全 文 ：HPLC法测定瑞香狼毒中香豆素类三种成分含量
胡 爽， 郭晏华﹡
(辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600)
收稿日期:2010-03-23
作者简介:胡 爽(1985 －)，女，硕士生，研究方向:中药制剂分析。E-mail:hushuang317072@ yahoo. com
* 通讯作者:郭晏华，女，副教授，硕士生导师。Tel : (0411)87586007 E-mail:guoyanhualnu@ sina. com
关键词:HPLC;瑞香狼毒;瑞香素;伞形花内酯;东莨菪内酯
摘要:目的:建立 RP-HPLC法同时测定中药瑞香狼毒中三种香豆素类成分瑞香素，伞形花内酯，东莨菪内酯的含量测定
方法。方法:采用反相高效液相色谱法，选用 AgiLent EcLipse XDB-C18(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)色谱柱;流动相为乙腈
(A)-1%冰乙酸(B)，进行梯度洗脱;检测波长为:327 nm;流速:1. 0 mL /min;柱温:30 ℃。结果:瑞香素平均回收率为
98. 07%，RSD为 1. 88%;伞形花内酯平均回收率为 98. 82%，RSD为 1. 98%;东莨菪内酯平均回收率为 97. 42%，RSD为
2. 37%。结论:本法灵敏度高，重现性好，可用于中药瑞香狼毒的质量控制。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2011)03-0530-03
瑞香狼毒为瑞香科植物瑞香狼毒 Stellera chamejasme L.
的干燥根，又名断肠草、红狼毒、山萝卜等。其味辛，性平，有
一定毒性。入肺、脾、肝经。具有逐水、破积、祛痰、杀虫、止
痛的功能［1］。广泛分布于我国西北、西南、东北及河北等地，
资源十分丰富［2］。其主要化学成分有黄酮类、香豆素类、二
萜类、三萜类、木脂素类和苯丙烯酸醇苷类等［3-5］。其中香豆
素类化合物是瑞香科植物的特征性成分，且大多具有较强生
物活性，在瑞香狼毒根中的含量高达 0. 355%［6］。目前，关
于瑞香狼毒的文献报道多是毒理、药理和化学成分的研
究［7-10］，有关于其含量测定方面的文献报道较少。本实验同
时测定了瑞香狼毒药材中 3 种指标性成分的含量，之前尚未
见相关文献报道，且该方法快捷、准确，可作为瑞香狼毒药材
质量控制的方法。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Agilent 1100 型高效液相色谱仪，配置四元梯度
泵、在线脱气机、VWD检测器;METTLER AB135-S 十万分之
一电子天平(瑞士);SHIMADZU AY220 型电子分析天平;U-
3010 型紫外-可见分光光度计;HH-4 数显恒温水浴锅。
1. 2 试药 瑞香素对照品由成都普思生物科技有限公司提
供，伞形花内酯对照品(批号:111739-200501)，东莨菪内酯
对照品(批号:110768-200504)均购于中国药品生物制品检
定所。本研究收集了 10 个不同来源的瑞香狼毒药材，经辽
宁中医药大学王冰教授鉴定均为正品药材。乙腈、甲醇为色
谱纯，水为重蒸馏水。其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:AgiLent EcLipse XDB-C18(4. 6 mm
× 150 mm，5 μm);流动相:乙腈(A)-1%冰乙酸(B)，梯度洗
脱;检测波长:327 nm;流速:1. 0 mL /min;柱温:30 ℃;进样
量:10 μL。见表 1。
表 1 流动相梯度洗脱程序
时间 /min 乙腈 /% 1%冰乙酸 /%
0
10
20
30
9
12
13
21
91
88
87
79
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取瑞香素，伞形花内酯，东
莨菪内酯对照品适量，分别置于 10 mL棕色量瓶中加甲醇溶
解，制得浓度分别为 0. 221 mg /mL、0. 304 mg /mL、0. 262 mg /
mL的对照品贮备液，备用。精密吸取瑞香素对照品贮备液
0. 5 mL，伞形花内酯对照品贮备液 5 mL，东莨菪内酯对照品
贮备液 0. 3 mL置同一棕色 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，制得对照品混合液。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称取瑞香狼毒药材(过 60 目
筛)约 3. 0 g，加入 95%乙醇 50 mL，加热回流 3 次每次 1 h，
过滤，浓缩。用 95%乙醇定容至 10 mL 的量瓶中，摇匀，经
0. 45 μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液，备用。
2. 4 系统适用性试验 精密吸取混合对照品溶液、供试品
溶液各 10 μL，注入 HPLC 色谱仪，记录色谱图，在选定的色
谱条件下瑞香素，伞形花内酯和东莨菪内酯的理论塔板数均
