全 文 ：快速液相法同时测定鸡血藤原儿茶酸、 儿茶素和表儿茶素的含量
张敏， 刘翠婷， 严萍， 芦进财， 詹若挺
（广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心， 岭南中药资源教育部重点实验室， 广东广州 510006）
鸡血藤为豆科植物密花豆 Spatholobus suberectus
Dunn 的干燥藤茎 ［1］， 是我国的传统中药， 具有补
血、 活血、 通络之传统功效， 一般用于治疗月经不
调、 血虚萎黄、 麻木瘫痪、 风湿痹痛等症［2］。 文献报
道原儿茶酸含量相对较高， 具有抗菌、 抗炎作用，
对心血管系统有明显的药理活性 ［3］。 儿茶素、 表儿
茶素有明显的清除体内自由基、 抗癌、 抗炎等药理
活性， 为鸡血藤的有效成分［4］。 目前， 鸡血藤的含量
测定最常用的是高效液相色谱 （HPLC） 法， 该法分
离时间长、 流动相消耗大［3～7］。 快速液相色谱采用了
小粒径色谱柱填料， 不仅使柱效得以提高， 而且在
较宽的流速范围内柱效保持恒定， 从而有利于通过
提高流动相的流速而缩短分析时间， 提高分析通量。
相对于常规 HPLC而言， 快速液相色谱有更好的分
离效率、 峰容量以及灵敏度［8］。 本研究采用菲罗门公
司 2．6 μm 粒径的色谱柱， 建立了含量测定分析方
法， 实现快速分离的目的， 可为鸡血藤药材质量研
究提供科学依据， 现报道如下。
1 材料
1． 1 试剂及药材 儿茶素 （批号 ： 110877 －
201102）、 表儿茶素 （批号： 110877－200102）、 原
儿茶酸 （批号： 11019－200604） 对照品均购自中
国药品生物制品检定所； 试剂均为分析纯， 乙腈为
色谱纯 （德国 Merk 公司）； 水为屈臣氏蒸馏水；
鸡血藤药材经广州中医药大学资源与工程研究中心
詹若挺研究员鉴定为正品 Spatholobus suberectus
Dunn， 密封保存于阴凉干燥处。 药材来源见表 1。
1． 2 仪器 Thermo Ultimate 3000 高效液相色谱仪
（美国赛默飞世尔科技公司）： 四元泵、 二极管阵列
检测器 （DAD）、 自动进样器、 Chromelen 色谱工
作站； BS224S 电子天平 （德国 Sartorius 公司， 万
分之一）； XR205SM－DR 电子天平 （瑞士 Precisa
公司， 十万分之一）； DGX－9073 鼓风干燥箱 （上
海福玛公司）。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 Phenomenex Kinetex XB－C18 色谱
摘要： 【目的】 建立快速液相色谱法同时测定鸡血藤药材中原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶素含量。 【方法】 采用 Phenomenex
Kinetex XB－C18 （4．6 mm × 100 mm， 2．6 μm） 色谱柱， 以乙腈—磷酸—水为流动相， 等度洗脱 （体积比为 10∶90）， 流速 1．3
mL ／ min， 柱温25℃， 检测波长 260 nm， 进样体积 2 μL。 【结果】 原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶素的线性范围分别 0．091 6 ～ 0．549 6
μg （r＝0．999 7）、 0．772 ～ 3．86 μg （r＝0．999 4）、 0．670 5 ～ 4．023 μg （ r＝0．999 7）； 平均加样回收率分别为 102．96％ （sR＝
1．62％）、 99．44％ （sR＝2．68％）、 97．34％ （sR＝1．88％）。 【结论】 该方法简便、 快捷， 可用于鸡血藤中原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶
素的含量测定， 可为鸡血藤的质量控制研究提供参考。
关键词： 鸡血藤 ／化学； 儿茶素类 ／分析； 快速液相色谱
中图分类号： R284．1 文献标志码： A 文章编号： 1007－3213 （2014） 03－0439－04
DOI： 10． 13359 ／ j． cnki． gzxbtcm． 2014． 03． 027
收稿日期： 2013－09－29
作者简介： 张敏 （1989－ ）， 女， 硕士研究生； E－mail： 919637953＠qq．com
通讯作者： 詹若挺 （1970－ ）， 男， 研究员； E－mail： ruotingzhan＠vip．163．com
基金项目： 中央财政支持地方高校发展专项资金项目 （粤财教 【2010】 358 号）
表 1 鸡血藤药材来源
Table 1 Medicinal material resources of Caulis Spatholobi
物态
原药材
名称
鸡血藤
鸡血藤 原药材
批次
2
10
来源
广东平远
广东南岭药业 GAP 基地
原药材鸡血藤 6 广州清平市场
