全 文 ：开口箭属五种植物同工酶酶谱分析
濮社班① 钱士辉② 袁昌齐③ 丁志遵③
(①中国药科大学中药学院 南京 210038)
(②江苏省中医药研究院 南京 210028 ③江苏省/中国科学院植物研究所 南京 210014)
摘要 分析了开口箭属五种植物过氧化物酶同工酶和可溶性蛋白谱带 , 为其种间鉴别提供了分子生物学依
据。
关键词 开口箭属;过氧化物酶同工酶;可溶性蛋白
Study on Peroxidase Isozymes and Soluble Proteins of 5 Tupistra Species Pu Sheban(China Pharmaceutical University ,
Nanjing 210038)
In this paper , peroxidase isozymes and soluble proteins of 5 Tupistraspecies are studied to provide molecular biology evidence
of differences between species.
Key words Tupistra;Peroxidase Isozymes;Soluble Proteins
本文报道了对开口箭属五种植物过氧化物酶同工酶和可溶性蛋白谱带的分析。
1 材料和方法
实验材料均为栽培在南京中山植物园内的开口箭属五种植物的新鲜叶片[ 1] 。
过氧化物酶同工酶样品制样方法:称取 0.2g 新鲜叶片 ,加入 1ml pH8.2 Tris-柠檬酸和 0.5ml
10%甘油溶液 ,在冰浴中碾磨成浆。低温离心(10000转/分)20分钟 ,取上清液即可点样 ,每管柱加
30μl。
可溶性蛋白样品制样方法[ 1] :称取 2.5g新鲜叶片 ,在低温冰箱中固定 1小时 ,然后加电极缓冲
液pH8.2Tris-HCl 5ml ,在冰浴中匀浆。低温离心(3500 转/分)10 分钟 ,上清液再以 4000 ～ 100000
转/分离心 15分钟 ,该上清液供电泳分析用 ,每管柱加 70μl。
同工酶分离采用垂直平板聚丙烯凝胶电泳。分离胶浓度为 7%,浓缩胶浓度为 4%, 0.2%溴酚
兰作为前沿指示试剂 。电泳在冰箱中进行 ,电泳电压为 130伏 ,电泳时间为 10小时 ,过氧化物酶同
工酶采用改良的醋酸联苯胺法染色;可溶性蛋白采用的染色液为 0.3%考马斯亮兰溶液(用 40%甲
醇与 7%醋酸配制)每分样品重复 3 ～ 4次。
2 结果与分析
五种植物共有 15条过氧化物酶同工酶谱带 ,迁移率为 0.04 ～ 0.78 ,见表 1。
从表 1可知 ,整个谱带明显分为两个带区 P-1(Rf=0.04 ～ 0.40)和 P-11(Rf=0.62 ～ 0.78)。
碟花开口箭和峨眉开口箭的谱带相近 ,它们第 8 、9 、11条谱带相同;凉山开口箭和齿瓣开口箭的谱
带相近 ,它们第 7 、10 、13条谱带相同;长穗开口箭仅有两条谱带 ,分属于两个带区 ,迁移率分别为 Rf
=0.19和 Rf=0.62。
62 中国野生植物资源 第 19卷第 5期
表 1 五种植物过氧化物酶同工酶谱带相对迁移率(Rf值)
编号 长穗开口箭 凉山开口箭 齿瓣开口箭 碟花开口箭 峨眉开口箭
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
0.19
0.62
0.04
0.12
0.21
0.28
0.36
0.62
0.66
0.14
0.28
0.36
0.40
0.62
0.66
0.78
0.30
0.34
0.38
0.21
0.25
0.30
0.34
0.38
0.62
五种植物共有 22条可溶性蛋白谱带 ,迁移率为 0.08 ～ 0.96 ,见表 2。
表 2 五种植物可溶性蛋白谱带相对迁移率(Rf值)
编号 长穗开口箭 凉山开口箭 齿瓣开口箭 碟花开口箭 峨眉开口箭
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
0.42
0.49
0.96
0.08
0.30
0.40
0.42
0.49
0.53
0.55
0.57
0.61
0.96
0.08
0.15
0.20
0.24
0.25
0.27
0.30
0.33
0.38
0.40
0.42
0.49
0.51
0.55
0.57
0.61
0.63
0.91
0.96
0.08
0.27
0.35
0.40
0.42
0.49
0.61
0.93
从表 2可知 ,整个谱带明显分为两个带区 SF -1(Rf =0.08 ～ 0.63)和 SF -11(Rf =0.91 ～
0.96)。碟花开口箭和齿瓣开口箭的谱带相近 ,它们第 1 、6 、11 、12 、13 、18条谱带相同;凉山开口箭和
齿瓣开口箭的谱带相近 ,它们第1 、7 、11 、12 、13 、16 、17 、18 、22条谱带相同;长穗开口箭和峨眉开口箭
则发生了相似的酶扩散现象 ,长穗开口箭仅具 3 条明显的谱带 ,而峨眉开口箭仅具 1条明显的谱
带。
过氧化物酶同工酶谱带 P-I带区和可溶性蛋白谱带SF-1带区 ,五种植物均具有各自特有的
谱带 ,这些谱带具有种间鉴别意义 。
以上实验结果表明 ,凉山开口箭和齿瓣开口箭的谱带相近 ,碟花开口箭和峨眉开口箭的谱带相
近 ,长穗开口箭的谱带很少 ,而前文[ 2 , 3]报道其根状茎解剖结构和叶片解剖结构及花粉粒外壁纹饰
63开口箭属五种植物同工酶酶谱分析
皆另成类型 ,建议将长穗开口箭归入开口箭组(Sect .Tupistra),且建立一组下单位 ,命名为木栓开口
箭系 Series Suberitupistra .
