全 文 ：西北农业学报　 2004, 13( 2): 94～ 96
Acta Agricultur ae Bo rea li-occidentalis Sinica
瑞香狼毒根的毒鱼活性成分研究
元　超1 ,周　乐* ,吴　联 ,王永学 ,毛　鹏
(西北农林科技大学生命科学学院 , 陕西杨凌　 712100)
摘　要: 将瑞香狼毒根粉末依次用乙酸乙酯、乙醇、甲醇进行提取 ,结合生物示踪对毒鱼活性最强的乙醇部分
进一步细分 ,通过反复的硅胶柱层析和葡聚糖凝胶柱 ( sephadex L H -20) ,最终得到 3种纯化合物 ,其中一种具
有较强的毒鱼活性 ,通过化学定性鉴定和简单的光谱学鉴定 ,初步确定此 3种化合物均为香豆素类。
关键词: 瑞香狼毒 ; 毒鱼 ; 香豆素
中图分类号: Q949. 96　　　　文献标识码: A　　　　　文章编号: 1004-1389( 2004) 02-0094-03
Study on the Killing Fish Active Ingredient
in the Root of Stellera Chamaejasme L.
YUAN Chao , ZHOU Le, W U Lian, W ANG Yong-xue, M AO Peng
( College of Li fe Sciences, Northw es t Sci-Tech Univ ersi ty of Ag ricul tu re and Fores t ry, Yangling Shaanxi　 712100, China)
Abstract: The roo t pow der of stellere chamaejasme L. w as ex t racted wi th ethyl acetate、 ethanol、
methano l in turn. Accompanyed wi th bio tic trace, we made a fur ther isolation on the most activ e par t—
ethanol f raction. We go t three kinds o f pure compounds in the end through several times of co lumn
chroma tog raphy on silica and gel( sephadex LH-20) , one of w hich has st rong activi ty tow ards kil lfish.
They w ere identified to be coumarin by the chemica l and spect ral evidence.
Key words: Stellera chamaejasme L. ; Killfi sh; Coumarin
　　瑞香狼毒 (stel lere chamaejasme L. )又名断
肠草、狼毒、西北狼毒等十几种名称 ,为瑞香科狼
毒属植物 [1 ] ,主要分布在中国西北、西南、东北及
河北等地 ,资源十分丰富 [ 2, 3]。
瑞香狼毒其性味苦平 ,有毒 ,有逐水祛痰破积
杀虫之功效 [4 ] ,作为一种传统中药 ,民间将其用于
治疗皮肤病、结核、肠癌、胃癌及慢性气管炎等已
有好多年历史 [5 ]。现代药理学研究表明 ,瑞香狼毒
具有抗菌、镇痛等作用。
鉴于瑞香狼毒在医药、病理学领域日趋广泛
的应用 ,本文依据文献报道 [6, 7 ] ,以毒鱼作为生测
指标 ,来筛选其中的活性成分。
1　材料与方法
1. 1　材料及仪器
1. 1. 1　材料　瑞香狼毒根购自西安药材市场 ,经
西北农林科技大学苗芳博士鉴定。实验所用鱼苗
为草鱼 ,购于西安市场 ,长约 3～ 4 cm,重约 1. 2 g,
饲养 15 d观察正常。实验所用乙酸乙酯、乙醇、甲
醇、石油醚、苯、乙醚、丙酮、氯仿等试剂均为分析
纯 ,薄层硅胶为青岛海洋化工有限公司生产的
GF-254硅胶 ,葡聚糖凝胶型号为 Sephadex-
LH20。
1. 1. 2　仪器　 RE-52薄膜旋转蒸发仪 ,不同型号
的玻璃层析柱 , SBH-Ⅲ循环式多用真空泵 , ZF-C
型三用紫外分析仪 ,紫外分光光度计 , KQ-250B
收稿日期: 2003-12-12　　修回日期: 2004-01-07
基金项目:陕西省农业科技攻关项目 ( 2003-K03-G2-02)
