全 文 ：山黄皮果实中黄酮类物质的抑菌活性研究
韦方立，梁云贞* ，黄秋婵 (广西民族师范学院化学与生物工程系，广西崇左 532200)
摘要 ［目的］提取山黄皮［Clausena indica(Datz)． Oliv．］果实中的黄酮类物质，并研究其抑菌活性。［方法］采用微波辅助提取山黄皮
果实中的黄酮类物质;采用滤纸片扩散法和 LB培养基的二倍稀释法对山黄皮果黄酮类物质的抑菌活性进行测定。［结果］提取的山黄
皮果实中的黄酮类物质经浓缩后浓度为 162． 298 5 mg /ml。山黄皮果实中的黄酮类物质对金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureus)、枯草
芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和大肠杆菌(Escherichia coli)均有较好的抑制作用，其最小抑菌浓度(MIC)依次为 20． 29、40． 58、81． 15 mg /ml，
但对毛霉(Mucor)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的抑制作用不明显。［结论］该研究可以为进一步探寻、开发山黄皮资源，生产出
新的、安全、高效的生物防腐剂提供理论依据。
关键词 山黄皮果实;黄酮类物质;抑菌作用
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)26 －15932 －02
Study on Antimicrobial Effect of the Flavonoids in Clausena indica (Datz)． Oliv． Fruits
WEI Fang-li et al (Department of Chemical and Biological Engineering，Guangxi Normal University for Nationalities，Chongzuo，Guangxi
532200)
Abstract ［Objective］To extract the flavonoids from Clausena indica (Datz)． Oliv． fruits and study their antimicrobial activities．［Method］The
microwave － assisted method was used to extract the flavonoids，whose antimicrobial activities were determined by filter paper diffusion method and
LB medium double dilution method．［Result］The concentration of concentrated flavonoids extracted from Clausena indica (Datz)． Oliv． fruits was
162． 298 5 mg /ml，and the flavonoids had good antimicrobial effects against Staphylococcu saureus，Bacillus subtilis and Escherichia coli with the
MIC of 20． 29，40． 58 and 81． 15 mg /ml，but the antimicrobial effect against Mucor and Saccharomyces cerevisiae was not obvious．［Conclusion］
The study provided theoretical basis for further exploring and developing Clausena indica (Datz)． Oliv． resources and producing new，safe and
high-efficient biopreservatives．
Key words Clausena indica (Datz)． Oliv． fruits;Flavonoids;Antimicrobial effect
基金项目 广西教育厅自然科学基金项目(201010LX558) ;广西民族师
范学院自然科学基金项目(XYYB2010004)。
作者简介 韦方立(1970 － ) ，男，广西崇左人，讲师，硕士，从事发酵工
程的教学与科研工作，E-mail:327722571 @ qq． com。* 通迅
作者，副教授，从事生物化学的教学与科研工作，E-mail:
245514034@ qq． com。
收稿日期 2011-05-17
