全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20130507(017)
［基金项目］ 四川省教育厅重点项目(10ZB075) ;四川省教育厅创新团队项目 (11TD004)
［第一作者］ 谭尔，在读硕士研究生，从事中药及民族药药效物质基础的研究，Tel:18380415872，E-mail:tanlle_2009@ 126． com
［通讯作者］ * 张静，博士，副教授，从事中药及民族药药效物质基础及质量控制的研究，Tel:028-61800160，E-mail:zhangjingtcm@
126． com
HPLC测定秃叶黄皮树和黄皮树中 5 种有效成分的含量
谭尔，罗尚华，林升得，谭荣，王宇，张艺，张静*
( 成都中医药大学民族医药学院，成都 611137)
［摘要］ 目的:测定秃叶黄皮树和黄皮树中黄柏碱、木兰花碱、巴马汀、小檗碱、黄柏酮的含量，并比较不同品种黄柏药材
有效成分含量的差异。方法:采用 HPLC，Xtimate C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液
(B) ，梯度洗脱，检测波长 220 nm，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃。结果:5 种成分在上述条件下分离良好。黄柏碱、木兰花
碱、巴马汀、小檗碱、黄柏酮分别在 0. 001 7 ～ 0. 07，0. 002 ～ 0. 08，0. 000 5 ～ 0. 02，0. 01 ～ 0. 4，0. 000 5 ～ 0. 02 g·L －1呈良好线性
关系，r分别为 0. 999 9，0. 999 9，0. 999 9，0. 999 9，0. 999 5，平均回收率均 ＞ 97%，(ＲSD ＜ 3%，n = 9)。结论:该方法简便、准
确、重复性好，可作为秃叶黄皮树与黄皮树质量控制的方法。秃叶黄皮树中黄柏碱、木兰花碱、巴马汀、小檗碱、黄柏酮含量与
黄皮树无明显差异;且已成为黄柏药材的主流商品，建议将秃叶黄皮树与黄皮树一同作为黄柏收入药典。
［关键词］ 秃叶黄皮树;黄皮树;高效液相色谱;含量测定
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)23-0135-05
［doi］ 10． 11653 /syfj2013230135
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20130924． 1435． 004． html
［网络出版时间］ 2013-09-24 14:35
Determination of Five Active Ingredient in Phellodendron chinense var
Glabriusculum and P． chinense by HPLC
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第 19 卷第 23 期
2013 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 23
Dec．，2013
TAN Er，LUO Shang-hua，LIN Sheng-de，TAN Ｒong，WANG Yu，ZHANG Yi，ZHANG Jing*
(College of Ethnic Medicine，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)
［Abstract］ Objective:To determine the content of phellodendrine，magnoflorine，palmatine，berberine
and obakunone in Phellodendron chinense var glabriusculum and P． chinense． Method:The determination was
carried out with ＲP-HPLC on Xtimate C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)． The mobile phase was acetonitrile
(A)-0. 1% phosphate (B)by gradient elution and the flow rate was 1. 0 mL·min －1 ． The detection wavelength
was set at 220 nm at 30 ℃ ． Ｒesult:The five components separated well under the above conditions．
Phellodendrine，magnoflorine，palmatine，berberine and obakunone had good linear relationship within the ranges
of 0. 003 5-0. 07 g·L －1 (r = 0. 999 9) ，0. 004-0. 08 g·L －1 (r = 0. 999 9) ，0. 001-0. 02 g·L －1 (r = 0. 999 9) ，
0. 01-0. 40 g·L －1 (r = 0. 999 5) ，0. 001-0. 02 g·L －1 (r = 0. 999 5)． The average recoveries were greater than
97%，(ＲSD ＜ 3%，n = 9)． Conclusion:The method is simple，accurate and repeatable，and can be used as
the quality control method of P． chinense and P． chinense var glabriusculum． There are no significant differences