作者简介:元　超 ( 1979- ) ,男 ,山东威海人 ,在读硕士生 ,从事植物资源化学的开发与应用方面的研究。
* 通讯作者。 E-mail: bet terzl@ 163. com
型超声波清洗器 , JA3003型电子天平。
1. 2　方　法
1. 2. 1　供试样的提取分离　将狼毒根粉末依次
用乙酸乙酯、乙醇、甲醇 35℃超声提取 ,每种溶剂
连续提取 3次 ,合并相同溶剂提取液并减压浓缩 ,
分别得浸膏 A、 B、 C。以 A、 B、 C为最初的供试样 ,
以毒鱼活性试验为跟踪手段 ,确定活性部位并采
用硅胶柱色谱对其进行一次分段分离。选择活性
最强的部位 ,采用硅胶柱色谱进行细分并结合
Sephadex-LH20柱色谱进行纯化 ,最后得到 3个
纯品。分别对 3个纯品进行毒鱼活性试验 ,确定出
毒鱼活性成分。
1. 2. 2　粗提物的化学成分预试　按照文献 [8]的
方法 ,对粗提物 A、 B、 C分别进行化学成分预试。
1. 2. 3　毒鱼活性试验　将样品分别用少量甲醇
溶解 ,然后将其配成浓度为 10 mg /kg的水溶液 ,
以相同量甲醇的水溶液作对照 ,选取重量基本相
同的健康鱼苗作为供试鱼 ,每组 4条 ,观察 24 h内
鱼苗活动异常和死亡情况。 以鱼失去平衡并伴随
着分泌一些白色絮状物为异常 ,停止鳃动为死亡。
1. 2. 4　纯度检查与定性分析　分别用两种极性
相差较大的展开体系对各纯品进行 TLC分析 ,斑
点均为单一者视为纯品。 利用试管预试法和 UV
分析对各纯品的类型进行化学定性。
2　结果与分析
2. 1　 3种粗提物的生测结果
按照 1. 2. 2的方法对 A、 B、 C进行毒鱼活性
试验 ,以甲醇水溶液为对照 ( CK) ,结果见表 1。
表 1　 A、 B、C的毒鱼活性
Table 1　 Killf ish eff ects of A , B and C
样品
Sample
鱼苗异常时间 /min
Time of losing fi sh s balance
鱼苗死亡时间 /min
Death tim e of fi sh
1号鱼
No. 1
2号鱼
No. 2
3号鱼
No. 3
4号鱼
No. 4
平均值
Av erage
1号鱼
No. 1
2号鱼
No. 2
3号鱼
No. 3
4号鱼
No. 4
平均值
Averag e
A 150 190 220 240 200 170 220 260 290 235
B 95 140 165 190 147 130 155 190 230 176
C 230 250 275 285 260 280 285 300 310 294
CK — — — — — — — — — —
　　由表 1可见 ,瑞香狼毒 3部分提取物均有不同
程度的毒鱼活性 ,其中以 B部分的毒鱼效果最佳 ,
平均异常时间 147 min,平均死亡时间 176 min, A
部分次之 , C部分最差。
2. 2　 A、 B、 C的化学成分预试结果
预试结果表明 , B部分主要含有糖及甙、黄酮
及甙、内酯及香豆素类 ,可能含有少量皂甙、甾体
及萜类化合物 ; A部分含有甾体、萜类、黄酮及其
甙、少量酚类、挥发油、有机酸 ,可能含有微量生物
碱 ; C部分含有糖及甙、黄酮及甙、内酯及香豆素
甙 ,可能含有皂甙、强心甙、多肽。
2. 3　粗提物 B的粗分物的生测结果
　　对毒鱼活性最大的 B部分进行一次硅胶柱层
析 ,以氯仿 /甲醇混合溶剂为洗脱剂 ,采用极性递
增的方式进行洗脱 ,最后粗分为 6个部位 ,分别为
L1～ L6,其中 L1～ L4依次为氯仿 /甲醇 ( V /V 9
∶ 1)洗脱的前 4个点 , L5为氯仿 /甲醇 ( V /V
7∶ 3)洗脱物 , L6为甲醇洗脱物。 表 2是 L1～ L6
的毒鱼活性生测结果。
表 2显示 , L3～ L6基本上不具有毒鱼活性 ,
毒鱼活性成分主要集中在 L1和 L2中 ,其中 L1毒
鱼活性最佳 ,其平均异常时间为 72 min,平均死亡
时间为 90 min。
表 2　 L1～ L6的毒鱼活性
Table 2　Killfish ef fects of L1～ L6
样品
Sample
鱼苗异常时间 /min
Time of losing fi sh s balance
鱼苗死亡时间 /min
Death tim e of fi sh
1号鱼
No. 1
2号鱼
No. 2
3号鱼
No. 3
4号鱼
No. 4
平均值
Av erage
