全 文 ：内蒙古地区瑞香狼毒药材 HPLC指纹图谱研究
卓兆莲 , 　高　英＊ , 　李卫民 , 　高卫东 , 　姚小华
(广州中医药大学 ,广东 广州 510405)
收稿日期:2007-07-08
作者简介:卓兆莲(1980～ ),女 ,硕士 ,从事中药新药开发与研究 ,电话:020-39358290, E-mail:guizi-xiaoqiang@163.com。
＊通讯作者:高　英 ,电话:020-39358290, E-mail:vip.gaoying@gzhtcm.edu.cn。
关键词:瑞香狼毒;指纹图谱;高效液相色谱法
摘要:目的:建立内蒙古地区瑞香狼毒药材的 HPLC指纹图谱。方法:采用反相高效液相色谱法 , 选用 AKZONOBELKro-
masilC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱;流动相为乙腈 -0.5%磷酸溶液(梯度洗脱);分析时间 60 min;检测波长为
297nm, 柱温:15℃。结果:建立了瑞香狼毒药材的 HPLC指纹图谱 ,标定了瑞香狼毒药材 14个共有指纹峰 , 方法学考察
结果符合指纹图谱技术要求 , 10批瑞香狼毒药材的相似度在 0.9 ～ 1.0之间。结论:该方法稳定 、可靠 、重现性好 ,可为内
蒙古地区瑞香狼毒药材质控标准的制定提供参考。
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2008)06-0790-03
HPLCfingerprintofStelerachamaejasmeofInnerMongoliaRegion
ZHUOZhao-lian, 　GAOYing＊ , 　LIWei-min, 　GAOWei-dong, 　YAOXiao-hua
(GuangzhouUniversityofTCM, Guangzhou510405 , China)
KEYWORDS:Stelerachamaejasme;fingerprint;HPLC
ABSTRACT:AIM:ToestablishaHPLCfingerprintofStelerachamaejasmeL.fromInnerMongoliaRegion.
METHODS:TheRP-HPLCmethodwasusedwithAkzonobelKromasilC18(250mm×4.6mm, 5μm)theaceto-
nitrile-0.5% phosphoricacid(gradientelution)wasusedasmobilephase, analytictimewas60min, anddetec-
tivewavelengthwasat297nm, thecolumntemperatureof15℃ wereadopted.RESULTS:TheHPLCfingerprint
ofStelerachamaejasmeL.setupshowedthat14 peakswereco-posessingindiferentsources.Theresultsof
methodvalidationmettechnicalstandardoffingerprint, thesimilaritiesofStelerachamaejasmeL.were0.9 to
1.0.CONCLUSION:Themethodisstableandreliablewithagoodreproducibilityandprovidesareference
standardforthequalitycontrolofStelerachamaejasmeL.fromInnerMongoliaRegion.
　　瑞香狼毒为瑞香科植物 StelerachamaejasmeL.的干燥
根 , 又名断肠草 ,其味苦辛 ,性平 , 有毒。 入肺脾肝经。具有
逐水祛痰 , 破积杀虫之功效 [ 1] 。广泛分布于我国西北 、内蒙
古 、黑龙江等地 ,在西北地区销售使用 [ 2] 。目前国内外学者
对其化学成分进行了较系统研究 , 从中发现了多种黄酮类 、
香豆素类及二萜类等成分都具有较强的抗肿瘤 、抗病毒 , 特
别是抗 HIV病毒的作用 [ 3] 。部颁标准对瑞香狼毒药材的质
量控制仅限于理化鉴别 , 不能系统 、完整地反映瑞香狼毒的
内在质量。目前 , 指纹图谱已成为国际公认的控制中药和天
然药物质量最有效的于段。为了有效地控制瑞香狼毒药材
及含瑞香狼毒的中药复方制剂的质量 ,笔者通过考察内蒙古
产的瑞香狼毒药材 , 建立了内蒙古地区瑞香狼毒药材的高效
液相色谱指纹图谱。
1　仪器与试药
1.1　仪器　GermanyDionexSummit高效液相色谱仪(P680
HPLCPump, ASI-100 AutomatedSampledInjector, PDA-100
PhtodiodeArrayDetector, STH585ColumnOven), Chromeleon
色谱工作站 ,乙腈 、甲醇为色谱纯 , 水为超纯水 , 其他试剂均
为分析纯。
1.2　试药　瑞香狼毒药材采自内蒙古各地区 , 见表 1。经
广州中医药大学新药开发与研究中心高英主任中药师鉴定
为瑞香科植物瑞香狼毒 StellerachamaejasmeL.的干燥根。
　　狼毒色原酮对照品为本实验室自制 , 其光谱数据与文献
