全 文 ：4 结论
正交设计是多因素分析的有利工具，它可以很方便地从众多
因素中选出主要影响因素及最佳水平组合，从而用较少的实验次
数获得较多的信息，为选择最佳实验条件提供可靠的方法。本次
实验得到最佳水平组合为使用 PDMS 100 μm 萃取头、在 60℃的
萃取温度、萃取 30 min。可以通过较少次数的实验取得最佳萃取
效果的组合。解吸时间的考察，我们没有采用正交设计实验而采
用了单因素实验是考虑到解吸时间直接影响到解吸程度的大小，
解吸不完全不仅会影响方法的灵敏度，而且会污染后续样品使实
验准确性很难把握，但长时间高温解吸会缩短萃取纤维的寿命;
而在一定的时间内，温度升高可使解吸加快，但会缩短 SPME 萃
取纤维的使用寿命，单因素实验结果表明 5min 就可以达到完全
解吸。
顶空固相微萃取与气质连用是一种快速、简单、需样品量少
的测定疏毛吴茱萸挥发性成分的分析方法。本研究确定了疏毛
吴茱萸挥发性成分的提取方法并进行 GC － MS 分析。优化后的
固相微萃取主要条件是:萃取头 PDMS 100 μm，萃取温度 60℃，
萃取时间 30 min，解吸时间 5 min。共鉴定了 77 种挥发性物质，
其中大根香叶烯是含量最高的挥发性物质。
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收稿日期:2009-10-16; 修订日期:2010-06-08
基金项目:国家林业局荒漠化和沙化监测专题项目
作者简介:毕凌霄(1983-) ，女(汉族) ，内蒙古自治区赤峰人，现为北京林
业大学硕士研究生，主要从事化学生态学研究工作．
* 通讯作者简介:廖蓉苏(1954-) ，女(汉族) ，北京人，现任北京林业大学
教授，学士学位，主要从事植物化学研究工作．
不同生长期瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量研究
毕凌霄，廖蓉苏*
(北京林业大学，北京 100083)
摘要:目的 分析测定不同生长期瑞香狼毒和牛心朴子的总黄酮含量。方法 采用分光光度法分别对不同生长期瑞香狼
毒和牛心朴子的总黄酮含量进行分析测定。结果 不同生长期内，瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量变化趋势不同，但都
是 9 月份总黄酮含量最高。瑞香狼毒总黄酮含量在 7、8 月份时明显较低，分别为 6． 3 mg /g和 7． 8 mg /g，9 月份最高，达到
18． 5 mg /g;牛心朴子总黄酮含量在 8 月份时较低，为 12． 5 mg /g，9 月份最高，为 16． 3 mg /g。结论 以黄酮类化合物为有
效成分的瑞香狼毒和牛心朴子的最佳采收期均为 9 月份。
关键词:不同生长期; 瑞香狼毒; 牛心朴子; 总黄酮
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2010． 10． 037
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2010)10-2505-03
瑞香狼毒 Stellera chamaejasme L．，又名断肠草、红狼毒，为瑞
香科狼毒属多年生根茎型草本植物，广泛分布于东北、华北、西
南、西北、内蒙古、黑龙江等地的干草原、沙质草原和典型草原的
退化草地上［1］。牛心朴子 Cynanchum komarovii Al． Ijirski 为萝
科鹅绒藤属多年生草本植物，俗称老瓜头、芦心草，主要分布于内
蒙古、宁夏、甘肃、青海、陕西等地［2］。瑞香狼毒和牛心朴子均为
草原退化植物，在内蒙古地区的一些退化草场，瑞香狼毒或牛心
朴子大面积连片生长，已成为退化草场的建群种植物，导致草原
质量和经济生产力严重下降。瑞香狼毒和牛心朴子虽然具有一
定毒性，牲畜不宜采食，但二者同时又是具有不同药用价值的中
草药。如瑞香狼毒具有逐水、破积、祛痰、杀虫、止痛的功
能［1，3 ～ 5］，在抗肿瘤、抗菌、抗病毒(尤其是艾滋病毒)、抗癫痫等