参 考 文 献
1 吴少伯.植物蛋白质及同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳.植物生理学通讯.1979:(1):30-33
2 钱士辉 ,刘正堂 , 陆中胜等.开口箭属植物形态学和根状茎组织学的研究.中国野生植物资源.1999:18(3):33 ～
35
3 濮社班 ,钱士辉 , 丁志遵等.开口箭属五种植物的花粉形态学研究.中国野生植物资源.1999.18(2):36～ 37
全国第四届天然药物资源学术研讨会纪要(摘登)
天然药物资源专业委员会办公室
2000年 8月 24日
一 、由中国自然资源学会天然药物资源专业委员会召开的“全国第四届天然药物资源学术研讨
会”于 2000年 8月 14日 ～ 17日在辽宁省大连市举行 ,会议由吉林亚泰制药 、大连天富科技开发公
司药物研究所协办。
参加会议的 131位代表来自全国 27个省(市)、自治区 ,他们中有教师 、科技工作者 、企业家 、医
生及管理工作者 。
天然药物资源专业委员会主任委员 、中国药科大学周荣汉教授代表专业委员会作题为“协助推
行中药材GAP ,积极参与西部大开发”的工作报告 。报告分两部分:
1.工作成绩:近两年来学会做了一些工作:积极参与资源科学体系的建设;协助国家药品监督
管理局起草 、宣传中药材GAP;编辑出版《中国源科学百科全书》第十六分册《天然药物资源学》以及
《会讯》 、《天然药物资源开发利用》等 ,协助编辑出版《中国濒危野生药用动植物资源的保护》 、《中国
野生植物资源》杂志;动物药专业组开展了动物药 GAP及动物药开发研究;资源保护专业组开展了
珍稀濒危动物(虎)、植物的保护 、调研及宣传工作 。
2.今后任务:继续协助政府部门推行中药材 GAP;积极参与西部大开发;继续贯彻中国科协“千
厂千会协作行动” ,帮助有关企业开发产品 ,繁荣经济。
二 、大会共收到论文 122篇 ,载入论文集的有 109篇 ,其中大会发言的有 15篇。
8月 16日分会报告交流 ,第一分会场:中药材生产及中药材GAP;第二分会场:资源开发 、资源
化学及基础性研究。
交流会内容丰富多样 ,论文报告后 ,与会代表积极提出问题和意见 ,讨论十分热烈。
三 、8月 15日晚 ,召开了“西部大开发”座谈会 ,除西部地区代表外 ,东部地区及香港代表也积
极参加讨论会。大家针对西部地区丰富的资源和脆弱的生态环境提出了很多建设性意见 ,如深层
次开发特产资源(如苦豆子)、“退耕还甘草 、芨芨草 、牧草”等 。经过 3个小时热烈的讨论 ,大家一致
赞成“西部大开发”作为下一届学术研讨会的主题 。宁夏药物研究所王忠效所长表示 ,欢迎 2002年
8月在宁夏银川市召开第五届全国天然药物资源学术研讨会 ,并愿做好各项承办工作。
四 、会议期间 ,专门召开了天然产物专题讨论会 ,大家认为在当前国内植物提取物企业日益发
展 ,国际市场又面临进入WTO的新形势 ,为了加强同行业的协调与交流 ,有必要成立“天然产物专
业学组” 。经过讨论 ,决定成立“天然产物专业学组” 。欢迎同道参与 。
64 中国野生植物资源 第 19卷第 5期