ,结果见表 1。
　　表 1　对脑组织氨基酸含量的影响(μmol/g, x±s, n=10)
Group Glu　 Asp　 GABA　 Gly　
正常对照　　　6.83±0.78 0.78±0.28 0.86±0.28 0.95±0.19
竹节人参对照　6.84±0.64 0.79±0.25 0.87±0.29 0.94±0.18
缺血模型　　　8.18±0.55＊＊ 1.36±0.22＊＊ 1.32±0.31＊ 0.98±0.18
缺血竹节人参　7.49±0.65■ 1.16±0.20 1.29±0.27 1.02±0.20
再灌注模型　　8.72±0.48＊＊ 1.41±0.27＊ 1.03±0.24 0.91±0.23
再灌注竹节人参 7.86±0.77# 1.13±0.28 1.11±0.25 0.95±0.29
　　与正常对照组相比 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01;与缺血组相比 ■ P<0.05,
■■ P<0.01;与再灌注组比较 #P<0.05, ##P<0.01
3　讨论
　　EAA主要是指 Glu和 Asp, Glu是中枢神经系统中含量最
高 、分布最广 、作用最强的兴奋性神经递质。 脑缺血缺氧损伤
时 ,脑内产生大量的 EAA,作用其受体 , 导致细胞内钙超载及一
系列的变化 ,最终使神经细胞代谢衰竭而死亡。 EAA升高的程
度与脑损伤的程度有关 , 损伤越严重则 EAA升高越显著 , 持续
时间越长。脑缺血缺氧过程中 , 自由基反应也是引起脑损伤的
另一个重要因素 ,在正常情况下 , 不致引起病理效应 , 但在脑缺
血缺氧情况下 ,自由基产生过多 , SOD含量明显降低 , 引起细胞
损伤 ,脑损伤越严重 , SOD降低愈明显 [ 3] 。有研究表明竹节人
参有抗疲劳 [ 4] 、抗炎 、镇痛作用 ,对垂体后叶素造成的小鼠心肌
缺血损伤 、大鼠胃缺血再灌注损伤有保护作用。本研究结果表
明 ,竹节人参可对抗缺血性脑损伤 , 防止缺血时 EAA的升高。
脑内 EAA的作用机理极为复杂 , 各种影响因素又密切相关 , 这
为中医药的多靶点研究提供了广阔的思路。竹节人参对缺血所
致小鼠脑损伤具有明显的保护作用 , 其作用机理可能与对抗脑
缺血时 EAA的升高及清除过多自由基等有关。
参考文献
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版), 2001;18(3)∶4 ～ 6
EfectofPanaxjaponicusonthecontentsoftheexcitatory
aminoacidinthebraintisueofratwithcerebralischemia
XiaoBenjian, ChenGuodong, TanZhixin, LiYushan, LiangWenmei
(TheMedicalSchoolofHubeiInstiuteforNationalities, Enshi　445000)
　　Objective:Tostudytheeffectofrichselenium-Panaxjaponicusonthecontentoftheexcitatoryaminoacid(EAA)inthebraintissueof
ratintheconditionoftheratcelebralischmiaandreirrigation.Methods:Aftertreatedwithrichselenium-Panaxjaponicus, theratcelebral
37中药药理与临床 2005;21(6)
ischmiamodelwasestablished, Toobservetheefectsofrichselenium-Panaxjaponicusonglutamate(Glu), asparate(Asp), gama-aminobu-
tyricacid(GABA)andglycine(Gly)inthebraintissueofrat.Results:Richselenium-Panaxjaponicushadn tapparentefectonEAAcon-
tentsofnormalbraintissue, coulddecreasethecontentofGluandASPintheratbraintissueintheconditionofcerebralischmiaandreirri-
gation, hadn tapparentafectonthecontentsofGAGBandGly.Conclusion:Richselenium-PanaxjaponicuscankeeptheEAAcontent
fromincreasingintheconditionofcerbralischemia, itcanprotecttheiniuredbrain.