方面有独到之处［1，6］。牛心朴子具有镇痛、抗炎、抑菌功效，对呼
吸系统常见病的咳、痰、喘症状可有缓解治疗作用［7 ～ 9］，此外，牛
心朴子还是一种很好的蜜源植物［10］，在西北草原养蜂业中占有
重要地位。黄酮类化合物是瑞香狼毒和牛心朴子的主要有效成
分之一，对其在两种植物中的含量测定虽曾有报道［11 ～ 15］，但不同
生长期黄酮含量的动态研究尚未见报道。为此，本文对内蒙古鄂
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL ． 21 NO． 10 时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 10 期
尔多斯草原不同生长期的瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量分别
进行了分析测定并加以比较研究，以期为瑞香狼毒和牛心朴子的
综合开发利用提供科学依据。
1 材料与仪器
1． 1 材料 瑞香狼毒和牛心朴子试样分别于 2008 － 05 ～ 09 每月
上旬采自内蒙古自治区鄂尔多斯草原，经鄂尔多斯市林业工作站
鉴定。所有实验材料取地上部分，去除花、果实，去杂，自然晾干
后备用。
1． 2 试剂 芦丁标准品，BR，国药集团化学试剂有限公司;95%
乙醇、氢氧化钠、硝酸铝、石油醚、正丁醇，AR，北京化工厂;亚硝
酸钠，AR，国药集团化学试剂有限公司。
1． 3 仪器 SP － 2000 型分光光度计，上海光谱仪器有限公司。
2 方法
2． 1 定性检验 称取粉碎 20 目的瑞香狼毒和牛心朴子各 5 g，分
别用 95%乙醇于索氏提取器中回流提取 2 h，提取液浓缩近干，
用 30%乙醇溶解。各取溶液 1 ml于试管中，加适量镁粉，再逐滴
加入盐酸，两者反应均呈现桃红色，为黄酮类化合物正反应。
2． 2 标准曲线的绘制 精密称取 120℃干燥恒重的无水芦丁(黄
酮标准对照品)20 mg，用 60%乙醇定容于 100 ml 容量瓶中，摇
匀。精密量取 25． 0ml 置于 50 ml 容量瓶中，加水稀释至刻度
(0． 1 mg芦丁 /m1)。精密量取上述溶液 0． 0，1． 0，2． 0，3． 0，4． 0，
5． 0 ml分别置于 10 ml容量瓶中，分别精密加入 5%亚硝酸钠溶
液 0． 3 ml，摇匀，静置 6 min，加 10%硝酸铝溶液0． 3 ml，摇匀，再
静置 6 min，加 1 mol / l氢氧化钠溶液 4 ml，分别用 30%乙醇溶液
稀释至刻度，摇匀，静置 15 min，置于比色皿中，用 SP － 2000 型分
光光度计，在 510 nm波长处测定吸光度。以溶液浓度 C(mg /ml)
为横坐标，吸光度 A为纵坐标，绘制标准曲线图，并作线性回归，
求出回归方程。
2． 3 样品总黄酮含量的测定 精密称取粉碎 20 目的材料(不同
生长期的瑞香狼毒及牛心朴子)各 5 g，分别用 95%乙醇于索氏
提取器中提取，至提取液无黄酮反应为止。将提取液浓缩近干，
加 10 ml蒸馏水溶解后，用石油醚萃取脱脂，弃去石油醚层。水
层用正丁醇萃取，至水溶液无黄酮反应为止。减压回收正丁醇至
近干，加适量 30%乙醇溶液溶解，分别移至 50 ml 容量瓶中，用
30%乙醇溶液稀释至刻度。精密量取此溶液 4． 0 ml，分置于 100
ml容量瓶中，用 30%乙醇稀释至刻度。精密量取上述样品液
3． 0，4． 0，5． 0 ml，按照上述标准曲线的绘制方法，将样品溶液显
色后测定吸光度，根据回归方程求出相应的浓度，用下述公式分
别计算瑞香狼毒及牛心朴子的总黄酮含量:
总黄酮提取率(%)=
c × 10 × 100 × 504
m × 1 000 ×取样毫升数
× 100%
式中:m为样品材料粉末的重量(g) ;c 为样品材料总黄酮的浓度
(g /ml)。
2． 4 稳定性实验 分别取瑞香狼毒和牛心朴子样品液，在不同时
间内按标准曲线方法分别测定其吸光度。
2． 5 精密度实验 精密吸取芦丁对照品溶液 1． 0ml，5 份，置于 10
ml容量瓶中，分别测定其吸光度。