between P． chinense and P． chinense var glabriusculum in terms of five kinds of chemical composition content． P．
chinense var glabriusculum has become mainstream products． So it is recommended that P． chinense var
glabriusculum should be back into the source of Phellodendri Chinensis Cortex．
［Key words］ Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid．;P． chinense Schneid．;
HPLC;determination
黄柏为芸香科黄皮树 Phyllodendron Chinense
Schneid．的干燥树皮，习称“川黄柏”，是一种常用清
热燥湿药，性味苦，寒，归肾、膀胱经，具有清热燥湿，
泻火除蒸、解毒疗疮等功效，用于湿热泻痢，黄疸尿
赤，带下阴痒，热淋涩痛，脚气痿躄，骨蒸劳热，盗汗，
遗精，疮疡肿毒，湿疹湿疮;盐黄柏滋阴降火，用于阴
虚火旺，盗汗骨蒸［1］。黄柏主要含有小檗碱、药根
碱、木兰花碱、黄柏内酯等生物碱，黄柏酮以及白鲜
交酯等柠檬苦素类成分［2-3］。目前有关川黄柏的研
究主要集中在化学成分和含量测定方面［4-9］，而关
于川黄柏中 2 种不同来源药材秃叶黄皮树和黄皮树
之间化学成分的比较研究很少，仅有川黄柏与关黄
柏之间的比较研究［10-11］。从川黄柏的资源、种植情
况及商品调查中发现，川黄柏主流商品为秃叶黄皮
树 P． Chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid．，
极 少 数 为 药 典 收 载 的 黄 皮 树 P． chinense
Schneid．［12-17］。本文采用 HPLC 同时测定秃叶黄皮
树与黄皮树药材中 5 种有效成分含量，并比较二者
有效成分的含量差异。
1 材料
1200 型高效液相色谱仪，包括四元泵，自动进
样器，DAD 检测器、ChemStation 色谱工作站(美国
Agilent公司) ，ULUP-1-10 T 型优普超纯水机(成都
超纯科技有限公司) ，CQ-250 型超声波清洗器(上
海必能信超声有限公司) ，BP211D 型 1 /10 万电子
天平(德国 Sartorius 公司)。小檗碱(批号 MUST-
12122104) ，黄柏碱(批号 MUST-12322302) ，巴马汀
(批号 MUST-12403201) ，黄柏酮 (批号 MUST-
12532205) ，木兰花碱(批号 MUST-12022901)对照
品均购于成都曼斯特生物科技有限公司，对照药材
(批号 121510-200904)为中国生物制品检定所提
供，乙腈为色谱纯，水为超纯水，磷酸、甲醇分析纯均
购于成都市科龙化工试剂厂。
黄皮树和秃叶黄皮树样品共 16 批，均为自采，
药材经成都中医药大学民族医药学院张艺研究员鉴
定，详见表 1。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Xtimate C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液
(B) ，梯度洗脱(0 ～ 25 min，10% ～ 18% A;25 ～ 35
min，18% ～25% A;35 ～ 45 min，25% ～ 40% A;45 ～
60 min，40% ～ 60% A) ，检测波长 220 nm，流速 1
mL·min －1，柱温 30 ℃，进样量 10 μL，见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取黄柏碱、木兰花
碱、巴马汀、小檗碱、黄柏酮对照品适量，置于不同的量
瓶中，用甲醇溶解定容，分别制成 1. 07 g·L －1黄柏碱，
1. 66 g·L －1木兰花碱，1. 98 g·L －1巴马汀，2. 53 g·L －1小
檗碱，1. 16 g·L －1黄柏酮对照品储备液。分别精密
吸取上述黄柏碱对照品储备液 4. 1 mL，木兰花碱对
照品储备液 3 mL，巴马汀对照品储备液 0. 63 mL，小
·631·
第 19 卷第 23 期
2013 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 23
Dec．，2013
表 1 样品信息
No． 品种 来源
1 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川天全县小河乡
2 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川天全县思经乡
3 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川雅安市雨城区观化乡
4 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川雅安市雨城区八步乡
5 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川荥经县龙苍沟镇
6 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川荥经县青龙乡
7 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川荥经县天凤乡
8 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川都江堰市虹口乡深溪村
9 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川都江堰市虹口乡红色村
10 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川犍为县公平乡三溪村