Keywords　Richselenium-Panaxjaponicus;cerebralischemia;excitatoryaminoacid
灵芝及其复方合剂对化学性肝损伤的保护作用＊
江海涛 ,侯玉如 ,余多慰＊＊ ,吴京燕 1 ,程光宇 1
(南京师范大学生命科学学院 ,南京　210097;1江苏吴中大自然生物工程有限责任公司 ,南京　210097)
　　摘　要　研究灵芝的不同提取物及灵芝与姜黄 、黄芪等配伍的合剂对小鼠化学性肝损伤的预防和保护作用。结果显示灵芝
提取物及其复方合剂能显著抑制谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性的升高;降低丙二醛(MDA)含量 , 增加 SOD的活性;组
织学检测结果表明给药组小鼠的肝损伤程度明显减轻。因此 ,灵芝提取物及其复方合剂对四氯化碳(CCl4)引起的急性化学性肝损
伤有明显的预防和保护作用。
　　关键词　灵芝;化学性肝损伤
　　现代药理学研究表明灵芝对实验性肝损伤具有良好的保
护作用 [ 1～ 3] 。黄芪有效成分也具有保肝作用 [ 4 , 5] 。姜黄提取物
对实验性肝脏损伤也具有预防和保护作用 [ 7] 。本文研究了灵
芝提取物以及灵芝与姜黄 、黄芪配伍的合剂对 CCl4所致化学性
肝脏损伤的保护作用 。
1　材料和方法
1.1　试验药物　灵芝多糖由江苏吴中大自然生物工程有限责
任公司提取和制备 , 灵芝浸膏由江苏东台菇神食用菌研究所提
供 , 姜黄 、黄芪购自安徽亳州。
1.2　动物　雄性 NIH小鼠 , 20 ～ 24g, 购自南京医科大学动物
实验中心。
1.3　试剂　谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)测试试剂盒
(南京建成生物工程研究所);氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、蛋氨
酸(Met)、硫代巴比妥酸(TBA)、十二烷基磺酸钠(SDS)(北京
化学试剂公司),其余试剂均为国产分析纯 。
1.4　方法　小鼠随机分组 ,每组 15只 ,分别灌胃受试物 30天
后 , 用 1% CCl
4
(植物油配制并用超声波处理均匀)造模 , 剂量
为 5ml/kg。造模前禁食 16h, 造模后继续禁食 4h, 然后添加饲
料 , 处死前再继续禁食 12h左右。采用 NBT光化还原法 [ 8] , 取
尾血 20μl测定 SOD。取 0.5g肝脏 , 活性测定肝脏 SOD。红细
胞和肝脏 MDA的测定采用 TBA比色法 [ 9] 。 AST、ALT测定均
按照试剂盒中说明的比色法进行操作。总糖采用蒽酮硫酸
法 [ 10] ,还原糖采用 DNS(3, 5—二硝基水杨酸)法 [ 11] 。肝组织经
12%甲醛溶液固定后石蜡切片 , 常规病理制片 、HE染色 ,镜检。
2　结果
2.1　三种灵芝制剂多糖的含量分析　用蒽酮 -硫酸法和 DNS
法相结合测量提取液中的多糖含量 ,见表 1。
　　表 1　灵芝浸膏 、灵芝多糖及灵芝合剂中多糖含量(%, x±s)
样品 总糖 还原糖 多糖
灵芝浸膏 9.9±0.76 3.37±0.42 6.53±0.52
灵芝多糖 15.6±0.92 4.17±0.37 11.53±0.79
灵芝合剂 20.6±1.74 1.41±0.15 19.51±1.54
2.2　灵芝提取物及其合剂对 AST、ALT酶活性的影响　模型组
小鼠血清 AST、ALT活性明显升高。服用灵芝提取物及灵芝合
剂其血清中的两种酶均有明显降低 ,见表 2。
表 2　灵芝提取物及其合剂对小鼠血清 AST、ALT酶活性的影响( x±s)
组别 剂量(mg/kg)
AST　　　
(U/ml)　　　
ALT　　　
(U/ml)　　　
正常对照 57.45±7.09＊＊ 48.24±2.403＊＊
模型对照 584.13±63.06 609.18±27.05
联苯双脂 150 290.73±21.93＊＊ 83.89±8.36＊＊
灵芝浸膏 150 330.71±11.09＊＊ 330.82±15.25＊＊
灵芝多糖 150 306.43±11.10＊＊ 317.84±30.21＊＊
合剂　　 150 337.92±9.39＊＊ 411.38±35.21＊＊
合剂　　 450 314.81±8.21＊＊ 309.43±13.46＊＊
　　与模型组相比 ＊P<0.05, ＊＊ P<0.01(下同)
2.3　灵芝提取物及其合剂对 SOD活性 、MDA含量的影响　小
鼠经 CCl4造模后 , 血液 SOD及肝匀浆 Mn-SOD的活性显著降
低。给予灵芝提取物及其合剂后 , 小鼠 SOD活性能明显提高;
血液及肝匀浆 MDA含量明显降低 ,见表 3。
　表 3　灵芝提取物及其合剂对 SOD活性 、MDA含量的影响( x±s)
组别 剂量(mg/kg)
血液
SOD(U/ml) MDA(nmol/ml)
肝匀浆
Mn-SOD(U/ml) MDA(nmol/ml)
正常对照 350.73 ±7.90＊＊ 15.16±0.99＊＊ 374.42±8.42＊＊ 15.32±1.41＊＊
模型对照 294.55 ±6.994 25.36±1.97 267.57±21.98 50.76±4.65
联苯双酯 150 336.11 ±6.59＊＊ 16.31±1.11＊＊ 286.97±25.56＊ 24.65±2.36＊＊
灵芝浸膏 150 341.04 ±5.32＊＊ 18.09±0.69＊＊ 280.95±6.17＊ 25.54±2.52＊＊
灵芝多糖 150 324.60 ±4.03＊＊ 16.33±0.81＊＊ 299.87±20.94＊＊ 21.38±3.45＊＊
合剂　　 150 349.14 ±3.95＊＊ 20.31±0.87＊ 277.82±11.76 35.43±4.17＊＊
合剂　　 450 341.44 ±6.52＊＊ 19.86±0.76＊ 305.37±21.62＊＊ 31.67±3.51＊＊
38 中药药理与临床 2005;21(6)
＊ 基金项目:江苏省教育厅资助项目(03KJB180064)　　　　＊＊通讯作者