鸡血藤 原药材 2 广西玉林市场
广州中医药大学学报
Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine
2014 年 5 月第 31 卷第 3 期
May 2014，Vol． 31，No． 3 439
图 1 鸡血藤样品及对照品快速液相色谱图
Figure 1 Fast liquid chromatograms of the Caulis Spatholobi samples and reference substances
mAu
A
B
A． 原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶素混合对照品； B． 鸡血藤供试品溶液
t ／min
17－原儿茶酸－1．787
25－儿茶素－2．963
33－表儿茶素－5．163
柱 （4．6 mm × 100 mm， 2．6 μm）， 流动相 A： 体积分
数 0．2％磷酸—水， 流动相 B： 乙腈。 等度洗脱 （体
积比为 10 ∶ 90）， 流速 1．3 mL ／min， 检测波长 260
nm， 室温检测， 柱温： 25℃， 进样量： 2 μL。 色谱
图见图 1。
2． 2 溶液制备
2． 2． 1 对照品溶液制备 取原儿茶酸、 儿茶素和
表儿茶素适量， 精密称定， 用甲醇配制成 0．091 6、
0．772、 0．670 5 mg ／ mL的混和对照品溶液。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末 （过 4 号
筛） 约 2．0 g， 精密称定， 加甲醇 50 mL， 冷浸过
夜， 滤过， 蒸干， 用甲醇 5 mL定容， 即得。
2． 3 线性关系考察 对照品溶液分别过 0．45 μm
的微孔滤膜， 分别进样 1、 2、 3、 4、 5、 6 μL， 作
快速液相色谱分析。 以峰面积 （Y） 为纵坐标， 以
所进对照品的质量 （X） 为横坐标， 绘制标准曲
线。 3 种对照品的峰面积与进样量呈良好线性关
系， 线性范围分别为： 原儿茶酸 0．091 6 ～ 0．549 6
μg、 儿茶素 0．772 0 ～ 3．86 μg、 表儿茶素 0．670 5
～ 4．023 0 μg； 对应的回归方程分别为 ： Y ＝
35．163X＋0．025 9， r＝0．999 7； Y＝2．234 2X＋0．095
2， r＝0．999 4； Y＝2．448 1X＋0．085 4， r＝0．999 7。
2． 4 精密度试验 精密吸取对照品溶液， 按照
2．1 项下的色谱条件连续进样 6 次， 记录 3 种对照
品的峰面积， 计算相对标准偏差 （sR）， 3 种对照品
sR分别为原儿茶酸 1．07％， 儿茶素 0．86％， 表儿茶
素 0．57％ （N＝6）， 表明仪器精密度良好。
2． 5 稳定性试验 取 2．2．2 项下的供试品溶液，
室温放置， 分别于 0、 2、 4、 6、 8、 13、 24 h 后按
2． 1项下的色谱条件进行测定， 分别记录保留时间
与峰面积值， 结果显示： 24 h 内原儿茶酸、 儿茶
素、 表儿茶素的保留时间和峰面积相差较小 （峰面
积 sR分别为 1．37％、 1．29％、 0．92％）。 表明供试品
溶液在 24 h内稳定。
2． 6 重复性试验 精密称取同一批 （南台
121601） 鸡血藤样品 6 份， 每份 2．0 g， 依照 2．2．2
项下方法制备供试品溶液， 2．1项下的色谱条件进行
分析。 结果显示： 平均含量分别为原儿茶酸 0．091
mg ／ g、 儿茶素 0．484 mg ／ g、 表儿茶素 2．231 mg ／ g；
sR依次为 2．82％、 2．83％、 2．30％ （N＝6）， 表明本
方法重复性良好。
2． 7 加样回收率试验 准确称取已知含量的 （南台
121601） 鸡血藤样品粉末 6 份， 每份 1 g， 分别精
密加入 2．2．1项下的对照品溶液， 依 2．2．2项下方法
制备供试品溶液， 按照 2．1 项下的色谱条件进行测
定， 结果见表 2。
广州中医药大学学报 2014 年第 31 卷440
图 2 原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶素纯度图
Figure 2 Comparison of the purity of protocatechuic acid， catechin and epicatechin
0．5368 0．6705
0．5368 0．6705
1．2031
1．1999
99．37
98．89
0．5368 0．6705 1．1919 97．70
0．5368 0．6705 1．1925 97．78
0．4949 0．7720 1．2680 100．15
0．4949 0．7720 1．2619 99．35
0．4949 0．7720 1．2725 100．73
儿茶素 0．4949 0．7720 1．2504 97．86 2．68