11 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川犍为县公平乡花坪村
12 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 四川峨眉山市黄湾乡黑水村
13 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 重庆市南川区三泉镇金佛山
14 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 重庆市石柱县黄水镇
15 秃叶黄皮树 Phyllodendron chinense Schneid． var． glabriusculum Schneid． 重庆市石柱县悦崃镇
16 黄皮树 P． chinense Schneid． 重庆市南川区三泉镇金佛山
17 黄皮树 P． chinense Schneid． ． 川黄柏对照药材
A．对照品;B．秃叶黄皮树;C．黄皮树;
1. 黄柏碱;2. 木兰花碱;3. 巴马汀;4. 小檗碱;5. 黄柏酮
图 1 黄皮树样品 HPLC
檗碱对照品储备液 10 mL，黄柏酮对照品储备液
1. 08 mL 于 25 mL 量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，制成混合对照品储备液。
2. 3 供试品溶液的制备 将药材粉碎，过 3 号筛，
混合均匀，称取样品 0. 1 g，置 50 mL锥形瓶中，加甲
醇 30 mL，称重，超声提取 30 min，冷却后称重，补足
差重，过滤，滤液过 0. 45 μm 微孔滤膜，取续滤液作
为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶
液 0. 1，0. 4，0. 6，0. 8，1. 2，4 mL置于 10 mL量瓶中，
用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得不同浓度的混合对照
品溶液。精密吸取不同浓度混合对照品溶液
10 μL，按 2. 1 项下色谱条件测定。以各对照品溶液
的浓度(X)为横坐标，以各成分色谱峰面积(Y)为
纵坐标进行线性回归，即得 5 个成分的标准曲线，
Y黄柏碱 = 8 108. 1X － 1. 137 1(r = 0. 999 9) ，线性范围
0. 001 7 ～ 0. 07 g·L －1;Y木兰花碱 = 21 408X － 6. 399 2
(r = 0. 999 9) ，线性范围 0. 002 ～ 0. 08 g·L －1;
Y巴马汀 = 32 440X + 0. 343 9(r = 0. 999 9) ，线性范围
0. 000 5 ～ 0. 02 g·L －1;Y小檗碱 = 32 955X + 31. 839(r =
0. 999 9) ，线性范围 0. 01 ～ 0. 4 g·L －1;Y黄柏酮 = 14 686
X + 8. 684 (r = 0. 999 5)，线 性 范 围 0. 000 5 ～
0. 02 g·L －1。
2. 5 精密度试验 精密吸取混合对照品，重复进样
5 次，每次 10 μL，按照 2. 1 项下色谱条件测定。木
兰花碱、黄柏碱、巴马汀、小檗碱、黄柏酮峰面积的
ＲSD 分 别 为 1. 49%，0. 94%，0. 82%，0. 59%，
1. 56%，表明仪器精密度良好。
·731·
谭尔，等:HPLC测定秃叶黄皮树和黄皮树中 5 种有效成分的含量
2. 6 稳定性试验 取编号 14 供试品溶液，分别在
0，1，2，4，8，12，24 h 测定，进样量 10 μL。按照 2. 1
项下色谱条件测定。黄柏碱、木兰花碱、小檗碱、黄
柏酮峰面积的 ＲSD分别为 0. 45%，0. 32%，0. 98%，
0. 58%，表明供试品溶液 24 h内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取同一批样品，称取 5 份，按
2. 3 项下制备供试品溶液，分别测定，每份进样量 10
μL。木兰花碱、黄柏碱、小檗碱、黄柏酮的 ＲSD分别
为 1. 53%，1. 68%，1. 49%，1. 66%，1. 76%，表明供
试品溶液的制备方法重复性良好。
2. 8 加样回收试验 取已知含量的同一批黄柏药材
粉末 6份，每份 0. 05 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精
密加入 0. 019 mL 黄柏碱对照品溶液(1. 07 g·L －1)、
0. 060 mL 木兰花碱对照品溶液(1. 66 g·L －1)、
0. 063 mL巴马汀对照品溶液(1. 98 g·L －1)、0. 083
mL小檗碱对照品溶液(2. 53 g·L －1)、0. 088 mL 黄
柏酮对照品溶液(1. 16 g·L －1)。然后按 2. 3 项下供
试品溶液制备方法制备样品溶液，依次测定，计算回
收率，结果见表 2 ～ 6。
表 2 黄柏碱加样回收率试验(n = 6)
No．
样品重
/ g
样品
中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 7 0. 024 3 0. 043 8 96. 21
2 0. 050 3 0. 024 1 0. 044 2 98. 91
3 0. 050 4 0. 024 2 0. 043 5 95. 08
97. 08 1. 91
4 0. 051 3 0. 024 6 0. 044 2 96. 31
5 0. 051 8 0. 024 9 0. 045 2 99. 85
6 0. 052 2 0. 025 1 0. 044 6 96. 13
注:加入量均为0. 020 3 g。
表 3 木兰花碱加样回收率试验(n = 6)
No．
样品重
/ g
样品
中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 7 0. 100 9 0. 195 9 95. 36
