全 文 ：［收稿日期］ 20110719(011)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(U0732004)
［第一作者］ 易宇阳，硕士研究生，从事中药新药开发研究，Tel:020-39358517，E-mail:yyy448429@ yahoo． com． cn
［通讯作者］ * 苏子仁，研究员，博士生导师，从事中药新药开发研究，Tel:020-39358517，E-mail:suziren@ gzhtcm． edu． cn
·化学与分析·
苦木药材中 3 种有效成分的含量测定
易宇阳1，赖正权1，石书江1，陈海明1，孔松芝1，黄思涵1，苏子仁1，2*
(1. 广州中医药大学新药开发研究中心，广州 510006;
2. 东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东 东莞 523808)
［摘要］ 目的:建立苦木药材中 3-甲基-铁屎米-5，6-二酮、4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮以及 4，5-二甲氧基-铁屎米酮 3 种生
物碱的含量测定方法。方法:用 phenomenex Gemini C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以乙腈-乙酸铵缓冲盐(25 mmol·
L － 1，冰乙酸调 pH 4. 0)为流动相，采用梯度洗脱，检测波长为 254 nm。结果:3-甲基-铁屎米-5，6-二酮等 3 种对照品分别在
0. 004 56 ～ 0. 182 40，0. 012 ～ 0. 480，0. 002 6 ～ 0. 104 0 μg 线性良好(r≥0. 999 9) ，平均回收率均 ＞ 96. 72% (RSD ＜ 0. 78%)。
结论:含量测定方法简便、稳定、重复性好，为苦木药材质量控制和评价提供了可靠的方法。
［关键词］ 苦木;3-甲基-铁屎米-5，6-二酮;4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮;4，5-二甲氧基-铁屎米酮;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)12-0071-04
Content Determination of Three Effective Constituents in
Picrasmae Ramulus et Folium
YI Yu-yang1，LAI Zheng-quan1，SHI Shu-jiang1，CHEN Hai-ming1，
KONG Song-zhi1，HUANG Si-han1，SU Zi-ren1，2*
(1. Research and Development Center of New Drug Guangzhou University of Chinese Medicine，
Guangzhou 510006，China;2. Dongguan Mathematical Engineering Academy of Chinese Medicine and
Guangzhou University of Chinese Medicine，Dongguan 523808，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for determination of the content of three alkaloids 3-methyl-
canthin-5，6-dione，4-methoxy-5-hydroxycanthin-6-one and 4，5-dinethoxycanthin-6-one in Picrasmae Ramulus et
Folium． Method:The determination was carried out with Phenomenex Gemini C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5
μm)． The mobile phase consisted of 0. 25 mmol·L － 1 ammonium acetate buffer (pH 4. 0 by HAC) (A) -
acetonitrile (B)with gradient elution． The detection wavelength was at 254 nm． Result:3-methyl-canthin-5，6-
dione，three reference substances were in good linearity between 0. 004 56-0. 182 40，0. 012-0. 480，0. 002 6-
0. 104 0 μg (r≥0. 999 9) ，and the average recovery was greater than 96. 72% (RSD ＜ 0. 78%)． Conclusion:
The determination method is simple and convenient，stable and repeatable，it would provided a reliable approach
to evaluate and control the quality of Picrasmae Ramulus et Folium．
［Key words］ Picrasmae Ramulus et Folium;3-methyl-canthin-5，6-dione;4-methoxy-5-hydroxycanthin-
6-one;4，5-dinethoxycanthin-6-one;HPLC
苦木收载于《中国药典》2010 年版一部，为苦木 科植物苦木的干燥枝与叶，性寒，味苦，具有清热、祛
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2012 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 12
Jun．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.12.031
湿、解毒之功效。现代药理研究表明，苦木具有抗菌
