全 文 :脑缺血后 ERS激活并可诱导 CHOP /Gadd153 等未折叠蛋白反应
(UPR)靶基因在缺血后表达,CHOP 可能通过下调 Bcl - 2 表达、
耗竭谷胱甘肽、促进活性氧族产生等,活化 Caspase - 3,最终导致
细胞凋亡[8]。CHOP基因敲除可增强细胞对抗 ERS 所致凋亡的
能力;相反,CHOP过度表达的细胞则对 ERS所致凋亡更为敏感。
已有研究在脑缺血再灌注动物模型中检测出 CHOP表达增加,说
明缺血诱导的神经细胞死亡与 CHOP有关[9 ~ 11]。提示脑缺血后
神经元丢失与 ERS密切相关,减轻 ERS将有助于神经元保护,但
迄今尚缺乏在体抑制 ERS的简单有效方法。
本研究发现,脑缺血 120min 再灌注 12 h 缺血侧顶叶皮层
CHOPmRNA表达达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降,再
灌注 72 h仍可见其高表达,其蛋白表达于再灌注 24 h达高峰,提
示大鼠缺血再灌注损伤诱发的 ERS可诱导 CHOP的表达。与相
关研究报道基本一致[9,10]。而 BIP 干预后其表达均有明显的下
降,提示 BIP可能通过影响 ERS 后 CHOP 的表达而抑制细胞凋
亡,从而保护神经细胞。而联合清热化淤方预处理后 CHOP的表
达和神经元凋亡进一步降低,提示清热化淤方和 BIP 通过抑制
ERS后 CHOP的表达产生抗凋亡机制。这些结果可能为 I /R 损
伤的治疗提供新靶点和新思路。其机理有待于进一步阐明。
参考文献:
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收稿日期:2011-07-16; 修订日期:2011-10-29
基金项目:国家自然科学基金青年基金(No. 31000142) ;
江苏省高校自然科学重大基础研究项目(No. 07KJA18017) ;
盐城师范学院自然科学研究项目(No. 09YCKL014)
作者简介:张华彬(1981-) ,男(汉族) ,江苏沛县人,现任盐城师范学院助
教,学士学位,主要从事天然药物的分析与研究工作.
* 通讯作者简介:丁 鸽(1981-) ,女(汉族) ,山东烟台人,现任盐城工学
院副教授,博士学位,主要从事药用植物成分分析与研究工作.
中华补血草的生药学研究
张华彬1,张代臻1,葛宝明1,周春霖1,唐伯平1,丁 鸽2*
(1.江苏省滩涂生物资源与环境保护重点建设实验室 盐城师范学院,江苏 盐城 224051;
2.盐城工学院化生学院,江苏 盐城 224051)
摘要:目的 为中华补血草的进一步开发利用提供理论依据。方法 通过对中华补血草植物鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理
化鉴定的方法对其植物形态,性状特征、根、茎、叶横切面组织构造、理化特征等进行鉴定研究。结果 根外层表皮细胞为
类长圆形细胞,内有厚角机械组织,茎外层表皮细胞呈长椭圆形,外被角质层,叶上下表皮有腺毛,具有泌盐结构盐腺,花
粉为灯笼状球形。结论 可作为中华补血草生药质量标准制定的依据。其鉴别特征可作为中华补血草的鉴定依据。
关键词:中华补血草; 生药学; 显微鉴定; 理化鉴定
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2011. 12. 008
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)12-2847-02
中华补血草 Limonium sinense 为蓝雪科(Plumbaginaceae)补
血草属(Limonium )多年生泌盐草本植物[1],喜生于盐渍化的低
洼湿地上,广泛分布于我国东北、华北等地区,尤以江苏省沿海滩
涂分布甚广。在江苏主要分布于苏北沿海的连云港、灌云、射阳、
东台、如东、南通等沿海地区的滩涂及盐碱湿地上[1,2]。中华补
血草既能药用,又可观赏,是江苏沿海分布的一种经济价值较高
的盐生植物资源。全草入药可起到清热解毒、止血散瘀、祛风消
炎、抗衰老和抗癌等功效[3,4],主治功能性子宫出血、尿血、痔疮
出血、脱肛、痈疽、月经不调、白带、子宫内膜炎和宫颈糜烂等。根
可治体弱、食欲不振,叶可治胃溃疡和胃癌,花枝可治功能性子宫
出血、宫颈癌及其他出血[5],作为新资源有着良好的药用研发前
景。大量临床和药理研究证明了中华补血草具有补血、止血功
效,同时初步探明了其作用机制[6]。中华补血草还用于制备抗
肿瘤药物[7],为了开发利用这一药用资源,作者采用生药学方法
对其进行研究,为其开发利用、质量标准的制定及生药学方面的
研究提供依据。
1 材料与仪器
1. 1 材料 2010 年采自江苏大丰麋鹿国家级自然保护区,经盐
城师范学院生命科学与技术学院于延球副教授鉴定为蓝雪科、补
血草属、中华补血草全草。
1. 2 仪器设备 MicrE400 Nikon 显微镜;QP -Ⅲ生物组织切片
机;薄层色谱用硅胶 GF254;柱色谱用硅胶;葡聚糖凝胶 Sephadex
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL . 22 NO. 12 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 12 期
