全 文 ：之山东林业科技 》 19 9 1年第4期 ( 总5 1期》
白榆新品种 7 4 0 09离体培养
再生植株的研究
张璐锋 龙庄如 梁玉堂
( 山东农业大学 )
〔摘要 )本文对 白榆新品种7 4 90 0离体培养再生植株的若干问 题进 行 了研
究。试验用一年生嫁接苗的带芽基段作外植体 。 结果表明 , 在无菌 、 接种后 ,培养
墓的 p H 位随时间不同而 发生 变化 。 p H位时新梢形成有明显影响 , 以 8 。 5 左右
较为合适 。 M S培养基配方中的无机盐用量适于新梢形成 。 G A 的作 用与 BA /
G A位有关 , N A A促进生根的作用优于BI A 。 黑暗处理时生根有不 利影响 。 试
管外生根的关健是保持湿润 , 防止干枯和烂根 。 生根率和 成活率分别为 80 %和
9 0%
。
关健词 : 白榆 离体培 养
白榆新 品种 7 4 0 0 9是 山东 省林 科所
等于 1 9 7 4年选出的优 良无性系 。 它具有生
长快 、 树干直 、 生长旺盛等特 点 , 造 林 5
年后测定 , 表现突出 【` ’ , 为山东 省林业
厅 1 9 8 1年 4月审定公布第一批阔叶树 良种 ,
并要求在全省推广应用 。 目前 , 白榆 7 4 0 0 9
的繁殖主要以嫁接 、 扦插为主 。 为了开辟
白榆 7 4 0 0 9繁殖的新途径 , 我们对其离体
培养再生植株进行了研究 , 并获得成功 。
l 试验材料和方法
试验材料取自金乡县自洼林场 。 取白
榆 7 4。。9 2年生嫁接苗的带芽基段作初始
外植体 , 先用少许洗衣粉漂洗 , 再经流水冲
洗 4一 5小时 , 除去表面灰尘 , 再在70 % 乙
醇中浸泡 30 秒钟 , 然后在。 。 1% H g C I溶液
中放置 4一 7分钟 , 杀菌 , 再用无菌水冲洗
4一 5次后 , 吸干表面水分 , 接种 。 基本培
养基均为M S , 除特别说明外 , 蔗糖3% ,
琼脂 0 。 6% , p H S。 s , 用 i N N a O H 或 i N
H CI 调整 。 初 始 外 植体 接 种 在 M S +
0
.
0 5 m g / t B A + 0
.
0 1m g / c N A A 培养
基上 , 建立稳定的繁殖体 。 培养室温度控
制在 2 5 士 2℃ , 光照强度 Z o o 0 l u x左右 , 光
照时间为 16 小时。 培养 14 天左右 , 长出新
梢 , 切取 10 m m和 30 m m左右的单芽 梢段
分别研究新梢和根的形成。
2 结果与分析
2
。
1 新梢的形成
2
。
1
。
1 p H值与新梢生长
以M S为基本培养基 , 附加 BA O。 3 m g
/ c + N A A O
。
05 m g / l
。 试验设计 4种 p H
值 ( 4。 o 、 5 . 0 、 6 。 0 、 7 . 0 ) , 每 种 p H值
为一处理 , 重复两次。前两种处理的p H值
低 , 琼脂不能凝固 , 无法接种 , 但与后两
种处理置于同样环境中 , 接种后 1 、 7 、 14
关分别厕定p H值及接种 14 天后新稍生 长
的情况见表 l 和表 2 。
表 l p H 值 的 变 化
\ 姑 奥 _ _ 、 , _ ’ _ _ _ ’ ._ _ . _ _ { . 、 _ _ . _ . _ . _ _ . _ . _ _乒 \ ` 一 烟丽 朋石 _ _ 翻后一大 翻砒大 ” “ 四大“ 理 、 \ \ 平均值 平均值 △p H 平均值 △p H 平均值 △p H 平均值 △p H
8408…O甘一 0 。 4 0一 0 。 3 8一 6 。 3 6
e o
。
2 7 6
。
8 4
0
。
1 7
0
。
1 1
0
。
2 1
0
。
14
3
。
9 8
4
。
9 6
5
。
9 2
7
。
1 0
O
。
1 5
0
。
1 6
0
。
1 2
0
。
1 2
6745”.3.45.60458145lb72143
裹2 p H位对断梢形成的形晌
研究结果表明 , 4种处理在高 压无 菌
后 p H值均下降 , 下降 幅度 为 0 . 27 一 O。 40
个单位 。 经接种后 p H值又明显升高 , 尤其
是第 1、 第7天 , 平均升高幅度是未接种的
5倍和 1。 25 倍 , 可能是培养物分泌 生物 碱
等碱性物质和吸收了N A A所致。
p H低于 5 , 琼脂太稀 , 根 本 无法 接
种 , p H高至 7 , 对新梢形成和生长不利 ,
生物量减少 1 1 4 . 3% , 新梢数和 新梢 长度
分别减少 8 4 . 6%和 4 3 . 8% , p H值在 5 . 8左
右较为适宜 。
2
。
1
.