山黄皮［Clausena indica (Datz)． Oliv．］俗称鸡皮果，是芸
香科柑橘亚科黄皮属多年生常绿小乔木，主要分布于北回归
线以南的南亚热带地区。在中国，与越南北部接壤的广西崇
左市龙州县、大新县是广西山黄皮的主要产区［1］。山黄皮果
实为浆果，可食，具有爽口的酸甜味及独特的香气，含有丰富
的维生素、氨基酸以及钙铁等各种营养物质，具有祛痰化气、
消积消滞和健脾胃等药效。常见的山黄皮果实制品是山黄
皮果酱和山黄皮干［2 －3］。以山黄皮果实与番茄本身的色素
制成的复合果丹皮是消食去腻、防治心血管疾病的保健食
品［4］。黄酮类化合物主要是一些黄酮的衍生物，具有抑菌或
杀菌作用，其低浓度抑菌，高浓度杀菌［5］。笔者通过研究山
黄皮果实中黄酮类物质对常见致病菌的抑制作用，进一步探
寻、开发山黄皮资源，以期为开发新的安全高效的生物防腐
剂提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 山黄皮果实。摘自广西西南部石头山上的山黄皮
树上。
1． 1． 2 菌种。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌
(Escheichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcu saureus)、毛
霉(Mucor)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
1． 1． 3 培养基。
1． 1． 3． 1 LB液体培养基(细菌用)。胰蛋白胨 10 g /L，酵母
提取物 5 g /L，NaCl 10 g /L，pH7． 2 ～7． 4。
1． 1． 3． 2 LB固体培养基(细菌用)。胰蛋白胨 10 g /L，酵母
提取物 5 g /L，NaCl 10 g /L，琼脂 20 g /L，pH 7． 2 ～7． 4。
1． 3． 3． 3 察氏培养基(霉菌用)。NaN03 3． 00 g /L，KCl 0． 50
g /L，K2PO4 1． 00 g /L，FeSO4 0． 01 g /L，MgSO40． 05 g /L，蔗糖
30． 00 g /L，琼脂 20． 00 g /L，pH自然。
1． 1． 3． 4 麦汁培养基(酵母用)。蛋白胨 10 g /L，酵母膏
10 g /L，葡萄糖 20 g /L，琼脂 20 g /L，pH自然。
1． 1． 4 主要仪器。超净工作台，由苏州净化设备有限公司
生产;LDZX-40型立式电热压力蒸汽灭菌器，由上海申安医
疗器械厂生产;GNP-9270型隔水式恒温培养箱，由上海精宏
实验设备有限公司生产;SPH-211B恒温培养振荡器，由上海
世平实验设备有限公司生产;紫外 /可见分光光度计，由美国
珀金埃尔默公司生产;真空浓缩系统，由 Eppendorf公司生产。
1． 2 方法
1． 2． 1 黄酮类物质的制备。采用微波辅助提取山黄皮果中
的黄酮类物质［6］，经浓缩后测定浓度为162． 298 5 mg /ml。
1． 2． 2 培养基平板的制备。将配制好的各种菌种培养基湿
热灭菌(121 ℃，灭菌 20 min)后，冷却至 50 ～60 ℃，在无菌操
作条件下，将加入琼脂的培养基注于无菌培养皿内，每个培
养皿注入 15 ～20 ml，放平至培养基凝固，备用。
1． 2． 3 供试菌株的活化。在超净工作台上，将枯草芽孢杆
菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种于 LB 固体培养基
平板，置于 37 ℃恒温培养箱培养 24 h;将毛霉接种于察氏培
养基，置于 28 ℃恒温培养箱培养 48 h;将酿酒酵母接种于麦
汁培养基，置于 30 ℃恒温培养箱培养 24 h。最后均于 0 ～ 4
℃冰箱冷藏，备用。
1． 2． 4 菌悬液的制备。在无菌操作条件下，取活化培养好
的菌株，用接种环分别挑取少量细菌、霉菌孢子和酵母菌体，
分别接入 9 ml无菌水中，摇匀，配制成孢子和菌体悬浮液，使
责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(26):15932 － 15933
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.26.213
菌悬液中的细菌数约为 1 × 108 个 /ml，霉菌孢子、酵母菌数
约为 1 ×106 个 /ml。
1． 2． 5 黄酮类物质的抑菌活性。采用滤纸片法测定。用打
孔器将定性滤纸打成直径 6 mm的小圆片，分别置于洁净干
燥的小培养皿内进行灭菌、烘干，分别浸入已制备的黄酮类
物质提取液和无菌水中浸泡 12 h，备用。在无菌条件下，分
别取 100 μl各种菌悬液，加入相对应的培养基平板中，涂布
