全 文 ：第 29卷 ,第 5期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 9 , No . 5
2 0 1 2年 9月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory September , 20 12
车前草中多酚的抗氧化活性
① 联系人 ,手机: ( 0) 13660059642; E-mail: yanqiuping1986@ 163. com
作者简介:颜秋萍 ( 1986— ) ,女 ,重庆市人 ,在读硕士 ,主要从事天然药物化学研究工作。
收稿日期: 2011-11-17;接受日期: 2011-12-11
颜秋萍①　郑 杰　郑 扬　赵肃清　张
(广东工业大学轻工化工学院　广州市广州大学城外环西路 100号　 510006)
摘　要　采用福林 -酚法测定车前草 60%乙醇提取物和不同极性部位的总多酚含量 ,应用 DPPH法、
ABTS法和邻苯三酚法 ,研究上述提取物对自由基的清除能力。 车前草正丁醇相的总多酚的含量最高 ,正
丁醇相对 DPPH自由基和 ABTS自由基显示了较强的清除能力 ,其各相的抗氧化活性大小与总多酚的含
量高低顺序一致 ;而乙酸乙酯相对 O-2 · 的清除能力最强。实验结果表明 ,车前草 60%乙醇提取物及其不同
极性部位都具有抗氧化作用 ,其活性部位为正丁醇相和乙酸乙酯相。
关键词　车前草 ;多酚 ;抗氧化
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2012) 05-2739-04
1　引言
自由基是体内组织生命活动的产物 ,正常情况下 ,体内自由基的产生和消除处于一种动态平衡
状态 ,当由于某种原因这种动态平衡状态被打破后 ,自由基就会攻击体内组织中的不饱和脂肪酸 ,
引发一系列自由基反应。 自由基和脂质过氧化损伤是动脉粥样硬化、 癌症、肝病和老化的主要因
素 [1 ]。由于某些合成的抗氧化剂 ,如丁基羟基茴香醚和丁基羟基甲苯可能存在潜在的致癌作用 [2, 3 ] ,
所以寻找安全有效的天然抗氧化剂成为目前的研究热点。
车前草为车前科植物车前或平车前的干燥全草 ,化学成分主要为多糖类、黄酮及其苷类、环烯
醚萜类、苯乙酰咖啡酰糖酯类、三萜类、挥发油类等 ,具有抗氧化、利尿通淋、清热明目、镇咳祛痰的
作用 [ 4 ]。据研究表明车前草的多糖类、黄酮类化合物都具有抗氧化活性 [5, 6 ]。 本文采用 DPPH法、
ABTS法和邻苯三酚测定车前草 60%乙醇提取物及其不同极性部位的抗氧化性 ,确定其抗氧化活
性部位 ,以及抗氧化活性与多酚含量之间的关系。
2　实验部分
2. 1　仪器及试剂
KQ-50DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ; R-1001N型旋转蒸发仪 (郑州长
城科工贸有限公司 ) ; U-1901型紫外分光光度计 (北京普析通用仪器有限公司 )。 车前草 (广州清平
中药市场 ) ; 1, 1-二苯基-2-苦基苯肼 ( DPPH,纯度 98% )、 ( 2, 2′-连氨 -( 3-乙基苯并噻唑啉 -6-磺酸 )
二氨盐 ( ABTS,纯度 99% )、福林 -酚试剂 (纯度 99% ,美国 Sigma公司 ) ;乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正
丁醇、抗坏血酸 Vc、邻苯三酚、没食子酸、过硫酸钾等试剂均为分析纯。 实验用水为去离子水。
2. 2　实验方法
2. 2. 1　车前草醇提物及其极性部分的制备
称取阴干粉碎的车前草 100g ,按料液比 W∶ V= 1∶ 10( g /L)加入 1L 60%的乙醇 ,于室温下浸
泡 24h,超声提取 30min, 3次 ,过滤 ,合并提取液。 45℃减压浓缩 , 50℃真空干燥即得初提取物 ,记为
F0。 将初提取物溶解于 10倍量去离子水中 ,得到浑浊水悬浮液 ,石油醚去酯后 ,分别加入等体积的
乙酸乙酯、正丁醇萃取 ,各 3次。合并各萃取液 , 45℃减压浓缩 ,得到乙酸乙酯部分 ,记为 F1;正丁醇
部分 ,记为 F2 ;正丁醇萃取后的水部分 ,记为 F3 [7 ]。
2. 2. 2　总多酚类物质的含量测定 [8 ]
准确称取 0. 1250mg没食子酸以去离子水溶解并定容至 100mL。 以此溶液配成浓度为 0、