2 无机盐浓度与新梢形成
对M S培养基配方中的大量 元素做稀
。 ` L , : , 产 、 , 0 、 1 尸、 , 0 、 1 , 、 , 。 、释处理 : i 〔M S 〕 、 令 〔M S〕 、 止 〔M S 〕、· · , 一 一 - - 一 ` ’ 2 一 产 ’ 4 -
合〔州〔s 〕 , 其它相同 , 附加 B A o . 3 m g / c
+ N A A O
.
05 m g /
c , 每处理重复 3次 , 培
养30 天 , 结果见表 3。
表3 无机盐浓度对断梢形成的影晌
矛出朋果 新梢长度 ( m m ) 新梢数 (个 ) 生物量 ( g ) (一。一m g / g . d w )\ 理\处
, 、 、 ~
1 4 8
.
2 8 士1 . 5 4 4 . 2 9 士0 . 0 3 1 3 . 6 6 5 土0 . 0 58 5 . 0 6 4
2 4 2
.
1 0 士1 . 9 6 3 . 3 1士0 . 0 7 5 3 . 2 4 5 土0 . 0 69 5 . 2 9 7
3 5 6
.
2 5土 2 . 5 5 3 . 1 3士0 . 0 3 5 3 . 0 3 2士0 . 0 6 5 4 , 9 0 x
4 3 1
。
1 2土 1 。 9 0 2 . 4 8土O。 0 6 8 2 . 4 5 3土0 。 0 7 9 4 。 4 7 4
研究结果表明 , 4种处理对新梢长度 、
新梢数量和生物量影响显著 , 以不加稀释
的M S配方用量为最好 , 稀释倍 数越 大 ,
生长越差 。
无机盐的主要功能是参与植物体内重
要有机化合物的组成 , 对叶绿素的形成和
功能发挥有很大影响。 稀释 8 倍以 后 , 叶
绿素含量减少 12 。 2% , 引起生 物 量减 少
4 9
.
4%
, 新 梢数 和新 梢长 度分 别 减少
7 3
。 。%和 5 5。 1% , 生长不良。
2
. 工. 3 B A一G A与新梢形成
B A和 G A对新梢形成的影 响见表 4和
图 1 。
结果表明 , 对新梢长度、 生物量的影
GA一BA 对断梢形成的形响
\ 一 结 果
处 理 一 \ 衰4
G A
( m g \l ) ( m g \l )
新梢长度
( m m )
生物量
( g )
0
。
05 0
。
52 5
。
3 0土 1。 4 5 1。 3 8
0
.
5 0 1
.
0 17
。
4 1土 5。 7 0 1。 9 4
0
。
0 1 1
.
2 0 0
。
1 1士6 。 5 0 1。 2 1
0
.
10 0
.
52 0
.
8 2土3 . 4 12. 2 1
,几2nJ
丫 ’图 1 B A ` G A 时新梢形成的影响响 B A大于 G A 。 从图 l看出 , G A浓度超过 。 . 05 m g / l , 不利于植物生长 。 在一定浓度范围内 , B A / G A值不同 , 对新梢生长的影响不同。2 。 2 根的形成2 。 2 . 1 不同种类生长素与根的形成使用 I B A 、 N A A两种生长 素 , 三 个浓度在大量元素减半的告M S 培养 基上接种新梢 , 观 察对 生根的影 响 , 结果见表5 o表 5 不同生长紊对生根的形晌款 ` …、 、 、 } 平均生根数(个 ) 平均根长( m m ) 生根率(肠 )度一102
I BA
O
。
O
。
1
。
0
1
.
50土 0 . 4 2
1
.
6 1士O 。 7 9
1
.
6 4土 0 。 8 3
3 7
。
7 5土 1。 8 3
4 0
。
2士 10 . 1 1
5 4
。
7土 1 2 。 0 1
N A A
。
1 0
。
2 0
1
.
7 7土 1 . 0 5
2
.
2 5士 0 . 8 9
0
.
8 8士 0 . 2 1
1 3
.
8 1士 1 。 7 5
1 5
。
7 3土 3 . 2 2
1 7
。
2 5土 3 。 2 6
3 6
。
2 2土 5 。 6 2
3 8
.
7 5土 7 . 0 4
3 4
。
2 6土5 。 5 1
3 5
。
3士 6 。 8 2
5 6
。
2土 1 0 。 6 7
1 7
。
5士 3 。 6 6
结果表明 , 不同种类的生长素对生根
的作用不同。 在浓度 0 . 卜 一 1 . o m g / I范围
内 , IB A对生根的促进作用随浓度在升高
而增强 , 在浓度。 . 1一。 . 2 m g / l范围内 ,
N A A对根数 、 根长 、 生根 率的作 用各项
指标都优科 B A , 分别 比 I B A 平 均增 加
1 9
.