中 [ 4]狼毒色原酮的数据一致 , 经 HPLC归一化法测定 , 纯度
在 97%以上。
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表 1　 瑞香狼毒样品来源
编号 收集地点 规格 采集时间
1 内蒙古稀拉穆仁草原 个子货 2004.8
2 内蒙古阿鲁科尔沁旗道德苏木 个子货 2006.8
3 内蒙古巴彦淖尔盟 横切片 2006.7
4 内蒙古阿拉善盟 纵切片 2003.3
5 内蒙古乌兰察布盟 横 /斜切片 2006.8
6 内蒙古乌兰察布市集宁区 横 /斜切片 2006.7
7 内蒙古呼市武川县 横 /斜切片 2006.7
8 内蒙古乌兰察布市蛮汉山 横 /斜切片 2006.8
9 内蒙古阿盟蒙研所 纵切片 2003.8
10 内蒙古科尔沁草原 个子货 2005.8
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱为 AkzonobelKromasilC18(250 mm
×4.6 mm, 5 μm);流动相:A:乙腈 , B:0.5%磷酸溶液(线性
梯度洗脱程序见表 2), 体积流量:1.0 mL/min;柱温:15℃;
检测波长:297 nm;分析时间:60 min;进样体积 10μL。
表 2　 流动相条件
时间 /min 流动相 A/% 流动相 B/%
0～ 60 10※65 90※ 35
2.2　供试品溶液的制备　取本品粉末约 0.5 g, 精密称定 ,
置具塞锥形瓶中 , 精密加入 70%乙醇 50 mL, 称定重量 , 加热
回流 45min,放冷 , 再称定重量 , 用 70%乙醇补足减失的重
量 , 滤过 ,摇匀 , 微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,即得。
2.3　参照物溶液的制备　精密称取在 60 ℃减压干燥至恒
重的狼毒色原酮对照品适量 , 加甲醇制成每 1 mL含 80 μg
的溶液 , 即得。
2.4　测定方法　精密吸取供试品溶液 10 μL, 注入高效液
相色谱仪 , 记录 60 min色谱图见图 1。
图 1　瑞香狼毒药材指纹图谱
2.5　方法学考察
2.5.1　精密度试验　取同一供试品溶液(编号 1),按 “ 2.2”
项下方法制备供试品 ,连续进样 6次 , 测得各共有峰相对保
留时间和相对峰面积比值的 RSD值分别在 0.01% ～ 0.25%
和 0.09% ～ 2.28%之间 ,表明该方法精密度良好 。
2.5.2　稳定性试验　取同一供试品溶液(编号 1),按 “ 2.2”
项下方法制备供试品 , 分别在 0、 2、 4、 8、 12、 24 h进样 , 测得
各共有峰相对保留时间和相对峰面积比值的 RSD值分别在
0.01% ～ 0.28%和 0.08% ～ 2.52%之间 ,表明供试品溶液在
24 h内的稳定。
2.5.3　重复性试验　取同一批号的样品(编号 1)6份 , 按
“ 2.2”项下方法制备供试品 , 分别进样 , 测得各共有峰的相
对保留时间和相对峰面积比值的 RSD值分别在 0.01% ～
0.32%和 0.89% ～ 2.89%之间 ,表明该方法重复性良好。
2.6　指纹图谱及技术参数
2.6.1　指纹图谱　根据 10批供试品的检测结果(见图 2),
其中 14个峰是 10批供试品所共有的 , 因此确定这 14个峰
为共有指纹峰。共有峰中 8号峰为狼毒色原酮的色谱峰 ,所
占比例最大且稳定 ,因此标定其为参照峰S。以参照峰 8(S)
的保留时间和峰面积为 1,计算各共有指纹峰的相对保留时
间及峰面积比值。
图 2　10批瑞香狼毒药材色谱图
　　 按照 《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行规
定)》 ,对 10批瑞香狼毒药材指纹图谱检测结果(共有指纹
峰面积及峰面积比值)进行统计 , 在共有指纹峰中 , 只有参照
峰 8(S), 10和 11号峰的峰面积大于总峰面积的 10%,故只
考虑 10和 11号峰的峰面积比值 , 其余各共有峰均按其相对
保留时间定性。
2.6.2　技术参数 　共有峰的峰号 (相对保留时间):
1(0.517), 2(0.671), 3(0.687), 4(0.741), 5(0.771),
6(0.817), 7 (0.874), 8(1), 9(1.054), 10(1.127),
11(1.189), 12(1.205), 13(1.267), 14(1.548)。
共有峰的峰号(峰面积比值)范围:10(0.35 ～ 0.69), 11
(0.26 ～ 0.40)。 10批供试品溶液测定结果见表 3和 4。
2.7　相似度评价
采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系
统(2004年 A版)分别以 10批瑞香狼毒药材样本的峰面积
平均值和中位数为共有模式 , 根据峰匹配的结果 , 对所得的
HPLC指纹图谱全谱进行相似度计算 , 以相关系数表征相似
度 ,结果见表 5。
　　结果表明 , 10批瑞香狼毒药材与共有模式的相似度在
0.9 ～ 1.0之间 ,表明瑞香狼毒药材来源质量均一 、稳定。
3　讨论
3.1　检测波长的选择　对指纹图谱的检测波长 208, 261,
297, 320nm进行了选择 ,结果表明检测波长为 297 nm, 色谱
