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竹节蓼生药学鉴别研究



全 文 :国药鉴别
收稿日期:2015-03-09; 修订日期:2015-07-10
基金项目:广西壮瑶药重点实验室项目(桂科基字[2014]32 号);
壮瑶药协同创新中心项目(桂教科研[2013]20 号);
广西重点学科(壮药学)项目(桂教科研〔2013〕16 号);
“中药创新理论与药效研究”八桂学者项目
作者简介:颜萍花(1991-),女(汉族),湖南衡南人,广西中医药大学在读
硕士研究生,学士学位,主要从事中药及民族药品种鉴别与开发利用工
作.
* 通讯作者简介:蔡 毅(1962-),男(汉族),广西南宁人,广西中医药大
学药学院教授,学士学位,主要从事生药学的研究工作.
竹节蓼生药学鉴别研究
颜萍花,唐玉荣,曾祥燕,蔡 毅*
(广西中医药大学,广西 南宁 530001)
摘要:目的 对竹节蓼进行生药学研究,为制订其质量标准提供实验依据。方法 采用四大经典(原植物形态、药材性状
特征、显微特征、理化特征)鉴别法对竹节蓼进行鉴别研究。结果 竹节蓼四大鉴别特征明显,专属性强。结论 以上特征
可作为鉴别竹节蓼的参考依据。
关键词:竹节蓼; 原植物鉴别; 性状鉴别; 显微鉴别; 理化鉴别
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2015. 11. 044
中图分类号:R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)11-2682-03
竹节蓼来源于蓼科植物竹节蓼 Homalocladium platycladum
(F. Muell. ex Hook.)Bailey的全草,别名蜈蚣竹、观音竹、铁扭边
等,其味甘、淡,性平,具有清热解毒,祛瘀消肿的功效,主用于痈
疽肿毒、跌打损伤,以及蛇虫咬伤[1],为常用的壮药[2]。目前相
关研究较少。本文拟进行生药学鉴别研究,为制订其质量标准提
供依据。
1 材料及仪器
1. 1 材料 实验用药材样品经广西中医药大学中药鉴定教研室
蔡毅教授鉴定为蓼科植物竹节蓼 Homalocladium platycladum (F.
Muell. ex Hook.)Bailey的全草。药材基源详见表 1。槲皮苷对
照品(供含量测定用,中国药品生物制品检定所,批号:111538 -
200504)。实验所用试剂均为分析纯。
表 1 竹节蓼药材基源表
编号 采集时间 产地 /采集地点 /批号
ZJL - 1 2014-05-28 岑溪市归义镇
ZJL - 2 2013-11-19 岑溪市归义镇
ZJL - 3 2014-01-05 宜州市
ZJL - 4 2014-04-10 河池大化县岩滩镇
ZJL - 5 2014-05-16 桂平市
ZJL - 6 2014-07-04 河池大化县岩滩镇
ZJL - 7 2014-07-15 桂平市
ZJL - 8 2014-07-24 广东益临
ZJL - 9 2013-07-24 宜州市
ZJL - 10 2014-09-09 桂平市
1. 2 仪器 DM2500 型光学生物显微镜(德国徕卡仪器公司);
RM2145 型半自动轮转切片机(德国徕卡仪器公司);YG - 280KX
型摊片烤片机(阳光医疗器械有限责任公司);KQ5200B 型超声
波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);YOKO - ZX 紫外线分析
暗箱(武汉药科新技术开发有限公司)。
2 方法
采用原植物鉴别法,性状鉴别法,显微鉴别法和理化鉴别法
进行实验研究。
3 结果
3. 1 原植物特征 多年生草本,高 1 ~ 3 m。茎基部圆柱形,木质
化,上部带叶茎枝为变态茎,呈带状,宽 7 ~ 12 mm,深绿色,有光
泽,节明显,表面有细密平行条纹。叶片菱状卵形,长 4 ~ 20 mm,
宽 2 ~ 10 mm,先端渐尖,基部楔形,全缘;叶柄极短。花小,簇生
于节上,具纤细柄;花被 5 深裂。瘦果三角形[1]。见图 1。
图 1 竹节蓼原植物图