均匀，备用。每只含菌平板上间隔一定距离贴 3 片滤纸片，
其中 2片浸有已制备的黄酮类物质提取液作为处理，1 片浸
有无菌水片作对照，并作标记。最后将贴好 3片滤纸片的平
板置于恒温培养箱中培养。其中，细菌置于 37 ℃恒温培养
箱内培养 24 h，毛霉在 28 ℃下培养48 h，酵母菌在 30 ℃下培
养 24 h，之后测量抑菌圈直径。每种菌作 3个重复。
1． 2． 6 黄酮类物质最低抑菌浓度(MIC)的测定。在无菌条
件下，采用二倍稀释法，用 LB培养基将已制备的黄酮类物质
稀释到 1． 5 ml离心管中，液体总量为 1． 0 ml，使各管黄酮类
物质的浓度分别为 1． 27、2． 54、5． 07、10． 14、20． 29、40． 58、
81． 15 mg /ml;然后用消毒牙签分别挑取少量枯草芽孢杆菌、
大肠杆菌和金黄色葡萄球菌接种于各个离心管中，将培养
物置于 37 ℃、200 r /min的恒温摇床培养 24 h，观察各类细菌
的生长情况，以无细菌生长的最低浓度为 MIC。
2 结果与分析
2． 1 山黄皮果实中黄酮类物质的抑菌活性 由表 1 可知，
山黄皮果实中黄酮类物质具有抑菌作用。其中，对细菌生长
有较好的抑制作用，特别是对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆
菌抑制效果更佳，但对毛霉和酿酒酵母的抑制效果不明显。
表 1 山黄皮果实中黄酮类物质对试验菌的抑制效果
Table 1 Antimicrobial effect of flavonoids in Clausena indica fruits to the tested microorganisms
处理及对照
抑菌圈直径 Inhibition zone diameter∥mm
金黄色葡萄球菌
S． aureus
枯草芽孢杆菌
B． subtilis
大肠杆菌
E． coli
毛霉
Mucor
酿酒酵母
S． cerevisiae
处理 15． 3 11． 6 8． 4 + +
对照 － － － － －
注:－表示无抑菌圈，+表示抑菌圈不明显。
Note:－ means without inhibition zone，+ indicates that the inhibition zone is not obvious．
2． 2 山黄皮果实中黄酮类物质的 MIC 由表 2 可知，山黄
皮果实中黄酮类物质对金黄色葡萄球菌的 MIC 为
20． 29 mg /ml，对枯草芽孢杆菌的 MIC 为 40． 58 mg /ml，对大
肠杆菌的 MIC为 81． 15 mg /ml。
表 2 不同浓度的山黄皮果实中黄酮类物质对微生物的最小抑制浓度
Table 2 MIC of different concentrations of flavonoids in Clausena in-
dica (Datz)． Oliv． fruits against the microorganisms
黄酮类物质浓度
Concentration
of flavonoids∥mg /ml
细菌生长情况 Growth status of microorganisms
金黄色葡萄球菌
S． aureus
枯草芽孢杆菌
B． subtilis
大肠杆菌
E． coli
81． 15 － － －
40． 58 － － +
20． 29 － + +
10． 14 + + +
5． 07 + + +
2． 54 + + +
1． 27 + + +
注:－表示无菌生长，+表示有菌生长。
Note:－ ． Without microorganism growth，+ ． With microorganism growth．
由表 1、2可知，山黄皮果实中黄酮类物质对金黄色葡萄
球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌有明显的抑制效果，作用大
小依次为:金黄色葡萄球菌 ＞枯草芽孢杆菌 ＞大肠杆菌，特
别但对毛霉和酿酒酵母的抑制作用不明显。
3 结论
研究表明，食品中含有金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌
和大肠杆菌时会引起食物腐败和食物中毒［7］。因此，山黄皮
为广西桂西南一带特产的水果类植物，微波辅助提取山黄皮
果所得的黄酮类物质，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和
大肠杆菌等病原细菌有较强的抑制活性。山黄皮果实中的
黄酮类物质不失为一种理想的抗菌抑菌添加剂，其用来作天
然食品防腐剂具有广阔前景。
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3395139 卷 26 期 韦方立等 山黄皮果实中黄酮类物质的抑菌活性研究