2． 6 重复性实验 分别精密称取 20 目的样品材料 5 份，每份 5
克，按样品总黄酮含量的测定方法做平行试验，进行样品总黄酮
含量的测定。
2． 7 加样回收率实验 精密称取粉碎 20 目样品材料 5 g，5 份，分
别加一定量的标准芦丁。按样品总黄酮含量测定方法提取后测
定其含量，用以下公式计算回收率:
回收率(%)=混合后总黄酮量 －样品总黄酮量
芦丁加入量
× 100%
3 结果
3． 1 芦丁标准曲线 标准曲线如图 1 所示，用最小二乘法作线性
回归，得芦丁的回归方程为:Y = 9． 531 4X － 0． 002 6，r = 0． 999 8
结果表明在 0 ～ 0． 06 mg /ml的范围内，吸光度与浓度呈良好
的线性关系。
图 1 芦丁标准曲线
3． 2 不同生长期瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮含量的比较分析
3． 2． 1 瑞香狼毒总黄酮含量测定 5 ～ 9 月份瑞香狼毒总黄酮含
量测定结果(各月份总黄酮含量均为 5 次平行试验的平均值)见
图 2 所示。结果表明，不同生长期瑞香狼毒总黄酮含量不同，9
月份含量最高，达 1． 85%(即 18． 5mg /g) ，7、8 月份含量明显较
低，分别为 0． 63%(即 6． 3mg /g)和 0． 78%(即 7． 8mg /g) ;各月份
含量高低顺序为:9 月份 ＞ 6 月份 ＞ 5 月份 ＞ 8 月份 ＞ 7 月份。
图 2 不同生长期瑞香狼毒总黄酮含量比较
3． 2． 2 牛心朴子总黄酮含量测定 5 ～ 9 月份牛心朴子总黄酮含
量测定结果(各月份总黄酮含量均为 5 次平行试验的平均值)见
图 3。结果表明，整个生长期内牛心朴子总黄酮含量变化趋势与
瑞香狼毒不同，但仍是 9 月份总黄酮含量最高，达 1． 63%(即
16． 3 mg /g) ，7 月份含量与 9 月份接近，为 1． 61%(即 16． 1 mg /
g) ;各月份含量高低顺序为:9 月份 ＞ 7 月份 ＞ 5 月份 ＞ 6 月份 ＞ 8
月份。
图 3 不同生长期牛心朴子总黄酮含量比较
实验结果表明，整个生长期内，瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮
含量均是 9 月份含量最高，说明瑞香狼毒和牛心朴子在 9 月份收
获，其有效成分黄酮类化合物的含量较高，应具有较强的药效，若
对其加以开发利用将能获得更好的利用价值。
3． 2． 3 稳定性实验结果 瑞香狼毒和牛心朴子样品稳定性实验
(以 9 月份样品为例)结果见图 4。样品乙醇提取液加入显色剂
显色后，显色溶液在 40 min 内稳定，40 min 后吸光度明显下降。
这是因为天然黄酮类化合物在结构上往往存在有多个酚羟基，在
强碱性条件下，黄酮母核上的酚羟基易被氧化而褪色。故显色一
定时间后，由于黄酮类化合物被氧化，致使吸光度严重下降。因
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此，当样品溶液加入硝酸铝显色后，应在 40 min 内测定吸光度，
否则显色时间过长，溶液颜色变淡甚至消失，吸光度值减小至丧
失。
图 4 显色液的稳定性曲线
3． 2． 4 精密度实验结果 见表 1。由表 1 可知，RSD 为 2． 85%，
小于 5%，表明实验结果的精密度良好。
表 1 精密度实验结果
编号 吸光度 RSD(%)
1 0． 087
2 0． 085
3 0． 086 2． 85
4 0． 083
5 0． 081
3． 2． 5 重复性实验结果 见表 2。
表 2 重复性实验结果
样品名称
采集
时间
黄酮类化合物百分含量(%)
1 2 3 4 5 平均值
RSD
(%)
瑞香狼毒 5 月份 1． 46 1． 48 1． 51 1． 49 1． 5 1． 49 1． 3
6 月份 1． 71 1． 7 1． 73 1． 71 1． 69 1． 71 0． 88
7 月份 0． 61 0． 63 0． 6 0． 64 0． 66 0． 63 3． 37