3. 2 药材性状特征 茎基部圆柱形,黄褐色。着生变态茎的茎呈
扁圆形,有细纵纹,断面中间呈海绵状。上部带叶茎枝为变态茎,
带状,平滑无毛;枝扁平,宽 6 ~ 10 mm,节明显,节间长 1 ~ 1. 8
cm,表面有细密平行条纹,浅绿色或褐绿色,质柔韧。叶片菱状
卵形,长 0. 4 ~ 2cm,宽 0. 2 ~ 1 cm,先端渐尖,基部楔形,全缘,易
脱落。气微,味微涩。
3. 3 显微鉴别特征
3. 3. 1 根横切面 类圆形。外层为残存的木栓层,常易脱落。皮
层细胞呈类方形或类圆形,3 ~ 5 列。维管束外韧型,韧皮部较
窄;木质部宽广,导管稀疏,多单个排列;木射线明显,细胞类长方
形,径向排列;最内为初生木质部,细胞较木质部细胞大,呈类圆
形。草酸钙簇晶、棕色块易见于皮层、韧皮部等薄壁细胞中。见
图 2。
3. 3. 2 茎及变态茎横切面 茎为圆形或椭圆形,边缘呈波浪状起
伏。表皮细胞 1 列,类方形,排列紧密,外被角质层,可见腺鳞。
皮层较窄,由 2 ~ 6 列薄壁细胞组成,细胞内常含棕红色分泌物,
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 11
可见草酸钙簇晶。外韧型维管束众多,可达数十个,韧皮部外侧
常有大群纤维束,并向外延伸至表皮下方。髓部宽广,薄壁细胞
较大、排列疏松,有时可见草酸钙簇晶;外部有髓鞘纤维,1 ~ 3
列,并与韧皮部外纤维束相接成环。见图 3 ~ 4。
变态茎的结构与茎大致相同。变态茎扁平,呈长条状;两端
表皮下有较大的纤维束;草酸钙簇晶、腺鳞易见。见图 5。
1.木栓层 2.皮层 3.棕色块 4.韧皮部
5.木质部 6.草酸钙簇晶 7.初生木质部
图 2 竹节蓼根横切面详图
1.腺鳞 2.草酸钙簇晶 3.角质层 4.表皮
5.皮层 6.髓鞘纤维 7.木质部 8.韧皮部 9.髓部
图 3 竹节蓼茎 1 /4 横切面详图
1.草酸钙簇晶 2.纤维束 3.髓鞘纤维 4.腺鳞
图 4 竹节蓼茎放大示意图
3. 3. 3 叶横切面 表皮细胞 1 列,细胞呈方形或类圆形,上表皮
细胞较大,可见气孔及腺鳞。栅栏细胞 1 列,较短,海绵细胞疏松
排列。主脉维管束外韧型,常分裂成 4 束;木质部位于向茎面,导
管明显。叶肉中可见异型细胞,内含草酸钙簇晶。见图 6。
3. 3. 4 叶表面片 上表皮细胞呈多角形,垂周壁较平直;可见四
个细胞组成腺头的腺鳞。下表皮细胞较小,垂周壁弯曲;不定式
气孔较多,腺鳞散在。见图 7。
3. 3. 5 粉末特征 粉末呈黄棕色或黄绿色。①腺鳞由 4 个细胞
组成,细胞清晰可分辨,直径约为 20 ~ 50 μm。②草酸钙簇晶散
在,大小不一,直径约为 20 ~ 70 μm,棱角清晰。③表皮细胞散
落,可见气孔、腺鳞。④导管以螺纹导管为主,具缘纹孔导管偶
见。⑤纤维孔壁分层清晰,表面稍有凸起,直径约为 8 ~ 20 μm。
见图 8。
1.纤维束 2.草酸钙簇晶 3.腺鳞 4.表皮 5.韧皮部
6.髓鞘纤维 7.皮层 8.木质部 9.髓部
图 5 竹节蓼变态茎 1 /10 横切面详图
1.表皮 2.栅栏组织 3.海绵组织 4.草酸钙簇晶
5.气孔 6.木质部 7.韧皮部 8.腺鳞
图 6 竹节蓼叶横切面详图
3. 4 理化鉴别 通过对竹节蓼进行化学成分的预实验,实验结果
得到其含有槲皮苷成分,故设该成分为其薄层色谱鉴别的对照成
分。
薄层色谱条件探讨如下:①根据槲皮苷的溶解性,选取乙酸
乙酯、50%甲醇、乙醇、水四种不同极性的溶剂对竹节蓼对照药材
(ZJL - 1)进行提取比较试验,最终以 50%甲醇作为提取溶液所
得薄层色谱图斑点最明显。②采用冷浸提取 12 h、超声提取 30
min、回流提取 30 min 等三种不同提取方法进行比较,结果表明
三种方法所得薄层色谱图基本一致,以最为省时简便的超声提取
法进行提取。③取对照药材(ZJL - 1)粉末 3 份,每份分别为 0. 5
g、1 g、2 g,加 50%甲醇各 20 ml,超声提取 30 min,制成供试品溶
液进行比较。结果显示药材取样量为 0. 5 ~ 2 g 时,均可检视到
一个黄色斑点和一个蓝色斑点,0. 5 g的斑点不够清晰,1 g和 2 g