25. 00、 50. 00、 75. 0、 100. 00μg /mL。分别取不同浓度的标准溶液 1. 0mL加入到 25mL容量瓶中 ,依
次加入 15mL水 ,混合 ;加入 1mL福林 -酚试剂进行混合 ;加入 3mL 20%碳酸钠溶液 ,充分混合后
用去离子水定容至刻度。 20℃下放置 2h后 , 765nm波长下测定其吸光值。得回归方程: A= 0. 127C
+ 0. 0003, R
2
= 0. 9991,在 0— 100. 0μg /mL范围内对照品没食子酸的量与吸收值呈良好的线性关
系 ,检出限为 0. 11μg /mL。
2. 2. 3　对 DPPH·的清除作用 [1 ]
称取 DPPH,用无水乙醇配制成浓度为 2× 10- 4mol /L的 DPPH溶液。取不同质量浓度的样品
F0、 F1、F2、F3的水溶液 100μL,加入 900μL DPPH溶液 ,混匀 ,反应 30min。以待测液和乙醇混合溶
液作为空白 , 517nm处测定吸光度。每个浓度平行做 3次。按下式计算清除率:
清除率= 100%× ( A0- Ai ) /A0
式中: A0—— DPPH溶液的吸光度 ; Ai——样品和 DPPH混合液的吸光度。样品的抗氧化活性的强
弱用半数抑制浓度 IC50值作为判断。
2. 2. 4　对 ABTS· 自由基的清除作用 [1 ]
配制 ABTS溶液: 140mmol /L过硫酸钾溶液 440μL与 7mmol /L ABTS溶液 25mL混合 ,避光
反应 24h,用无水乙醇稀释 ABTS溶液至吸光值为 0. 7± 0. 002。
取不同质量浓度的样品 F0、 F1、 F2、F3的水溶液 100μL,加入 900μL ABTS溶液 ,混合均匀 ,反
应 10min。以待测液和无水乙醇混合后的溶液作为空白调零 ,在 734nm处测定样品的吸光度。每个
浓度平行做 3次。
2. 2. 5　对 O-2·的清除作用
根据文献 [ 1 ]的方法 ,在试管中加入 450μL缓冲液 ( 0. 2mol /L Tris-HCl, pH8. 20,内含
2mmol /L EDTA)和 420μL去离子水 ,于 25℃恒温 20min后加入 25℃预热过的邻苯三酚 30μL(对
照管用 10mmol /L盐酸代替 ) ,迅速摇匀 ,在波长 320nm处每 0. 5min测定 1次吸光度值 A0 ,共测
4min。计算对照溶液吸光度值随时间的变化率 ΔA0。样品测定:加入 1mL样品液 ,相应减少同体积
去离子水 ,测定加样后自氧化速率 ΔA1。
3　结果和讨论
3. 1　车前草提取物的提取率、总多酚含量的测定
根据 2. 1节方法 ,考察不同极性部位的多酚含量 ,结果见表 1。由表 1可以看出 ,正丁醇部分的
多酚的含量明显高于其他 3个部分 ,可能是因为溶剂的极性差异导致提取物的化学成分有一定的
2740 光谱实验室 第 29卷
差别。
表 1　车前草醇提物及其各极性部位提取率、总多酚含量 (n= 3)
得率 (% ) 总多酚 ( mg /g )
F0 (乙醇初提取物 ) 6. 885± 0. 235 99. 11± 0. 79
F1 (乙酸乙酯萃取物 ) 0. 582± 0. 046 149. 31± 1. 94
F2 (正丁醇萃取物 ) 1. 097± 0. 094 271. 36± 2. 38
F3 (水提取物 ) 4. 208± 0. 184 58. 76± 0. 49
3. 2　对 DPPH· 自由基的清除作用
根据 2. 2. 3节方法 ,考察车前草醇提物及各极性部分对 DPPH·的清除能力 ,结果见图 1。由图
1可知 ,车前草醇提取物及各极性部分对 DPPH· 均有一定的清除能力 ,且其作用大小与提取物浓
度呈正相关。 F0、F1、F2、F3、Vc的 IC50分别为: 20. 81、 12. 51、 11. 50、 88. 10、 1. 85μg /mL; 4种物质对
DPPH·的清除能力顺序为: F2> F1> F0> F3 ,与其多酚含量大小顺序一致。
3. 3　对 ABTS·的清除作用
根据 2. 2. 4节方法 ,考察 ABTS的清除作用 ,结果见图 2。由图 2可知 ,F0、F1、F2、F3、Vc的 IC50
分别为: 28. 47、 8. 97、 5. 32、 62. 58、 2. 79μg /mL; 4种物质对 ABTS·的清除能力顺序为: F2> F1> F0
> F3 ,与其多酚含量大小一致。 但活性均小于 Vc,清除 ABTS·能力最好的正丁醇相的 IC50是 Vc
的 2倍。