0．4949 0．7720 1．2310 95．35
0．0938 0．0916 0．1866 101．36
0．0938 0．0916 0．1900 105．08
0．09160．0938 0．1890 103．92
0．0938 0．0916 0．1860 100．63
0．4949 0．7720 1．2914 103．18
表儿茶素 0．5368 0．6705 1．1773 95．53 1．88
0．5368 0．6705 1．1724 94．78
成分 m加入量 ／ mgm原有量 ／ mg m测得值 ／ mg p回收 ／ ％ sR ／％
原儿茶酸 0．0938 0．0916 0．1888 103．69 1．62
0．0938 0．0916 0．1890 103．92
表 2 原儿茶酸、 儿茶素、 表儿茶素的加样回收率
Table 2 Recoveries of protocatechuic acid， catechin and epicatechin in the Caulis Spatholobi samples （N＝6）
60．0
50．0
40．0
30．0
20．0
10．0
0．0
－10．0
60．0
50．0
40．0
30．0
20．0
10．0
0．0
－10．0
60．0
50．0
40．0
30．0
20．0
10．0
0．0
－10．0
a． 原儿茶酸 b． 儿茶素 c． 表儿茶素
2． 8 样品含量测定 按 2．2．2 项下方法制备供试
品溶液， 各进样 2 μL 取平均值计算含量， 二极管
列阵检测器 （DAD） 检测样品中各峰纯度， 原儿茶
酸纯度系数 992．16， 儿茶素纯度系数 999．92， 表儿
茶素纯度系数 999．98。 结果见图 2， 含量测定结果
见表 3。
张敏， 等． 快速液相法同时测定鸡血藤原儿茶酸、 儿茶素和表儿茶素的含量第 3 期
259．8
205．4
294．0
50％在 1．77 min： 999．99
－50％在 1．81 min： 999．99
峰 ＃9 100％在 1．79 min
％
202．7
278．8
峰 ＃13 100％在 2．97 min
％ 50％在 2．94 min： 999．94
－50％在 3．00 min： 999．94
峰 ＃15 100％在 5．16 min
％ 50％在 5．12 min： 999．94
－50％在 5．21 min： 999．94
278．5
202．4
441
表 3 样品含量测定结果
Table 3 Determination of protocatechuic acid，
catechin and epicatechin in different batches of Caulis
Spatholobi samples （N＝18） w ／ （mg·g－1）
原儿茶酸
0．0932
序号
南台 1 批
玉林 1 批 0．0706
玉林 2 批 0．0281
儿茶素
0．4982
0．4391
0．5351
表儿茶素
0．5412
0．8753
1．6409
同真堂 0．1722 0．8834 1．4343
广印堂 0．0946 0．4156 0．6701
清平 1 批 0．0382 0．4375 1．8437
南台 9 批 0．0552 0．4302 1．9353
南台 10 批 0．0516 0．7576 1．5244
南台 7 批 0．0901 0．5447 0．7157
南台 8 批 0．0315 0．3388 1．2056
南台 5 批 0．0980 0．5385 0．5984
南台 6 批 0．0981 0．5111 0．5677
0．0977南台 2 批 0．5140 0．5715
南台 3 批 0．0952 0．5115 0．5756
南台 4 批 0．0972 0．5081 0．5682
清平 2 批 0．0457 0．7997 1．4934
清平 3 批 0．0605 0．7298 2．0644
清平 4 批 0．0561 0．6395 2．2540
3 讨论
通过比较不同提取方法， 如加热回流、 索氏提
取、 超声萃取和微波萃取法发现， 生药以甲醇冷
浸， 儿茶素类化合物提取率最高， 且色素干扰最
少， 超声次之， 加热回流和索氏提取少， 故选用甲
醇为提取溶剂， 冷浸过夜。 对不同流动相进行考
察， 发现加入一定的酸对原儿茶酸的分离更好， 且
比较了甲醇、 乙腈、 醋酸、 磷酸等显示采用乙腈—
体积分数 0．2％磷酸水系统， 色谱峰达到较好分离，
峰形对称， 既能满足基线分离的要求， 又有适宜的
保留时间。
本研究采用 2．6 μm 粒径的色谱柱， 实现了鸡
血藤儿茶素类物质的快速分析检测， 可以节省时
间、 提高效率、 减少溶剂的消耗； 但是采用亚 2 μm
小粒径填料色谱柱， 由于色谱柱的孔隙率低， 在相
同流速下产生的压力大 ［9］， 需要提供足够的柱前
压。 采用快速液相色谱法对鸡血藤儿茶素类成分进
行测定时， 液相压力已达到 330 bar， 比采用普通
高效液相法高出了约 200 bar 的压力 ， Thermo