9 7%
、
1 54
。
3 1%
、
1 7
。
1 0%
。 当浓度为
1
.
o m g / l时 , 效果则相反 , 说明诱导 生
根的效果N A A优于 BI A 。
2
.
2
.
2 不同生长素浓度与根的形成
使用N A A S种浓度 : 。。 1 、 。 。 3 、 0 . 5 、
0
.
7
、
l
。 。m g l/ , 每一种浓度为一处理 , 重
复两次 , 接种在告M S培养基 上 , 培 养30
天 , 结果见图 2。
生报钦卿 — 庄根雀文-一生麟 , · ’ 、 生琳万卯40必2
简一不一下犷二节未 l确雌
图 2 不同N A A 浓度时根形成的影响
结果表明 , 随N A A浓度提 高 , 对 根
数 、 生根率的促进作 用都 增强 , 当N A A
达到。 . 7 m g I/ 时 , 效果最好 。 浓度提高至
1
。 。 m g l/ 对根的形成产生抑制作用。
不定根的产生包括 3个阶段 : 诱导分
化 、 生根与根的延长 ` 。 ’ 。 生长素 主要 在
不定根的分化阶段发挥作用 , 根原基形成
后 , 根的延长阶段对生长 素浓 度相当
感 , 浓度过高会抑制根的伸长 。
2
。
2
。
3 光照与根的形成
裹 6
敏 在工常照光与完全黑暗条件下 , 于令
M S + N A A O
.
7 m g l/ 培养基上接种 , 重复
两次 , 培养 30 天 , 结果见表 6 。
光照对生根的影晌
结 果
处 理
平均生根数
(个 )
平均根长
(m m )
生根率
(肠 )
正常照光
完全黑暗
2
.
7 4 士0 . 6 1
1
.
4 0土0 . 2 5
4 3
。 芝}4士 1。 7 6
3 1
。
EO土 5 。 3 1
54
.
8 3士 6 . 9 2
4 6
.
7 4 士4 。 5 4
结果表明 , 黑暗处理对新梢生长有一
定影响 , 根数 、 根长和生根 率分 别下 降
9 5
.
7%
、
37
.
3%和 17 . 2% 。
2
.
3 试管外生根和移栽
当新梢长到 30 m m 以上时 , 打开 瓶口
炼苗 2一 3天 , 然后取出从根颈处剪断 , 在
s m g l/ N A A 中浸泡 1一 3分钟 ,扦插到装有
营养土 〔细河沙 1 , 1〕 的花盆中 , 用小烧
杯掩盖 。 开头 7一 10 天置于暗处 , 以 后逐
渐增加光照 , 不断浇水 。 20 天后检查 , 生根
率达到80 % , 平均根长 2 2 . l m m , 根的颜
色呈灰白色 。 移栽后 , 成活率达到50 % 。
试验结果证明 , 该项技术获得成功要
注意两个问题 : 1 . 试验材料在N A A 花中浸
泡时间要根据木质化程度确定 , 愈幼的梢
段 , 浸泡时间愈短 。 目标是根基处不产生
愈伤组织 ,又能尽早地生根。 2 . 既要保持较
高湿度 , 又要注意适量浇水 。 浇水过多 ,会
导致烂 ,浪死亡。
3 结 论
自偷 7 4 0 0 9离体培养新梢形成 , p H S . 8
左右较为合适 。 p H值低于 5 , 琼脂不能凝
固 , 无法接 种多 pH 高 至 7 . 0 , 起抑制作
用 。 M S配方中的无机盐用量 , 以不 加稀
释为好 : , 稀释倍数增大 , 抑制新梢形成的
作用增强 。 G A在离 体培 养中 的作 用与
BA / G A值有关 , 当G A超过。 . O5m g l/ 时 ,
不利于植物生长 。 新梢形成的适宜培养基
为M S 十 BA O。 3 + N A A O。 0 5。
N A A对新梢生`根的 促进 作用 强 于
I B A
。
N A A的适 宜浓 度为 o . 7m盯 l , 新
梢生根最适宜培养基是专M S + N A A O. 7 。
黑暗处理对生根有一定影响 , 使根数 、 根
长 、 生根率都下降。 试管外生根的关键措
施是保持适当湿度 , 防止干枯和烂根 。
参 考 文 献
1 山东省林科所等 . 白榆优良无性系选择研究报告 . 山东林业科技 , 1 984 ( 4 ) : 1 3一 17
2 木本植物生理学 . P · J · 克累默尔等著 , 江振儒等译 . 中国林业出版社 , 1 9 8 5
3 木本植物组织培养及其应用 . 陈正华 .高等教育出版社 , 1 9 8 6
峨 W i l n a d e w i n n a a r
,
1 9 s e : C l o n a l P r o P a g a t i o n o f P a P a z a i n v i t r o
.
p l a n t e e l l
,
t 呈s s u e a n d o r g a n e u t t u r e , 1 2 : 3 05一 5 1 0
5 T h o r P e
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2 0 7 5 : F r o n t i e r s o f p l a n t t i s s l l e e u l t u r e
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