图 1　清除 DPPH· 自由基的作用
曲线 1— 5分别为 Vc、 F2、 F1、F0、F3。
图 2　清除 ABTS· 自由基的作用
曲线 1— 5分别为 Vc、F2、F1、F0、F3。
图 3　清除 O-2 · 的作用
曲线 1— 5分别为 Vc、F1、F 2、 F0、 F3。
3. 4　对 O-2· 的清除作用
根据 2. 2. 5节方法 ,考察其对 O-2· 的清除作用 ,结
果见图 3。如图 3所示 ,车前草醇提物及各极性部分对
O-2· 氧负离子均有一定的清除能力。 F0、F1、F2、 F3、V c
的 IC50分别为: 433、 149、 188、 1105、 25μg /mL; 4种物质
对 O-2·自由基的清除能力顺序为: F1> F2> F0> F3 ,与
多酚含量的大小关系有差异。这可能与提取物中共存的
多酚及其他化学成分的种类和数量不同有关 [ 9]。
4　结论
本文采用 DPPH法、 ABTS法和邻苯三酚法测定车
前草 60%乙醇提取物及乙酸乙酯相、正丁醇相、水相清
2741第 5期 颜秋萍等:车前草中多酚的抗氧化活性
除 DPPH· 、 ABTS· 、O-2 ·的能力 ,并研究其抗氧化活性与多酚含量的关系。 结果表明 ,车前草
60%乙醇提取物及乙酸乙酯相、正丁醇相、水相都具有一定的清除 DPPH· 、 ABTS· 、O-2· 自由基
的能力。而正丁醇相的清除 DPPH· 、 ABTS·自由基最强 ,乙酸乙酯相清除 O-2· 离子的能力最强。
其抗氧化活性与多酚含量都存在一定的相关性。车前草的抗氧化多酚类单体的筛选有待下一步研
究。
参考文献
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Antioxidant Activity of Polyphenol from Asiatic Plantain
YAN Qiu-Ping　 ZHENG Jie　 ZHENG Yang　 ZHAO Su-Qing　 ZHANG Kun
( Faculty of Chemical Engineering and Light Industr y, Guangdong University of Technolog y ,Guangzhou 510006 P. R. China )
Abstract　 The contents of polyphenol for 60% ethanol ex tract and o ther different ex t racts of
asiatic plantain was determined by Folin-phend method. The scavenging activities of ex tracts on radical
w ere measured by DPPH method, ABTS method and hydroxyquinol method. The polyphenol content
of n-butanol ex tract of asiatic plantain w as the highest, and n-butanol ex tract had bet ter scavenging
ability on DPPH and ABTS radical. The each antioxidant activi ty of ex tracts was related wi th the
o rder of phenol content. The ethyl acetate ex tract had the st rongest scavenging abili ty on superoxide
anion. The result show ed that 60% ethanol ex t ract and other different ext racts of asiatic plantain all
had antioxidant activi ty , and the n-butanol and ethyl acetate ex t racts w ere the activity ex tracts.
Key words　 Asiatic Plantain; Polyphenol; Antiox idant
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2742 光谱实验室 第 29卷