2 0. 050 3 0. 100 1 0. 195 7 96. 03
3 0. 050 4 0. 100 3 0. 199 2 99. 29
97. 62 1. 7
4 0. 051 3 0. 102 1 0. 198 8 97. 13
5 0. 051 8 0. 103 1 0. 201 4 98. 69
6 0. 052 2 0. 103 9 0. 202 7 99. 23
注:加入量均为0. 099 6 mg。
表 4 巴马汀加样回收率试验(n = 6)
No．
样品重
/ g
样品
中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 7 0. 162 7 0. 318 8 95. 03
2 0. 050 3 0. 161 5 0. 319 3 96. 06
3 0. 050 4 0. 161 8 0. 323 1 98. 19
96. 55 2. 0
4 0. 051 3 0. 164 7 0. 321 3 95. 32
5 0. 051 8 0. 166 3 0. 330 0 99. 66
6 0. 052 2 0. 167 6 0. 323 8 95. 08
注:加入量均为0. 164 3 mg。
表 5 小檗碱加样回收率试验(n = 6)
No．
样品重
/ g
样品
中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 7 0. 204 3 0. 422 7 103. 98
2 0. 050 3 0. 202 7 0. 416 9 101. 99
3 0. 050 4 0. 203 1 0. 419 7 103. 15
101. 2 2. 2
4 0. 051 3 0. 206 7 0. 416 8 100. 03
5 0. 051 8 0. 208 8 0. 418 6 99. 91
6 0. 052 2 0. 210 4 0. 416 6 98. 19
注:加入量均为0. 210 0 mg。
表 6 黄柏酮加样回收率试验(n = 6)
No．
样品重
/ g
样品
中量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 050 7 0. 101 9 0. 202 1 98. 10
2 0. 050 3 0. 101 1 0. 200 7 97. 61
3 0. 050 4 0. 101 3 0. 200 4 97. 12
99. 82 2. 6
4 0. 051 3 0. 103 1 0. 207 5 102. 31
5 0. 051 8 0. 104 1 0. 209 2 102. 19
6 0. 052 2 0. 104 9 0. 208 5 101. 59
注:加入量均为0. 102 1 mg。
2. 9 样品含量测定 精密称取各批次样品，各 0. 1
g，按 2. 3 项下制备供试品溶液，并在上述色谱条件
进行测定，结果见表 7。
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 23
Dec．，2013
表 7 样品中 5 种成分的含量测定 mg·g － 1
No． 黄柏碱 木兰花碱 巴马汀 小檗碱 黄柏酮
1 4. 85 1. 79 0. 28 70. 93 0. 46
2 3. 28 0. 42 0. 29 58. 68 0. 45
3 6. 00 1. 41 0. 26 54. 95 0. 45
4 5. 08 1. 01 0. 25 47. 24 0. 28
5 3. 85 1. 33 0. 24 53. 52 0. 38
6 2. 88 0. 51 0. 29 46. 34 0. 31
7 5. 14 0. 96 0. 28 57. 72 0. 41
8 7. 46 0. 89 0. 36 71. 04 0. 27
9 3. 81 0. 64 0. 21 65. 44 0. 34
10 2. 44 1. 86 0. 19 42. 92 0. 32
11 7. 33 0. 95 0. 34 71. 03 0. 40
12 7. 81 1. 18 0. 31 63. 96 0. 50
13 3. 31 0. 58 0. 22 66. 31 0. 35
14 4. 20 0. 61 0. 21 49. 82 0. 33
15 3. 96 1. 69 0. 19 46. 33 0. 29
16 4. 61 1. 44 0. 23 68. 57 0. 46
17 2. 17 0. 46 0. 20 35. 50 0. 44
3 讨论
通过对秃叶黄皮树与黄皮树中 5 种有效成分的
含量测定，发现小檗碱含量最高，巴马汀、黄柏酮、木
兰花碱、黄柏碱含量均较低，与文献报道相当［18］;秃
叶黄皮树中，采于重庆市南川区三泉镇金佛山(编
号 13)药材中小檗碱含量最高，采于四川都江堰市
虹口乡深溪村(编号 8)药材中黄柏碱含量最高;秃
叶黄皮树与黄皮树药材中 5 种有效成分的含量差异
不大。
四川(雅安市、荥经县、峨眉山市、犍为县、都江
堰市)和重庆(石柱县)等川黄柏主产地收集川黄柏
药材过程中，通过实地调查发现，四川省与重庆市黄
皮树资源已濒危，在以上药材采集地中，仅在重庆市
南川区金佛山发现 2 株栽种黄皮树，其余各地均为
秃叶黄皮树。相关文献［19］报道，秃叶黄皮树与黄皮
树中的小檗碱含量无明显差异，且秃叶黄皮树已成
为黄柏的主流商品，广泛栽培于四川的荥经、洪雅、
雅安等地。因此，本课题组建议《中国药典》将秃叶
黄 皮 树 P． chinense Schneid． var． glabriusculum
Schneid．与黄皮树 P． chinense Schneid． 均作为黄柏
药材法定基源收载。
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［责任编辑 顾雪竹］
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谭尔，等:HPLC测定秃叶黄皮树和黄皮树中 5 种有效成分的含量