图所包含的信息量大 ,各色谱峰分离较好。
3.2　流动相的选择　考虑到瑞香狼毒含多种黄酮类物质 ,
在流动相中加入一定比例的酸 , 以减少色谱峰拖尾。曾试用
甲醇 -0.1%醋酸 , 乙腈 -0.1%醋酸 ,乙腈 -0.1%甲酸梯度
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表 3　 10批瑞香狼毒药材共有指纹峰的相对保留时间
共有
峰号
药材批次
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 RSD/%
1 0.516 0.517 0.520 0.520 0.516 0.516 0.517 0.517 0.516 0.516 0.517 0.31
2 0.670 0.670 0.672 0.672 0.670 0.670 0.670 0.670 0.670 0.671 0.671 0.13
3 0.687 0.687 0.689 0.689 0.687 0.687 0.687 0.687 0.687 0.688 0.687 0.12
4 0.741 0.741 0.742 0.742 0.741 0.740 0.741 0.741 0.741 0.742 0.741 0.09
5 0.771 0.771 0.772 0.772 0.771 0.771 0.771 0.771 0.771 0.772 0.771 0.06
6 0.817 0.817 0.818 0.818 0.817 0.817 0.817 0.817 0.817 0.818 0.817 0.06
7 0.873 0.874 0.874 0.874 0.873 0.873 0.874 0.874 0.873 0.875 0.874 0.08
8(S) 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00
9 1.055 1.054 1.054 1.054 1.054 1.054 1.054 1.054 1.054 1.054 1.054 0.03
10 1.127 1.127 1.126 1.126 1.127 1.127 1.127 1.127 1.127 1.127 1.127 0.04
11 1.189 1.189 1.188 1.188 1.189 1.189 1.189 1.189 1.189 1.190 1.189 0.05
12 1.205 1.205 1.204 1.204 1.205 1.205 1.205 1.205 1.205 1.206 1.205 0.05
13 1.267 1.265 1.264 1.264 1.269 1.267 1.266 1.269 1.266 1.269 1.267 0.15
14 1.548 1.549 1.545 1.545 1.549 1.548 1.549 1.549 1.549 1.550 1.548 0.11
表 4　 10批瑞香狼毒药材共有峰相对峰面积
编号
10号峰
占总峰面
积比例 /%
相对峰
面积
11号峰
占总峰面
积比例 /%
相对峰
面积
非共有峰面
积占总峰面
积比例 /%
1 20.01 0.60 11.43 0.34 0.18
2 14.76 0.42 13.89 0.40 2.26
3 18.43 0.56 12.75 0.38 0.11
4 13.93 0.39 10.13 0.29 0.05
5 25.80 0.69 10.88 0.29 0.53
6 20.87 0.56 10.34 0.28 0.59
7 21.07 0.58 11.22 0.31 0.65
8 16.72 0.35 10.34 0.26 0.54
9 17.53 0.39 10.90 0.26 0.51
10 20.28 0.61 11.51 0.35 0.20
表 5　 10批次瑞香狼毒药材相似度结果
样品号 相似度平均数 中位数
1 0.994 0.989
2 0.988 0.983
3 0.945 0.937
4 0.980 0.985
5 0.990 0.989
6 0.998 0.996
7 0.998 0.995
8 0.987 0.991
9 0.991 0.995
10 0.993 0.989
洗脱 , 分离效果不好 , 基线容易漂移 ,改用乙腈 -0.5%磷酸
后 ,基线平直且分离度良好。
比较了等度洗脱与梯度洗脱对瑞香狼毒指纹图谱的影
响 ,结果发现等度洗脱时 , 改变流动相的组成或比例只能得
到较少的色谱峰。改用梯度洗脱 , 样品中不同极性组分都获
得了合适的保留 ,在 60min内各组分全部出峰 , 色谱峰数增
加到 14个以上。
3.3　柱温的选择　比较了 15℃, 20℃, 25℃, 30℃, 35℃下的
分离效果 , 结果表明温度越高 , 分离效果越差 , 所以选用
15℃为最佳柱温。
3.4　参照物的选择　瑞香狼毒药材有效成分中狼毒色原酮
的含量较高且相对稳定 , 因此选其作为参照物。
3.5　本方法稳定 、可靠 、重现性好 , 可为瑞香狼毒药材及其
它含瑞香狼毒的中药复方制剂制定质量标准提供参考 , 也为
含瑞香狼毒的中药方剂的物质基础研究与配伍规律研究提
供分析方法。
参考文献:
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