Ultimate 3000 色谱仪能耐受此压力， 提供了足够的
柱前压， 而此时的供试品溶液在 6 min 内分离完
全。 与刘军民等［7］建立的检测方法比较， 时间缩短
5倍， 节约了时间和溶剂。
鸡血藤作为多年生野生藤茎类药材， 野生资源
逐渐减少， 导致市面上鸡血藤药材生长年限不足，
质量差异较大。 本研究结果显示： 鸡血藤药材中原
儿茶酸的含量较低 （0．028 1 ～ 0．172 2 mg ／ g）， 儿
茶 素 （ 0．338 8 ～ 0．883 4 mg ／ g） 与 表 儿 茶 素
（0．541 2 ～ 2．254 mg ／ g） 的含量比较高； 虽然不同
来源鸡血藤药材的含量存在差异， 尚需进一步研
究， 但原儿茶酸、 儿茶素与表儿茶素的总含量均在
1．0 mg ／ g以上。 因为儿茶素类物质具有较好的生物
活性， 且在鸡血藤中含量较高， 可作为评价鸡血藤
药材品质的指标之一。 本研究建立的快速液相法快
速、 准确、 高效， 可同时测定鸡血藤药材中原儿茶
酸、 儿茶素与表儿茶素的含量。
参考文献：
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 （一部）［M］． 北京： 中
国医药科技出版社， 2010： 134．
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展［J］． 中草药， 2011， 6 （42）： 1229．
［3］ 翟明， 刘军民， 安冉， 等． HPLC 法测定鸡血藤类药材中原儿
茶酸的含量［J］． 中药新药与临床药理， 2009， 20 （5）： 462．
［4］ 刘超， 马林， 陈若芸． 反相高效液相色谱法测定鸡血藤中儿茶
素类成分的含量［J］． 中国中药杂志， 2005， 30 （18）： 1433．
［5］ 徐菁， 周本宏 ． 用 HPLC 法测定鸡血藤膏中芒柄花素的含量
［J］． 数理医药学杂志， 2008， 21 （6）： 721．
［6］ 丁平， 仰铁锤， 林振坤． 用 HPLC 法测定鸡血藤膏中芒柄花素
的含量［J］． 华西药学杂志， 2010， 25 （4）： 461．
［7］ 刘军民， 安冉， 翟明， 等． 鸡血藤商品药材质量评析［J］． 中药
新药与临床药理， 2012， 23 （5）： 573．
［8］ 杨义芳． 超高效 ／高分离度快速 ／超快速液相色谱在中药及其制
剂研究中的应用［J］． 中草药， 2008， 39 （8）： 1259．
［9］ 李笃信， 唐涛， 王风云， 等． 超高压液相色谱仪的研究进展及
超高压引起的相关问题［J］． 色谱， 2008， 26 （1）： 105．
【责任编辑： 黄玲】
（英文摘要见第 447页）
广州中医药大学学报 2014 年第 31 卷442
Simultaneous Determination of Protocatechuic Acid， Catechin and
Epicatechin in Caulis Spatholobi by Fast Liquid Chromatography
ZHANG Min， LIU Cuiting， YAN Ping， LU Jincai， ZHAN Ruoting
（Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering， Ministry of Education Key Laboratory of Chinese Medicinal
Resource from Lingnan， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510006 Guangdong， China）
Abstract： Objective To establish a method for simultaneous determination of protocatechuic acid， catechin and
epicatechin in Caulis Spatholobi by fast liquid chromatography． Methods The fast liquid chromatography was
performed on Phenomenex Kinetex XB－C18 column （4．6 mm×100 mm， 2．6 μm） with acetonitrile－acetic acid－
water as mobile phase by isocratic elution （10∶90） ． The flow rate was 1．3 mL ／ min， the column temperature
was 25℃， the detection wavelength was 260 nm， and the injection volume was 2 μL． Results The linearity of