不少于 10 000，与其他峰的分离度均大于 1. 5。见图 1。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 标准曲线的制备 精密吸取 2. 2 项下的混合对照品
溶液 2、4、6、10、15、20 μL注入高效液相色谱仪，测定。以进
样量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得瑞香素回
归方程为:Y = 143X － 96. 973，r = 0. 999 7;伞形花内酯回归
方程为:Y = 2 095X － 1 235. 3，r = 0. 999 6;东莨菪内酯回归
方程为:Y = 109. 6X － 89. 44，r = 0. 999 6;结果表明，各对照品
在各自的线性范围内呈良好的线性关系。
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
March 2011
Vol. 33 No. 3
AB
图 1 混合对照品(A)和样品(B)HPLC谱图
1.瑞香素 2.伞形花内酯 3.东莨菪内酯
2. 5. 2 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液(7 号内蒙
古)连续进样 6 次，记录色谱峰面积，结果瑞香素、伞形花内
酯和东莨菪内酯峰面积的 RSD 值分别为 0. 4%、0. 7%和
0. 3%。结果表明，本试验仪器的精密度良好。
2. 5. 3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液(7 号内蒙
古)在 0、2、4、8、12、24 h分别进样分析，记录色谱峰面积，结
果瑞香素，伞形花内酯和东莨菪内酯峰面积的 RSD 值分别
为 1. 7%、1. 8%和 2. 0%。结果表明，供试品溶液在室温状
态下 24 h内稳定。
2. 5. 4 重复性试验 取同一批瑞香狼毒药材(7 号内蒙古)
样品 6 份，按 2. 3 项方法制备供试品溶液，并进样分析，记录
色谱峰面积，结果瑞香素、伞形花内酯和东莨菪内酯峰面积
的 RSD值分别为 2. 3%、2. 2%和 2. 1%。结果表明，本方法
重复性较好。
2. 5. 5 回收率试验 取已知含量的药材(7 号内蒙古)6 份，
每份约 1. 5 g(瑞香素含量 0. 034 4 mg /g，伞形花内酯含量
0. 471 7 mg /g，东莨菪内酯含量 0. 026 1 mg /g)精密称定，置
圆底烧瓶中，每份精密加入瑞香素对照品 2. 5 mL(浓度为
0. 022 1 mg /mL)、伞形花内酯 2. 5 mL(浓度为 0. 304 mg /
mL)和东莨菪内酯 1. 6 mL(浓度为 0. 026 2 mg /mL)，按 2. 3
项方法制备供试品溶液，测定，结果见表 2 ～ 4。
2. 6 瑞香狼毒药材中瑞香素，伞形花内酯和东莨菪内酯的
含量测定 取不同来源的瑞香狼毒药材粉末(过 60 目筛)
各约 3. 0 g，精密称定，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，精
密吸取各溶液 10 μL，按 2. 1 项下色谱条件注入高效液相色
谱仪进行分析，记录峰面积并计算瑞香素、伞形花内酯和东
莨菪内酯的含量，结果见表 5。
表 2 瑞香素加样回收试验结果(n =6)
取样量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1. 573 2
1. 560 8
1. 543 3
1. 542 7
1. 554 6
1. 543 0
0. 054 1
0. 053 7
0. 053 1
0. 053 0
0. 053 4
0. 054 1
0. 055 3
0. 055 3
0. 053 3
0. 053 3
0. 053 3
0. 053 3
0. 107 5
0. 107 7
0. 109 0
0. 108 0
0. 107 2
0. 107 4
96. 56
97. 65
101. 08
99. 46
97. 29
96. 38
98. 07 1. 88
表 3 伞形花内酯加样回收试验结果(n =6)
取样量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1. 573 2
1. 560 8
1. 543 3
1. 542 7
1. 554 6
1. 543 0
0. 742 1
0. 736 2
0. 728 0
0. 727 7
0. 733 3
0. 727 8
0. 760 0
0. 760 0
0. 760 0
0. 760 0
0. 760 0
0. 760 0
1. 492 7
1. 459 5
1. 491 3
1. 479 0
1. 497 3
1. 476 9
99. 36
95. 17
100. 43
98. 86
100. 53
98. 57
98. 82 1. 98
表 4 东莨菪内酯加样回收试验结果(n =6)
取样量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1. 573 2
1. 560 8
1. 543 3
1. 542 7
1. 554 6
1. 543 0
0. 041 1
0. 040 8