消炎［1］、解热［2］、降压［3］、抗癌［4］、抗蛇毒［5］、抗疟［4］
等疗效。其中生物碱类成分 3-甲基-铁屎米-5，6-二
酮、4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮以及 4，5-二甲氧基-铁
屎米酮具有较强的抑菌作用［6］，为苦木抗菌消炎类
中药制剂的有效成分。目前，中药制剂产品质量参
差不齐，一个最主要的原因就是投料中药材的质量
不一、差异明显。为了更好的从源头对苦木制剂的
质量进行控制，本文采用高效液相色谱方法对苦木
药材中 3 种抗菌有效成分进行同时测定。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 日本岛津 LC-20AT 型 HPLC 仪;SPD-
20A 紫外-可见检测器;LCsolution 色谱工作站，试验
室专用超纯水机(重庆利迪现代水技术设备有限公
司) ，Sartorius BP110s 型 1 /万 电 子 天 平 (德 国
Sartorius 公司) ，CP225D 型 1 /10 万电子天平(德国
Sartorius 公司)。
1. 2 试药 3-甲基-铁屎米-5，6-二酮，4-甲氧基-5-
羟基铁屎米酮以及 4，5-二甲氧基-铁屎米酮(分别简
称铁、己、丁，由广州中医药大学新药开发研究中心
从苦木茎中分离得到，经四大光谱检测，HPLC 归一
法测定纯度在 99%以上，可供含量测定用) ;苦木药
材分别由江西青峰药业有限公司和广东万年青制药
有限公司提供(产地为广东英德、广东翁德、广东清
远、江西、广西，共 20 批) ，经广州中医药大学中药
学院苏子仁教授鉴定为苦木科植物苦木 Picrasma
quassioides (D． Don)Benn 的干燥枝与叶。乙腈为
色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 phenomenex gemin C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，乙腈(A)-乙酸铵缓冲盐(B，
浓度 25 mmol·L － 1，冰乙酸调 pH 4. 0)为流动相，采
用梯度洗脱(0 ～ 6 min，15% ～ 19. 5% A;6 ～ 7 min，
19. 5% ～ 22. 5% A;7 ～ 14 min，22. 5% ～ 23% A;14 ～
20 min，23% ～ 30% A;20 ～ 25 min，30% ～ 40% A;
25 ～ 40 min，40% ～ 50% A) ，流速 1. 0 mL·min － 1，
柱温 30 ℃，检测波长 254 nm。在此条件下，苦木药
材中各色谱峰分离良好，对照品铁、己、丁与其相邻
色谱峰分离度大于 1. 5。结果见图 1，2，理论塔板数
均大于 5 000。
图 1 20 批苦木药材高效液相色谱
A. 苦木对照品;B. 苦木药材
图 2 苦木对照品及苦木药材高效液相色谱
2. 2 供试品溶液的制备 称取苦木药材粗粉约
2 g，精密称定，置 100 mL 平底烧瓶中，精密加入
85%乙醇 100 mL，称定质量，回流提取 1. 5 h，放冷，
加 85%乙醇补足减失的质量。滤过，取续滤液适量
过微孔滤膜(0. 45 μm) ，即得。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取铁、己、丁 3 种
对照品适量，加甲醇制成浓度分别为 0. 045 6，
0. 120 01，0. 026 0 g·L － 1的对照品混合溶液。
2. 4 线性关系考察 精密吸取上述对照品混合液
0. 1，0. 2，0. 5，1. 0，1. 5，2. 0，3. 0，4. 0 mL，分别置于
10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得到 8 个
浓度系列的对照品混合液。在上述色谱条件下分别
进样 10 μL 进行测定，以峰面积(Y)为纵坐标对进
样量(X)进行线性回归，得标准曲线。见表 1。
2. 5 精密度试验 精密吸取对照品混合液 10 μL，
重复进样 6 次。测得 3 个对照品 RSD 分别为
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 12
Jun．，2012
表 1 线性范围考察
对照品名称 线性范围 /μg 回归方程 r
铁 0. 004 56 ～ 0. 182 40 Y = 55 482. 695 62X － 830. 491 48 0. 999 9
己 0. 012 00 ～ 0. 480 00 Y = 44 195. 460 24X + 903. 258 59 0. 999 9
丁 0. 002 60 ～ 0. 104 00 Y = 106 094. 945 12X + 1 544. 706 90 0. 999 9
1. 41%，0. 92%，1. 05%，表明精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一样品(产地广西，样品
11) ，按上述色谱条件于 0，2，4，6，8，10，12，24 h 分
别测定，测得峰面积并计算含量，结果 3 个对照品的
RSD 分别为 1. 95%，1. 29%，1. 34%，表明样品在
24 h内稳定。
2. 7 重复性试验 按 2. 2 项下的供试品制备方法，
取同一样品(产地广西，样品 11) ，平行制备 6 份，测
得峰面积并计算含量，结果 3 个对照品含量平均分
别为 0. 183，0. 805，0. 210 mg·g － 1。RSD 分别为
1. 01%，0. 84%，1. 18%。表明本方法重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取已测含量的苦木药材样
品(产地广西，样品 11)共 6 份，每份 1 g，精密称定。
分别加入 3-甲基-铁屎米-5，6-二酮、4-甲氧基-5-羟基
铁屎米酮、4，5-二甲氧基-铁屎米酮对照品溶液适
量，按供试品溶液制备项下操作，平行操作 6 份，测
定含量，计算回收率，结果见表 2。
表 2 苦木药材中不同成分的加样回收率测定
成分 No． 称样量 / g 样品中含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
铁 1 1. 001 2 0. 176 6 0. 18 0. 350 1 96. 4 96. 72 0. 78
