全 文 ：食用菌学报２０１２．１９（２）：６６～６８
收稿日期：２０１２－０２－２６原稿；２０１２－０４－２５修改稿
基金项目：上海市农委重点攻关项目［编号：沪农委功字（２００８）第８－２号］的部分研究内容
作者简介：李巧珍（１９８６－），女，在读硕士，主要从事药用真菌多糖的分离纯化及活性物质方面研究。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｙａｎ９２００＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
文章编号：１００５－９８７３（２０１２）０２－００６６－０３
猴头菌活性多糖高产菌株的筛选
李巧珍１，２，唐传红１，杨　焱１＊，刘朝贵２，于海龙１，吴　迪１，汪雯瀚１，张劲松１
（１上海市农业科学院食用菌研究所，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心，
国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海２０１４０３；
２西南大学园艺园林学院，重庆市蔬菜学重点实验室，重庆４００７１５）
摘　要：对１０株猴头菌（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ）菌株的菌丝多糖产量和体外免疫活性进行比较。结果表明：不同
的猴头菌菌株发酵所产生的菌丝多糖量及其多糖对刺激巨噬细胞产生ＮＯ的产量不同；其中华中猴头（Ｈ１０）
不仅菌丝多糖量高且对巨噬细胞的刺激作用也较强，可作为深层发酵生产猴头菌菌丝多糖的优良菌株。
关键词：猴头菌菌株；ＩＴＳ序列；菌丝多糖；巨噬细胞；ＮＯ
　　猴头菌（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ）是我国著名的
食药两用菌。自古就有“山珍猴头”之说［１］，其药
用成分猴头菌多糖可从子实体和发酵菌丝体中
提取得到，具有保肝护胃、降血糖、保护神经、增
强人体免疫力、抗癌、抗氧化等功效［２－４］。深层发
酵周期短、可控性好，已广泛用于猴头菌多糖的
生产，研究表明，不同菌株产生多糖的组分和结
构有显著差异［５，６］，因此，菌株的选用成为深层发
酵生产猴头菌多糖产量和质量的关键。笔者对
收集到的１０个猴头菌菌株液体培养后的菌丝多
糖量、菌丝多糖体外免疫活性进行比较，以筛选
出多糖量和活性较高的菌株。
１　材料与方法
１．１供试菌株及来源
　　供试菌株０６２７、０６０８、０６１７、０６１１、０６０５分别
编号为 Ｈ１－Ｈ５，由上海市农业科学院食用菌研究
所提供；长刺猴头、９１１、９２０、猴头王、华中猴头分
别编号为 Ｈ６－Ｈ１０，其中长刺猴头和华中猴头由
华中食用菌栽培研究所提供，９１１和９２０由江苏
高邮食用菌研究所提供，猴头王由牡丹江海丰食
用菌研究所提供。
１．２菌丝体的培养
　　供试菌株于ＰＤＡ平板上活化后，取直径为
０．６ｃｍ的菌块，接种至装有１００ｍＬ液体摇瓶培
养基（４％葡萄糖、１％酵母膏、０．１％ ＫＨ２ＰＯ４、
０．０５％ ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ）的２５０ｍＬ三角瓶中，
２６℃，１５０ｒ／ｍｉｎ培养１２ｄ，用无菌匀浆机将菌丝
球捣碎，然后用灭菌的移液管取１０ｍＬ接种至装
有１００ｍＬ二级摇瓶培养基（培养基成分同上）的
２５０ｍＬ三角瓶中，２６℃，１５０ｒ／ｍｉｎ培养７ｄ，发
酵液用滤布过滤后，收集菌丝体，用蒸馏水冲洗３
～４次，冷冻干燥后称重，每个菌株收集６瓶，实
验重复３次。
１．３菌丝多糖量的测定
　　将１．２中冻干的菌丝球磨碎后取粉末样品
２ｇ，加９０ｍＬ蒸馏水，沸水浴提取２ｈ，提取液加
蒸馏水定容至１００ｍＬ，量取１０ｍＬ，加无水乙醇
１５０ｍＬ，摇匀，４ ℃ 放置 １２ｈ，４０００ｇ 离心
２０ｍｉｎ，沉淀用１０ｍＬ　９５％的乙醇洗涤２次，
４０００ｇ离心２０ｍｉｎ。用蒸馏水将沉淀定容至
５０ｍＬ，用苯酚－硫酸法测定总糖含量［７］。
菌丝多糖含量＝总糖含量×０．９
菌丝多糖总量＝发酵菌丝生物量×菌丝多
糖含量
１．４菌丝粗多糖的制备
　　取菌丝体粉末样品３ｇ，加入５４ｍＬ蒸馏水，
沸水浴提取２ｈ，过滤，滤渣重复提取１次，合并
提取液，在旋转蒸发仪上减压浓缩至１０ｍＬ，
１５０００ｇ离心３０ｍｉｎ，取上清加入乙醇至终浓度
７０％，摇匀，４℃放置１２ｈ，４０００ｇ离心２０ｍｉｎ，
沉淀用同样浓度的乙醇洗涤２次。粗多糖样品
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2012.02.024
第２期 李巧珍，等：猴头菌活性多糖高产菌株的筛选
用截留分子量为３５００Ｄａ的透析袋对水４℃透析
３ｄ，冻干，分别命名为 ＨＥＰ１～ＨＥＰ１０。
１．５菌丝粗多糖对ＲＡＷ２６４．７细胞释放ＮＯ产量
的影响
　　用ＰＢＳ（含０．１４ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ，０．０２７ｍｏｌ／Ｌ