8 月份 0． 77 0． 74 0． 8 0． 78 0． 76 0． 78 3． 21
9 月份 1． 83 1． 86 1． 87 1． 85 1． 86 1． 85 0． 85
牛心朴子 5 月份 1． 51 1． 53 1． 49 1． 54 1． 51 1． 52 1． 32
6 月份 1． 34 1． 36 1． 38 1． 32 1． 35 1． 35 1． 66
7 月份 1． 6 1． 63 1． 61 1． 59 1． 62 1． 61 0． 98
8 月份 1． 25 1． 27 1． 23 1． 24 1． 28 1． 25 1． 7
9 月份 1． 66 1． 64 1． 61 1． 62 1． 63 1． 63 1． 19
3． 2． 6 加样回收率实验结果 见表 3。结果表明，瑞香狼毒和牛
心朴子各月份平均回收率均在 97%以上，且 RSD 值均小于 5%，
说明瑞香狼毒和牛心朴子试验的回收率均较高，试验相对标准偏
差较小，说明应用此工艺提取、测定瑞香狼毒和牛心朴子总黄酮
含量是可取的。
表 3 加样回收率实验结果
样品名称 采集时间
回收率(%)
1 2 3 4 5 平均值
RSD(%)
瑞香狼毒 5 月份 99． 52 98． 79 98． 93 99． 11 97． 96 98． 86 0． 58
6 月份 97． 57 97． 69 98． 66 97． 41 98． 36 97． 94 0． 55
7 月份 96． 87 97． 42 96． 98 98． 23 97． 55 97． 41 0． 55
8 月份 97． 64 98． 1 97． 22 96． 37 98． 07 97． 48 0． 74
9 月份 97． 9 99． 56 96． 77 99． 26 98． 81 98． 46 1． 15
牛心朴子 5 月份 98． 77 99． 23 97． 58 97． 17 98． 46 98． 24 0． 87
6 月份 97． 02 98． 54 98． 96 100． 31 96． 26 98． 22 1． 63
7 月份 98． 19 96． 99 96． 73 97． 87 98． 24 97． 6 0． 72
8 月份 100． 07 99． 43 97． 99 98． 58 98． 19 98． 85 0． 89
9 月份 97． 75 97． 6 98． 74 99． 11 99． 28 98． 5 0． 79
本研究以乙醇为溶剂用索氏提取法提取不同生长期瑞香狼
毒和牛心朴子总黄酮，采用分光光度法进行含量测定。从实验的
精密度、回收率、稳定性和重复性等试验数据表明，该项研究方法
稳定可靠，测定数据重复可信，且操作简便易行，不仅可以用于研
究瑞香狼毒和牛心朴子的总黄酮含量，也为与之相似的草本植物
总黄酮含量的测定提供借鉴。
4 结论
实验结果表明，9 月份瑞香狼毒和牛心朴子的总黄酮含量均
高于其他月份。黄酮类化合物是植物生长过程中产生的次生代
谢产物，植物体内次生代谢产物的产生和积累与植物的生长发育
程度以及外界环境因素密切相关。9 月鄂尔多斯草原已是仲秋
时节，植物生长进入生长末期，植物经过一个生长季的发育生长，
一些次生代谢产物有了较多的积累，这可能是两种植物中黄酮类
化合物含量 9 月份要高于其他月份的原因。所以若作为药用或
者在研究和利用瑞香狼毒和牛心朴子的黄酮类化合物时，9 月份
是样品采集的较好时期。本实验结果为草原退化有毒植物瑞香
狼毒和牛心朴子的开发和利用提供了一定的科学依据。
黄酮类化合物是药用植物中主要活性成分之一，此类化合物
具有多种药理作用。目前对牛心朴子的研究报道中，多为对其生
物碱成分的研究。而实验研究表明，牛心朴子中总黄酮含量也较
高，这为其开发利用提供了新的理论依据。瑞香狼毒和牛心朴子
在我国干旱沙质草原、退化草场分布广泛，资源丰富，除具有一定
的经济效益外，在沙质草原和严重退化草地上也具有一定的生态
作用，应加强和完善对其各部分的科学研究，以更好地实现综合
利用。
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