2 1. 000 8 0. 180 1 0. 18 0. 356 0 97. 7
3 1. 000 5 0. 180 1 0. 18 0. 354 3 96. 8
4 1. 001 0 0. 180 2 0. 18 0. 353 0 96. 0
5 1. 001 4 0. 180 3 0. 18 0. 352 9 95. 9
6 1. 000 2 0. 180 0 0. 18 0. 355 5 97. 5
己 1 1. 001 2 0. 811 0 0. 81 1. 621 8 100. 1 99. 22 0. 59
2 1. 000 8 0. 810 6 0. 81 1. 618 2 99. 7
3 1. 000 5 0. 810 4 0. 81 1. 608 3 98. 5
4 1. 001 0 0. 810 8 0. 81 1. 614 3 99. 2
5 1. 001 4 0. 811 1 0. 81 1. 612 2 98. 9
6 1. 000 2 0. 810 2 0. 81 1. 611 3 98. 9
丁 1 1. 001 2 0. 270 3 0. 21 0. 536 0 98. 4 98. 25 0. 42
2 1. 000 8 0. 270 2 0. 21 0. 535 1 98. 1
3 1. 000 5 0. 270 1 0. 21 0. 534 5 97. 9
4 1. 001 0 0. 270 3 0. 21 0. 537 6 99. 0
5 1. 001 4 0. 270 4 0. 21 0. 535 5 98. 2
6 1. 000 2 0. 270 1 0. 21 0. 534 4 97. 9
2. 9 含量测定 取 20 批不同产地苦木药材，按
2. 2 项下供试品溶液制备方法，制成供试品溶液。
精密吸取各供试品溶液，按上述色谱条件进行了测
定，结果见表 3。
3 讨论
3. 1 色谱柱的选择 共试验了 5 种不同厂家的色
谱柱，分别是 Phenomenex gemini C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，YMC Pack ODS(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm) ，Agilent Zorbax SB-C18(4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ，Alltech Alltima C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
Waters SymmetryShield RP18 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ，从中选用了 Phenomenex  gemini C18(4. 60
mm × 250 mm，5 μm) ，不仅分离效果好，且 pH 适用
范围在 1 ～ 12，耐酸性。
3. 2 流动相的选择 考察了流动相 S1(乙腈-乙酸
铵溶液)系统，梯度洗脱;S2(甲醇-乙酸铵溶液)系
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易宇阳，等:苦木药材中 3 种有效成分的含量测定
表 3 20 批苦木药材含量测定
No． 产地 厂家 铁 己 丁
1 广东英德 江西青峰 0. 18 0. 58 0. 19
2 广东英德 江西青峰 0. 38 0. 64 0. 52
3 广东英德 江西青峰 0. 21 0. 69 0. 10
4 广东英德 江西青峰 0. 11 0. 58 0. 11
5 广东英德 江西青峰 0. 29 1. 05 0. 18
6 广东英德 江西青峰 0. 18 1. 01 0. 17
7 广东英德 江西青峰 0. 19 0. 92 0. 25
8 广东英德 江西青峰 0. 22 0. 72 0. 17
9 广东翁源 江西青峰 0. 19 0. 91 0. 20
10 江西 江西青峰 0. 51 1. 74 0. 66
11 广西 广东万年青 0. 18 0. 81 0. 21
12 广西 广东万年青 0. 40 1. 66 0. 35
13 广西 广东万年青 0. 34 1. 11 0. 72
14 广西 广东万年青 0. 19 0. 71 0. 33
15 广西 广东万年青 0. 25 0. 76 0. 29
16 广西 广东万年青 0. 29 1. 01 0. 34
17 广西 广东万年青 0. 23 1. 09 0. 17
18 广东清远 广东万年青 0. 25 0. 40 0. 33
19 广东清远 广东万年青 0. 38 1. 19 0. 58
20 广东清远 广东万年青 0. 20 0. 39 0. 23
统;S3(乙腈-十二烷基苯磺酸钠水溶液)系统，梯度
洗脱;S4(乙腈-磷酸盐缓冲溶液)系统，梯度洗脱;
S5(乙腈-氨水)系统，梯度洗脱。结果发现以 S1 系
统分离度、峰形及理论塔板数较好，故选择其为流
动相。
3. 3 检测波长的选择 从 PDA 绘制的三维图谱，
可知各组分的最大吸收波长主要集中在 254 nm 附
近，故选择 254 nm 为检测波长。
本实验由于采样较少，试验数据不能完全反映
各产地苦木药材的质量情况。但从 20 批苦木药材
样品的含测数据可以看出，不同批次、产地的样品间
3-甲基-铁屎米-5，6-二酮、4-甲氧基-5-羟基铁屎米
酮、4，5-二甲氧基-铁屎米酮三种抗菌消炎有效成分
的含量差异性明显。究其原因可能是由于药材的生
长年限、采收期、采收部位的差异造成的。苦木药材
的质量不一和不可控性必然导致苦木相关制剂产品
质量的不稳定。提示，应从药材质量控制入手，建立
苦木 GAP 种植基地，方能从源头对苦木制剂产品的
质量进行控制。
［参考文献］
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京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，
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研讨会，2006.
［责任编辑 顾雪竹］
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