ＫＣｌ，０．００４ ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＨＰＯ４，０．００２ ｍｏｌ／Ｌ
ＫＨ２ＰＯ４，ｐＨ　７．４）分别将 ＨＥＰ１～ＨＥＰ１０配成
０．５、２、５ｍｇ／ｍＬ的溶液（作用终浓度分别为５０、
２００、５００ｍｇ／ｍＬ），按文献［８］的方法测定各多糖
样品对巨噬细胞释放ＮＯ产量的影响。
２　结果与分析
２．１菌丝多糖产量
　　十个猴头菌菌株中，Ｈ２（０６０８菌株）菌丝多
糖含量最高，但是发酵所得生物量低；Ｈ１０（华
中猴头）菌丝生物量最高，其次为 Ｈ９和 Ｈ６，多
糖总量最高的是 Ｈ９，其次为 Ｈ１０、Ｈ８，最低的
是 Ｈ３（表１）。
表１　十个猴头菌菌株的菌丝生物量、菌丝多糖含量及多糖总量
Ｔａｂｌｅ　１　Ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｂｉｏｍａｓｓ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＰＳ）ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｅｎ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
菌丝生物量
Ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｙｉｅｌｄ
（ｇ／１００ｍＬ）
多糖含量
ＰＳ　ｃｏｎｃ．
（％）
多糖总量
Ｔｏｔａｌ　ＰＳ
（ｍｇ／１００ｍＬ）
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
菌丝生物量
Ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｙｉｅｌｄ
（ｇ／１００ｍＬ）
多糖含量
ＰＳ　ｃｏｎｃ．
（％）
多糖总量
Ｔｏｔａｌ　ＰＳ
（ｍｇ／１００ｍＬ）
Ｈ１　 ０．７２±０．０２　 １．２２±０．０７　 ８．８±０．５ Ｈ６　 １．１４±０．０１　 ０．８３±０．０３　 ９．５±０．３
Ｈ２　 ０．６２±０．０９　 １．４１±０．０９　 ８．７±０．６ Ｈ７　 ０．７２±０．０５　 １．１１±０．１１　 ８．０±０．８
Ｈ３　 ０．６３±０．０４　 １．０９±０．０５　 ６．９±０．３ Ｈ８　 ０．７５±０．０３　 １．３３±０．００　 １０．０±０．０
Ｈ４　 ０．８５±０．０５　 １．０３±０．０６　 ８．７±０．５ Ｈ９　 １．１５±０．０３　 １．１１±０．０５　 １２．８±０．６
Ｈ５　 ０．８８±０．０２　 １．０７±０．０１　 ９．４±０．１ Ｈ１０　 １．２２±０．０５　 ０．８７±０．０５　 １０．６±０．６
２．２菌丝粗多糖对 ＲＡＷ２６４．７释放 ＮＯ产量的
影响
　　各菌株的菌丝粗多糖刺激ＲＡＷ２６４．７细胞
释放ＮＯ的产量有差异（图１）。ＲＡＷ２６４．７产生
ＮＯ的量随着样品浓度的增大而上升，具有浓度
依赖性。在低浓度５０μｇ／ｍＬ时，ＨＥＰ３和 ＨＥＰ７
对ＲＡＷ２６４．７释放 ＮＯ 的量无影响，ＨＥＰ１和
ＨＥＰ１０对ＲＡＷ２６４．７的刺激作用最强。
图１　１０株猴头菌株菌丝多糖对ＲＡＷ　２６４．７细胞ＮＯ释放量的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ＲＡＷ２６４．７ｃｅｌｓ
３　讨论
　　刘颖［５］和丁剑［６］对猴头菌的两个不同菌种
在相同条件下发酵、提取、分离及纯化的胞外多
糖进行研究，发现其多糖在分子量、单糖组成和
结构上存在明显差异。吴迪等［１１］的研究表明，不
同产地的猴头菌子实体提取的多糖含量及其单
糖组成和相同分子量多糖所占的比例均存在显
著性差异。本实验结果表明，不同菌株发酵产生
的菌丝粗多糖量和体外免疫活性上都有差别，在
本实验条件下，华中猴头（Ｈ１０）菌株不仅菌丝粗
多糖产量高而且其菌丝粗多糖体外免疫活性也
７６
食　用　菌　学　报 第１９卷
高，可以考虑作为深层发酵生产猴头活性菌丝粗
多糖的菌种。对于活性高但菌丝多糖量低的菌
株０６２７（Ｈ１），可考虑优化其发酵条件，以提高多
糖产量。因此，在猴头菌的深度开发利用时，需
针对目标活性成分对其菌株进行优选，以获得更
适于开发利用的优良品种。
参考文献
［１］董宜勋．中国食用蘑菇大观［Ｍ］．北京：中国旅游出版
社，１９８６．
［２］樊伟伟，黄惠华．猴头菇多糖研究进展［Ｊ］．食用菌，
２００８，２９（１）：３５５－３５８．
［３］ ＷＡＮＧ　ＪＣ． Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｅｎｈａｎｃｉｎｇ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｂｒｏｔｈ　ｏｆ
Ｈｅｒｉｃｉｕｍｓｐｐ．［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００１，１７（９）：
４６１２－４６７１．
［４］于成功，徐肇敏，祝其凯，等．猴头菌对实验大鼠胃
粘膜保护作用的研究［Ｊ］．胃肠医学，１９９９，４（２）：
