全 文 ：二勿 ! 大学学报 (自然朴学版 )
2 2 ( 2); 7 6一 S D, 198 6
山薰豆毒素一B O A A 纸层析扫描测定
李志孝 蔡文涛 陈耀祖
摘 要
本文建立 了江, 父豆寻素 BO A A的纸层 析扫描 浏定 的方洪 . 与纸层析分光尤度法相比本法操作 简
便 , 快速 . 分析结果与分 光光度相 同 .
同时本实经叶显色剂 、 显色条件做了改进 . 该法 平均回 收率为 9 6 . 6肠 .
引 言
为了配合低毒山熬豆品种的筛选 , 我们开展了山熬豆毒素的分析研究 . 山熬豆毒素
日一草酞氨琴丙氨酸 (日一 N一 o x a ly l一 a m i n o 一 a l a n i n e ) (简称 B O A A ) 的分析测定 . 以
前采用纸层析一分光光度法迸行 t` ’ 2 ’ . 由于分光光度法进行定量时 需 将 层 析 显 色 后
的斑点先进行剪洗 , 然后再比色测定 . 操作手续繁琐 , 影响因素多 , 稍有差异将影响该
方法的准确度和重复性 .
本方法在纸层析后 , 对斑点直接于扫描仪上进行扫描测定 . 实验证 明 : 标准曲线在
0 一 12 微 克范围内是一条通过原点的直线 。
实 验 部 分
一 、 仪器 试剂及操作条件
1
. 仪 器
( 1 ) 岛津 C S一 91 0型双波长薄层扫描仪 .
测定方法 : 反射法锯齿扫描 。
扫描速度与纸速 : 20 毫米 /分 .
狭缝 : 1 . 25 厘米 x 1 . 25 厘米 .
灵敏度 欠 2
测定波长 : 入S 二 5 9 o n m .
参比波长 : 入T = 7 0 0 n m .
线性参数 : S X = 3
( 2 ) 层析缸 : 高 30 厘米 , 直径 12 厘米 .
( 3 ) 微量注射器 : 10 微升 、 50 微升 .
2
. 试 剂
本丈 19 8 5午 4 月 1孕日收到 ,
DOI : 10. 13885 /j . i ssn. 0455 -2059. 1986. 02. 015
第二期 山熬豆毒素一B O A A纸层析扫描测定
( 1 )新华层析滤纸
( 2 )展开剂 : 苯酚 : 水 =4 : 1(体积比 )
( 3 )二氯化锡一布三酮溶液 〔 “ ’ : 取 0. 5克精制后的布三可吐和 50毫克 Sn C I: .2 11: O
溶于 0 5毫升 乙二醇单甲醚中 , 再加入 I N的 N a O H 2 . 5毫升 , ZN 的醋酸 25 毫升 , 使乒}l前新
鲜配制 。
( 4 ) 标准 B O A A 溶液 A : 每毫升含B O A A Z毫克的 10 %异丙醇的水溶液 .
( 5 ) 标准 B O A A 溶液 B : 每毫升含 B O A A O . 2毫克的 10 %异丙醇的水溶 液 ( 即 何
微升 0 . 2微克 ) . B O A A 从山薰豆中提取 `们 .
二 、 标准曲线的制备及样品的测定
称 1克山蒸豆粉于 1 50 毫升锥形瓶中 , 加入 1 0 奄升 75 % 的乙碎充分摇荡汉泡 过 夜 ,
取 50 毫升滤液在水浴上蒸干 , 加入 10 %异丙醇水洛液 5 m l将残留物充分溶解 , 取部分溶
液过滤于一小锥形瓶中备用 .
用微量注射器分别取 1 0 、 20 、 30 、 4 0 、 50 及 60 微升标准 B O A A 溶液 B及上述制备的
样品液 30 微升在同一张层析滤纸 ( 1 5 x 2 5厘米 ) 距边缘 2 厘米处点样 (每个样平行点三
个 ) , 边点样边吹干 . 点样后的层析纸倦成简 状放入层析缸中用上行法展 开 , 距 纸 缘
0
,
5厘米处时 , 取出滤纸吹干 , 然后于 10 0℃干燥 15 分钟 , 均匀喷洒新配制的二抓化锡一
苟三酮试剂后 , 在 1 0 ℃显色 30 色分钟 . 最后在 岛津 C S一 9 10 型双波长扫描仪上进行扫描
(见图 1) 测定 。 以积分值为纵座标 , B O A A 的微克数为横坐标 , 作标准曲线 (见 图 2 ) .
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图 1 B O A A 标样扫才苗图 图 2 标准曲线 B O A A合童
根据样品液的积分位 , 在标准曲线土查出相应的 B O A A 的微克数 . 按下式计算样品
中 B O A A 的含量 。
山然豆中 B O A A 的百分含量 二 A x C
B x D x 1 0
A = 在标准曲线上样品积分值所对应的 B O A A 的微克数 。
兰 州 大 学 学 报 1 9 8 6年 6 jJ
B = 点样用提取浪的微升数 .