0. 040 3
0. 040 3
0. 040 6
0. 040 3
0. 041 9
0. 041 9
0. 041 9
0. 041 9
0. 041 9
0. 041 9
0. 083 6
0. 081 1
0. 080 3
0. 081 6
0. 080 6
0. 081 1
101. 43
96. 18
95. 47
98. 57
95. 47
97. 37
97. 42 2. 37
表 5 样品测定结果(n =3)
样品号 来源地
瑞香素
/(mg /g)
伞形花内
酯 /(mg /g)
东莨菪内
酯 /(mg /g)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
安国
河南
吉林
北京
西宁
兰州
内蒙古
石家庄
长春
沈阳
0. 010 8
0. 008 4
0. 009 3
0. 033 4
0. 009 1
0. 010 2
0. 027 6
0. 011 2
0. 009 9
0. 029 1
0. 525 0
0. 364 4
0. 543 8
0. 610 4
0. 923 7
0. 835 7
0. 451 2
0. 525 7
0. 548 7
0. 448 8
0. 026 1
0. 012 0
0. 029 3
0. 034 6
0. 031 0
0. 029 6
0. 025 1
0. 027 0
0. 030 0
0. 025 8
3 讨论
3. 1 从表 5 可以看出 10 个不同来源的瑞香狼毒药材 3 种
指标性成分含量差别很大，其中伞形花内酯的含量最高，从
0. 364 4 ～ 0. 923 7 mg /g;东莨菪内酯的含量次之，从 0. 012 0
～ 0. 034 6 mg /g;瑞香素的含量最低，从 0. 008 4 ～ 0. 034 4
mg /g。根据文献报道，瑞香素具有抗血栓、降脂、镇痛、抗炎、
提高免疫，抗菌等多种作用［11］。伞形花内酯、东莨菪内酯均
具有抑菌，抗癌的作用。因此对瑞香狼毒中该 3 种成分进行
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含量测定，对其质量控制具有重要的意义。
3. 2 检测波长的选择 根据紫外吸收光谱特征，瑞香素、伞
形花内酯皆在 327 nm 有最大吸收［12-13］，东莨菪内酯在 340
nm有最大吸收［14］。由于东莨菪内酯在 327 nm 和 347 nm
的紫外吸收光谱图差异较小，为兼顾 3 种成分在同一色谱图
上有最大吸收，最终选择检测波长为 327 nm。
3. 3 流动相系统的选择 分别以甲醇-水、乙腈-水、乙腈-
1%冰乙酸和乙腈-0. 05%磷酸溶液等不同浓度和比例的流
动相系统进行梯度洗脱实验，通过比较不同流动相系统的色
谱图，为使谱图上待测成分的分离度较好，最终确定以乙腈
(A)-1%冰乙酸(B)为流动相进行梯度洗脱。
3. 4 提取条件的选择 本实验通过单因素考察，比较了超
声提取法、加热回流提取法和索氏提取法的提取效果，并同
时比较了不同溶剂甲醇和乙醇的提取效果，并通过正交设计
实验考察了提取时间、提取次数、醇浓度和溶剂用量对提取
效果的影响。最终选定以 95%乙醇、50 mL、加热回流 3 次
每次 1 h提取效果最好。
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菊叶中多糖的含量测定方法研究
卫 强， 孙晓燕
(安徽新华学院 药学院，安徽 合肥 230088)
收稿日期:2010-02-18
基金项目:安徽新华学院校级自然项目《四叶咀嚼片的处方、工艺和药效学研究》(2009zr007)
作者简介:卫 强(1977 －)，男，硕士，讲师，从事天然药化教学与科研工作，Tel:(0551)5381618 E-mail:weiqiang509@ sina. com
关键词:菊叶;多糖;含量测定
摘要:目的:研究提取菊叶中多糖的工艺，并建立菊叶中多糖的含量测定方法。方法:依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、
95%乙醇、50%乙醇进行除杂，后分别用超声提取法和水浴回流提取法提取多糖，并对多糖进行脱色、脱蛋白处理，90%
乙醇醇沉后抽滤、干燥得精制多糖。以紫外可见分光光度法检测多糖含量。结果:超声提取和水浴回流提取所得多糖平
均含量分别为 5. 52%，7. 66%，平均加样回收率为 96. 32%。结论:菊叶中多糖含量较高，含量测定方法稳定、重现性较
好。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2011)03-0532-03
随着中草药资源的深入研究，对药材有效部位的开发已
经呈现较好的应用前景，如益心酮片来源于山楂叶，七叶神
安片来自三七叶［1］。国内外研究了菊花中总黄酮、黄酮苷、
挥发油和微量元素等有效成分的提取分离及应用［2-7］，对菊
叶的研究文献较少。菊叶是菊的有效应用部位，其化学成分
与菊花相似。菊叶资源蕴藏量十分丰富，如贡菊和杭菊年产
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
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