９３－９６．
［５］刘颖．猴头菌属不同菌种发酵产物的比较研究［Ｄ］．吉
林：吉林农业大学，２００８．
［６］丁剑．猴头菌属不同菌种发酵多糖的分离纯化与结构
研究［Ｄ］．吉林：吉林农业大学，２００８．
［７］张维杰．糖复合物生化研究技术［Ｍ］．杭州：浙江大学
出版社，１９９４．
［８］冯娜，张劲松，唐传红，等．不同生育期灵芝子实体水
提物与其免疫活性［Ｊ］．食用菌学报，２０１０，１７（４）：
５２－５７．
［９］吴迪，张劲松，蒋俊，等．不同产地猴头菌子实体粗多
糖特征及其刺激巨噬细胞产生 ＮＯ的活性［Ｊ］．食用
菌学报，２０１１，１８（４）：５９－６２．
Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗｉｔｈ　Ｎｉｔｒｉｃ　Ｏｘｉｄｅ
ＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＡｃｔｉｖｉｔｙｂｙＴｅｎ　Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　Ｓｔｒａｉｎｓ
Ｇｒｏｗｎ　ｉｎ　Ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　Ｃｕｌｔｕｒｅ
ＬＩ　Ｑｉａｏｚｈｅｎ１，２，ＴＡＮＧ　Ｃｈｕａｎｈｏｎｇ１，ＹＡＮＧ　Ｙａｎ１＊，ＬＩＵ　Ｃｈａｏｇｕｉ　２，ＹＵ　Ｈａｉｌｏｎｇ１，ＷＵ　Ｄｉ　１，
ＷＡＮＧ　Ｗｅｎｈａｎ１，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎｇｓｏｎｇ１
（１Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ（Ｓｏｕｔｈ），Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ；Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ；Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｒ＆Ｄ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ；Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ，
Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０１４０３，Ｃｈｉｎａ；２　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；
Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４００７１５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＰＳ）ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｅｎ　Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｇｒｏｗｎ　ｉｎ　ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ
ｃｕｌｔｕｒｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｏｎ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ＲＡＷ２６４．７ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ｗｅｒｅ
ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｈｉｇｈｅｓｔ　ｔｏｔａｌ　ＮＯ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ（ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｙｉｅｌｄ×ＮＯ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｐｅｒ　ｕｎｉｔ　ｏｆ　ＰＳ）ｗａｓ
ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ｆｏｒ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　Ｈ１０（Ｈｕａｚｈｏｎｇ）．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ；ｍｙｃｅｌｉａｌ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ；ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
［本文编辑］　朱丽娜
８６