C = 样品提取液总压 (毫升 ) 。 :
D = 称取山然豆的克数。
三 、 回收率的测定
称黄豆粉 1克 (不含 B O A A ) 于 1 50 毫升锥形瓶中 , 加已知童的标准 B O A A溶 液 A
(以下操作同样品的测定 ) . 待扫描后 , 由所得积分值查标准曲线 , 求出相应的 B O A A
含量 , 计算回收率 (见表一 ) .
表一 回收率的测定
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回 收
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值 (协g )
率 ( % )
值 ( % )
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。
5 9 6
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3
结 果 与 讨 论
一 、 实验证明 : 在该法的操作中样点的大小 , 层析后斑点的高低以及层析滤纸 的不
均匀性以及展开剂是否除尽 , 显色剂喷洒是否均 匀 , 显色时间 , 温度是否一 致 等 均 对
该法的精密度及重复性有影响 , 因此标准曲线和样品的测定操作除在同一张层析纸上进
行外 , 每次操作条件应尽可能保持一致 。
二 、 实验发现采用布三酮一二氯化锡显色剂于 1 0 ℃ 加热显色 30 分钟后 , 颜色在两
小时内稳定不变 (见图 3 ) .
三 、 扫描法与分光光度法的比较 : 分别用扫描法及分光光度法对样品进行了 B O A A
的 ,平行测定 (见表二 ) . 由表二看出 , 两法结果基本相同 . 但扫描法的精密度比分光光
度法要好 。 从操作上来看 , 扫描法要快速简便 .
积分值
(小 6分)
图 3 S o 1C 2一布三酮在 10 0℃显 色30 分钟后颜 色的变化情况
第二期 山煞豆毒素一 B O A A纸层析扫描测定 7 9
肠 . . . . . . . . . .曰 .口 ~
- -表二 扫描法与分光光度法结果 比较
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四 、 用扫描法对部分山致豆样品 .中 B O A A的测定结果 ` ( 见表三 )
表三 部分样品中B O A A含盘的测定
B O A A 虽编
1 9 8 2 年 播 种 进
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1 9 8 3 年 收 获 后 1 9 8 4 年 收 获 后l一
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致谢 ; 本工作得到兰 州大学分析刚试中心薄层组的苏 .1台兵 , 崔建军二 同志的大 力支
持和协助 , 衣示感谢 。
8 0兰 州 大 学 学 报 1 9 8
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参 考 资
〔 1 」 V . N a g a r a j a n , a n d V 。 5 . M o h a n ,
〔 2 〕
〔 3 」
〔 4 〕
1 0 1 1一 1 0 1 4 。
兰州大学化学系等 . 兰州大学学报 (自然科学版 ) , 2 , ( 1 9 7 5 )
柴 田村治 、 寺田喜久雄 , 纸色谱法及其应用 (增订版 ) 1 9 7 8
蔡文涛 、 李志孝 、 陈耀祖 , 兰州大学学报自 (然科学版 ) , 20 , 79 一 85 ,
( 1 9 8 4 )
P a p e r C h r o m a t o g r a p h y w i t h S e a n n e r f o r D e t e r m i n
-
a t i o n o f B O A A o f L a t h y r u s S a t i v u s
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A b s t r a e t
A P a P e r e h r o m a t o g r a P h y w i t h s e a n e r f o r d e t e r m i n a t i o n o f B O A A
, a
n e u r o t o x i n , i n t h e s e e d s o f L a t h y r u s S a t i v u s
, 15 d e s e r i b e d
.
T h e m e t h o d
15 s im p l e r a n d f a s t e r i n m a n ip u l a t i o n t h a n C h r o m a t o g r a p h y一 S p e e t r o p h o -
t o m e t r y p r e v i o u s l y r e p o r t e d
。
T h e o p t im u m e o n d i t i o n o f e o l o r d e v e l o p i n g
h a s b e e n s t u d i e d
。
T h e r e e o v e r y o f t h i s m e t h o d 15 9 6
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6 P e r e e n t
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己夕己 Z宁己嘴 、己而、魂洲公己夕 之石、
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x : H p in 型发光器件的研制
品态 G .a P · A s 化合物发光二极管已广泛用于 电子工业 , 但成本较高 , 最近我们 已
用廉价的非 品态材料研制出一种新 的 P 十协c 一 iS : H / p n 一 in a/ 一 iS , _ x C x : H / n + 件。 一 iS : H 多
层结构电注入发光器件 , 在室温下用肉眼直接观察到了蓝白色的电注 入 发光’ ( E L ) ,
这在国内外还是第一次 . E L 的光谱分布和峰值可以通过改变 n 一 i 一 a 一 iS , _ x C :x H 层的碳
原子含量来调整 . E L总强度与正向注入电流之间遵从指数规律 L co l ” , 电流电压特性具
有空间电荷限制 I二 V p 在室温下测得 n ) 2 , p ~ 7 . 当正向注入电流等于 50 m A 时 , 器
件的 发光度接近 l fL . 如果进一步提高发光亮度将对大面积显示有着重要意义 , 同时这
种研究也有助于探讨发光复合机理 .
( 张亚非 、 张仿清 、 陈光华 )