1号鱼
No. 1
2号鱼
No. 2
3号鱼
No. 3
4号鱼
No. 4
平均值
Averag e
L1 50 50 65 125 72 70 80 80 130 90
L2 250 250 250 340 272 290 290 290 380 312
L3～ L6 — — — — — — — — — —
CK — — — — — — — — — —
·95·2期　　　　　　　　　　　　　元　超等: 瑞香狼毒根的毒鱼活性成分研究　　　　　　　　　　　　　　
2. 4　 L1部位的精分及各单体的生测结果
对主要毒鱼部位 L1进行硅胶柱层析精分 ,所
得各目标物再经 Sephadex LH-20柱层析纯化 ,分
别得到 E2-1、 E2-2和 E2-3共 3个单体化合物。
TLC纯度检查实验显示 3种化合物分别在两种不
同的展开体系中均呈单一斑点。表 3为 3种单体化
合物的毒鱼活性生测结果。
表 3　 E2-1、 E2-2和 E2-3的毒鱼活性
Table 3　 Killf ish ef fects of E2-1、 E2-2 and E2-3
样品
Sample
鱼苗异常时间 /min
Time of losing fi sh s balance
鱼苗死亡时间 /min
Death tim e of fi sh
1号鱼
No. 1
2号鱼
No. 2
3号鱼
No. 3
4号鱼
No. 4
平均值
Av erage
1号鱼
No. 1
2号鱼
No. 2
3号鱼
No. 3
4号鱼
No. 4
平均值
Averag e
E2-1 — — — — — — — — — —
E2-2 24 35 57 57 43 65 72 75 80 73
E2-3 — — — — — — — — — —
CK — — — — — — — — — —
　　由表 3可知 , 3个化合物中只有 E2-2有强毒
鱼活性 ,其余两种均无活性 ,说明 E2-2就是瑞香
狼毒根中的主要杀鱼活性物质。
2. 5　 E2-2的化学定性与 UV鉴定
E2-1、 E2-2和 E2-3在波长为 365 nm的紫外
灯下均为天蓝色荧光斑点 ,且经氨熏后 ,天蓝色荧
光增强 ,说明三者均可能为香豆素类化合物。 同
时 , 3种化合物的α-萘酚反应均无明显的紫色环
现象 ,且均能溶于甲醇和氯仿的混合溶剂 ,这说明
3个单体中不含有糖 ,可能为极性较小的香豆素
甙元类化合物。另外 ,紫外光谱表明各自的最大吸
收波长 ( nm )分别为: E2-1: 218、 322、 324、 240
( sh ) ; E2-2: 230、 282、 348; E2-3: 214、 292、 322
( sh)、 340。
3　讨　论
尽管本研究首次从瑞香狼毒根乙醇提取物中
分离得到杀鱼活性物质 E2-2,但是由表 1可知 ,瑞
香狼毒根中的杀鱼活性物质绝不仅仅只是 E2-2。
虽然乙酸乙酯粗提物和甲醇粗提物的杀鱼活性较
乙醇粗提物低 ,但这并不能说明前两者中含有的
杀鱼活性物质的活性就低。 因为一种活性物质是
否能够表现出其主导作用取决于其含量和活性两
个因素 ,因此要弄清楚瑞香狼毒根中的主要杀鱼
活性物质还需要对乙酸乙酯粗提物和甲醇粗提物
进行进一步深入研究。
参考文献:
[1 ]　刘桂芳 ,付玉芹 ,侯凤飞 .瑞香狼毒化学成分研究 [ J] .中国
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中草药 , 2001, 32( 8) : 764～ 766.
[4 ]　刘桂芳 ,付玉芹 ,侯凤飞 ,等 . 瑞香狼毒化学成分研究 (Ⅰ )
[ J] .中草药 , 1996, 27( 2): 67～ 68.
[5 ]　冯宝民 ,裴月湖 .瑞香狼毒中的化学成分研究 [ J ].中国药学
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[7 ]　 Niw a M, takamizaw a M, Tatamatsu H, et al . Pi scicidal con-
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Bull, 1982, 30( 12): 4518～ 4520.
[8 ]　肖崇厚 . 中药化学 [M ] .上海: 上海科技出版社 , 1999. 595
～ 597.
·96· 西　北　农　业　学　报 13卷