的斑点都很清楚,故药材取样量采用 1 g。④分别以乙酸丁酯 -
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 11 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 11 期
环己烷 -正己烷 -甲酸 -甲醇 -水(6∶ 1. 2∶ 0. 6∶ 1∶ 1∶ 0. 5)、
氯仿 -甲醇 -冰醋酸(6∶ 2∶ 1)、乙酸丁酯 -环己烷 -甲酸 -水
(6∶ 1. 2∶ 1. 5∶ 0. 5)等展开系统进行试验,结果显示以乙酸丁
酯 -环己烷 -甲酸 -水为展开剂(6∶ 1. 2∶ 1. 5∶ 0. 5)时,蓝色
斑点和黄色斑点均较为圆整,Rf 值适中,稳定性好,故标准正文
采用乙酸丁酯 -环己烷 -甲酸 -水(6∶ 1. 2:1. 5∶ 0. 5)为展开
剂。⑤选取硫酸乙醇、磷钼酸、香草醛、3%三氯化铝乙醇溶液等
显色系统进行考察,以 3%三氯化铝乙醇溶液所得色谱图斑点清
晰,稳定。⑥实验中考察了不同温湿度对薄层色谱的影响,结果
表明在室温(30℃)下,相对湿度在 62%内,可使主斑点分离较
好,斑点显色集中、清晰,且比移值变化不大。
A -上表皮 B -下表皮
1.表皮细胞 2.腺鳞 3.气孔
图 7 竹节蓼叶表面图
对不同的提取溶剂、提取方法、药材取样量、展开系统、显色
剂及温湿度等进行反复考察,得出稳定的薄层色谱鉴别方法如
下:
取竹节蓼药材粉末 1 g,加 50%甲醇溶液 20 mL超声提取 30
min,过滤,取滤液浓缩至 2 ml,作为供试溶液。取 1 mg槲皮苷对
照品加甲醇定容至 2 mL容量瓶中。照薄层色谱法(《中国药典》
2010 年版一部附录Ⅵ B)进行实验,分别吸取供试品溶液及对照
药材溶液各 5 μl,分别点于 GF254 薄层板上,以乙酸丁酯 -环己
烷 -甲酸 -水(6∶ 1. 2∶ 1. 5∶ 0. 5)为展开剂展开,展距为 8 cm,
取出,晾干,喷以 3%三氯化铝乙醇溶液,用 105℃的热风吹干,置
的紫外光(365 nm)下检视。结果在紫外灯下,供试品与对照品
在相同位置上有相同黄色斑点(RfA = 0. 375),与对照药材在相
同位置上有相同黄色斑点(RfA = 0. 375)以及蓝色斑点(RfB =
0. 550)。见图 9。
1.腺鳞 2.草酸钙簇晶 3.表皮细胞碎片 4.导管 5.纤维
图 8 竹节蓼粉末图
1.槲皮苷对照品 2. ZJL - 1(对照药材)
3. ZJL - 2 4. ZJL - 3 5. ZJL - 4 6. ZJL - 5 7. ZJL - 6
8. ZJL - 7 9. ZJL - 8 10. ZJL - 9 11. ZJL - 10 12.槲皮苷对照品
(A 黄色斑点 B 蓝色斑点)
图 9 竹节蓼薄层色谱图
4 讨论
竹节蓼为多年生草本,茎基部圆柱形,上部扁平,有明显细纵
纹,花小,簇生于节上。其药材呈带状,平滑无毛,节明显。茎横
切面中,髓鞘纤维相接成环;粉末中草酸钙簇晶、腺鳞及表皮碎片
较为易见。取竹节蓼药材粉末 1 g,加 50%甲醇溶液、超声提取;
以乙酸丁酯 -环己烷 -甲酸 -水(6∶ 1. 2∶ 1. 5∶ 0. 5)为展开剂
展开,喷以 3%三氯化铝乙醇溶液;供试品与对照药材、槲皮苷对
照品在相同位置上有相同颜色的斑点。以上特征明显,专属性
强,可作为鉴别竹节蓼的参考依据。
竹节蓼为壮族民间草药,相关的化学成分、药理作用和临床
研究较少,初步研究发现其中含有黄酮类的成分,如金丝桃苷、槲
皮苷等成分,本课题组将对其进一步研究,以完善其质量控制技
术,为资源开发、利用奠定基础。
参考文献:
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编写委员会. 中华本草,第二册
[M].上海:上海科技出版社,1999:636.
[2] 梁启成,钟 鸣. 中国壮药学[M]. 南宁:广西民族出版社,2005:
172.
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 11