- LH20;101 - 1A 型数显电热鼓风干燥箱;超声波清洗器
AS3120A;LC - 10Avp高效液相色谱仪(日本岛津) ,NICOLETFT
- IR50X型红外光谱仪;VG ZAB - HS 型质谱仪;Varian INOVA
500 型超导脉冲傅立叶变换核磁共振波谱仪,FEI Quanta 200 环
境扫描电子显微镜。
2 方法与结果
2. 1 方法 按生药学常规方法对中华补血草进行研究,采用植物
鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定的方法对中华补血草植物形
态,性状特征,根、茎、叶横切面组织构造、理化特征等进行了鉴定
研究。组织切片采用徒手切片的方法,按生药学研究常规方法
进行各种制片、观察和记述,组织、ESEM拍照。
2. 2 结果
2. 2. 1 形态及性状鉴定 多年生草本,高 20 ~ 80 cm。除花萼外
各部均无毛。根粗壮,少分枝。叶基生,全缘或羽状分裂;花承托
以鳞片状的苞片,排成聚伞花序;萼管状,干膜质,常有颜色,基部
具 10 棱;花瓣分离或于基部合生;雄蕊 5,着生于花瓣的基部;子
房上位,1 室,有悬垂的胚珠 1 颗,花柱 5,通常分离,柱头线状,稀
头状;果包藏于萼内,开裂或不开裂;蒴果倒卵圆形,黄褐色。中
华补血草具有耐盐、耐瘠、耐旱、耐湿等特点,可在滨海滩涂上生
长。中华补血草 3 ~ 4 月份出苗,6 月份始花,11 月份以后植株进
入休眠期。见图 1。
图 1 中华补血草植株 图 6 中华补血草盐腺结构
全草形态 (示基细胞和帽细胞,1000 ×)
2. 2. 2 显微鉴定
根横切面:根外层表皮细胞为类长圆形细胞,内有 5 - 7 层厚
角机械组织。厚角机械组织为薄壁细胞,内有分泌腔分布。根中
初生木质部为三原型,次生木质部分布在初生木质部外方,木质
部导管呈放射状排列,并在其中部分成二叉状。其维管束为外韧
维管束,维管形成层向内分裂产生大量次生木质部(内含导管、
木纤维、木薄壁细胞) ,向外产生少量木纤维和木薄壁细胞
(图 2)。
茎横切面:茎外层表皮细胞为 1 列,呈长椭圆形,外被角质
层。皮层窄,由 2 - 3 层较大的薄壁细胞组成,内皮层细胞呈方圆
形。韧皮部外侧有韧皮纤维,形成层明显。木质部主要有导管和
木纤维组成(图 3)。
图 2 中华补血草根 图 3 中华补血草茎
的横切面 ESEM图 的横切面 ESEM图
叶横切面:上下表皮均为 1 列细胞,外被角质层,有腺毛,细
胞呈长方形或类方形,排列紧密。栅栏组织在上表皮下方,一列,
栅栏组织和海绵组织分化明显。主脉维管束一个,外韧型;木质
部导管 4 ~ 5 列细胞径向排列,韧皮部外侧有韧皮纤维(图 4)。
叶的上、下表皮均为方形细胞组成,上表皮下方紧密排列着一层
栅栏细胞,内含叶绿体较多,下表皮上方与栅栏组织之间,均为排
列紧密的海绵细胞,内含叶绿体较少,在海绵组织中疏松地分散
着小型维管束,上、下表皮上均有角质层,但都无表皮毛。下表
皮气孔密度大,0. 226 mm2 的下表皮中具有气孔 50 ~ 56 个(图
5)。在叶的上、下表皮细胞中均分布着花朵形的泌盐结构 -盐
腺(图 6)。盐腺由 4 个基细胞和 4 个帽细胞组成,每个帽细胞上
有一个泌盐孔。盐腺数量上表皮少、下表皮多。
图 4 中华补血草叶 图 5 中华补血草叶
的横切面 ESEM图 表面气孔 ESEM图
花粉特征:中华补血草花粉为灯笼状球形,直径为 55 ~ 59 μm,表面
纹饰为较规则的蜂巢状,网眼较大,为五边形或六边形,网脊平直,网脊上
具有疣状突起(图 7)。
图 7 中华补血草花粉 ESEM图(右为单个花粉粒放大图)
2. 2. 3 理化鉴定 取中华补血草全草 20g,粉碎至粗粉,用 75%
的乙醇溶液加热回流提取 3 次,每次 2. 5 h;过滤,合并滤液,减
压浓缩回收溶剂至无醇味后,以石油醚去除浓缩物中的叶绿素。
分别用与浓缩液等量的氯仿、醋酸乙酯、正丁醇各萃取浓缩物 3
次,回收溶剂得各部分萃取物,分别合并萃取物,得氯仿部、醋
酸乙酯部、正丁醇部和水部。从萃取物中分离得到各种黄酮体和
杨梅树皮苷、鼠李葡萄糖苷、异鼠李素、杨梅树皮素甲醚、四羟基
黄酮等。经过分离纯化,根据理化常数测定及波谱分析对分离得
到的化合物进行结构鉴定,得到 11 个化合物,分别鉴定为槲皮
素、槲皮素 3 - O - β - D -葡萄糖苷、甘露醇、山柰酚、山柰酚 - 3
- O - α - L -吡喃鼠李糖苷、儿茶素、异鼠李素、异鼠李素 - 3 -
芸香糖苷、齐墩果酸、β -谷甾醇、没食子酸乙酯。
3 讨论
通过对中华补血草植物鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定
的方法对中华补血草植物形态,性状特征、根、茎、叶横切面组织构
造、理化特征等进行了鉴定研究,以上显微特征为中华补血草的鉴
定提供了依据。其花粉特征和表面纹饰具有特定的鉴别意义。
本次实验结果图片清晰,数据准确,为中华补血草的开发利
用、质量标准的制定等方面的深入研究提供了理论依据。
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