protocatechuic acid， catechin and epicatechin was in the range of 0．091 6～ 0．549 6 μg （r＝0．999 7）， 0．772 ～
3．86 μg （r＝0．999 4） and 0．670 5 ～ 4．023 μg （r＝0．999 7）， respectively， and their average recoveries were
102．96％ （sR＝1．62％）， 99．44％ （sR＝2．68％） and 97．34％ （sR＝1．88％） ． Conclusion The established method is
simple and fast for the determination of protocatechuic acid， catechin and epicatechin in Caulis Spatholobi，
which will supply reference for the quality control of Caulis Spatholobi．
Key words： Caulis Spatholobi ／ chemistry； Catechin ／ analysis； Fast liquid chromatography
Determination of Magnoflorine in Zanthoxylum dissitum Hemsl． by HPLC
WU Runjing， WANG Huan， ZHU Chenchen， LIN Chaozhan
（Institute of Clinical Pharmacology， Guangzhou University of Chinese Medicine， Guangzhou 510405 Guangdong， China）
Abstract： Objective To develop a practical method for content determination of magnoflorine in Zanthoxylum
dissitum Hemsl．， thus to provide evidence for the quality assessment of Z． dissitum． Methods The separation
and detection were carried out with high performance liquid chromatography （HPLC） on Kromasil C18 （ 4．6
mm ×250 mm， 5 μm） column． The mobile phase consisted of acetonitrile －0．1 mol ／ L sodium dihydrogen
phosphate solution （volume ratio being 11∶89）， the wavelength was set at 268nm， and the column temperature
was 25℃． Results The linear range of magnoflorine was 20－300 μg ／ mL， with the correlation coefficient being
0．999 9． The number of theoretical plates was higher than 25 000． Magnoflorine in the samples was stable and
could be detectable without interference． The resolution of consecutive peaks was higher than 1．5． The content of
magnoflorine in the samples was 0．74－6．61 mg ／ g， and the average content was 2．99 mg ／ g． The recovery was
above 97％ and the relative standard deviation （sR） was 0．81％． Conclusion The established method is simple，
accurate and reproducible， which can be used to control the quality of Z． dissitum．
Key words： Zanthoxylum dissitum Hemsl． ／ chemistry；
Magnoflorine ／ analysis； Chromatography， high performance liquid
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（Continued from page 442）
吴润菁， 等． 高压液相色谱法测定单面针中木兰花碱的含量第 3 期 447