全 文 ：大叶秦艽抗炎 、调节免疫有效部位的初步研究
董建勇 1 ,李广远 2 ,李长天 2
(1.温州医学院 ,浙江　温州 　325035;2.甘肃中医学院 ,甘肃 　兰州　730000)
收稿日期:2005 - 11 - 14
基金项目:甘肃省教育厅科研基金资助项目(024 - 02)
作者简介:董建勇(1963 -),男 ,副教授 ,博士 ,主要从事天然药物的研究。
摘　要:目的:研究大叶秦艽抗炎 、调节免疫的有效部位 。方法:复制大鼠佐剂性关节炎(AA)模型 ,
观察大叶秦艽四个溶剂部位的抗炎作用;采用刀豆素 A(ConA)诱导脾 T淋巴细胞的增殖反应 ,通过体
内 、外实验 ,分析对脾 T淋巴细胞增殖作用 。结果:大叶秦艽石油醚部位 (QS)、正丁醇部位 (QZ)、水溶
部位(QW)对福氏完全佐剂引起的局部炎症和免疫性炎症有抗炎作用;QZ体内对 ConA诱导的大鼠脾
T淋巴细胞增殖有抑制作用 ,而体外四种提取物对 ConA诱导的脾 T淋巴细胞增殖均呈现出抑制作用。
结论:大叶秦艽石油醚 、正丁醇 、水提取物均有抗炎作用 ,正丁醇提取物有调节免疫作用。
关键词:大叶秦艽;抗炎;调节免疫;有效部位
中图分类号:R285. 5　文献标识码:B　文章编号:1003 -8450(2006)01 - 0017 - 03
　　大叶秦艽 (G entiana macrophy lla)为龙胆科多
年生草本植物 ,是中药秦艽的主要基源和传统治疗
痹证的常用中药 ,性味辛苦平 ,归胃 、肝 、胆经 ,具有
祛风湿 、通络止痛 、退虚热 、清湿热的功效 ,用于风
湿痹痛 、中风不遂 、骨蒸潮热 、湿热黄疸等证。以前
的研究初步表明秦艽的水 、醇提取物有明显的抗炎
作用[ 1] ,醇提取物体外对有丝分裂原诱导的小鼠
脾脏细胞和胸腺细胞的增殖有抑制作用 [ 2] ,龙胆
苦苷有抗炎药理作用 [ 3] 。但关于秦艽祛风湿 、通
络止痛的有效成分未见系统研究报道 。为了进一
步探讨秦艽祛风湿的物质基础 ,我们采用体外 、体
内药理筛选方法 ,以抗炎和调节免疫生物效应为目
标 ,观察了大叶秦艽几个极性部位的抗炎 、免疫抑
制作用 ,现总结如下。
1　材料
1. 1　药物及制备
植物采于甘肃岷县城关农场 ,由甘肃中医学院
罗达尚教授鉴定为大叶秦艽 Gentiana macrophy lla
Pall。其地下部分被切碎 , 95 %甲醇室温浸提 3
次 ,每次 7 d,减压浓缩得浸膏 ,混悬于水中 ,分别以
石油醚 、乙酸乙脂 、正丁醇依次萃取 ,将浸膏按极性
分成 4个部分 ,石油醚部位 (QS)、乙酸乙脂部位
(QY)、正丁醇部位 (QZ)和水溶部位 (QW ),分别
减压浓缩 , 挥尽溶剂备用;雷公藤多甙片 , 批号
030201,上海复旦复华药业有限公司提供。
1. 2　主要试剂
福氏完全佐剂 (Freund’ s完全佐剂 ),试剂号
FB5188、5288,加拿大 BB I公司提供;RPM I1640培
养基 、ConA , S igma公司提供;新生小牛血清 ,杭州
四季青生物公司提供;四甲基偶氮唑盐 (MTT),华
美生物工程公司提供;二甲基亚砜 (DMSO),上海
试剂一厂提供 。
1. 3　实验动物
雄性W istar大鼠 ,体重 95 ±17 g,兰州大学基
础医学院动物实验中心提供 ,许可证编号:医动字
14 - 005号。
1. 4　主要仪器
CO 2培养箱 , Shill公司提供;超净工作台 ,北京
半导体设备一厂生产;酶联免疫检测仪 , DG - 3022
型 ,国营华东电子管厂生产 。
2　方法
2. 1　对大鼠佐剂性关节炎的抗炎作用 [ 4]
W istar大鼠适应性喂养 1周 ,随机分为 7组 ,
分别为正常组 、模型组 、雷公藤甙组 、QS组 、QY组 、
QZ组 、QW组。实验前在各鼠左 、右后肢足踝关节
处标记 ,按足容积测定法测定各鼠左 、右后肢足容
积 2次 ,取平均数作为给药前正常足容积 。 Fre-
und’ s完全佐剂按使用说明书配制 ,给每只大鼠左
后肢足跖部皮内注射 Freund’ s完全佐剂0. 1mL致
敏 ,于致敏后第 1、2、4、6、9、12、15、18、21 d分别测
左 、右后足容积 。致敏前一天开始静脉注射给药 ,
雷公藤多甙组剂量为 15 mg /kg, QS、QY、QZ、QW
组剂量为 400mg /kg,其余组静脉注射等量的饮用
水 ,连续给药 15 d ,第 21 d处死 ,无菌取脾脏备用。
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2. 2　体内对 ConA诱导大鼠脾 T淋巴细胞增殖的
影响[ 4 -5]
剪碎脾脏 ,过 100目尼龙网成为单细胞悬液 ,
用 0. 01%Tris-NH4C l裂解残余红细胞 , PBS洗涤 3
次 ,用含 10%NBS的 RPM I 1640完全培养液配成
5×106 /mL脾细胞悬液 ,接种于 96孔培养板 ,每孔
100μL。另每孔加入 ConA溶液 50 μL,使终浓度
为 10μg /mL,每组 3个复孔 ,全湿条件下 , 37 ℃,
5 % CO 2培养箱中培养 , 48 h后取出 , 1500 r /m in
离心5 m in ,去上清后分别加入 MTT 20 μL,继续培
养 4 h,弃上清液 ,每孔加入 DMSO 80 μL,震荡混
匀 。另设空白组 (培养基),用酶联免疫检测仪测
定各孔 A 490值 。
2. 3　体外对 ConA诱导大鼠脾 T淋巴细胞增殖的
影响[ 4 -5]
具体方法同上 ,仅在接种的 96孔培养板中每
孔再加入 50 μL用完全培养基配制的相应浓度的
药物。
3　结果
3. 1　秦艽四个溶剂部位对大鼠佐剂性关节炎的抗
炎作用动态变化分析
3. 1. 1　秦艽四个溶剂部位对 Freund’ s完全佐剂
所致大鼠左足跖炎症的影响
见图 1。
图 1　秦艽四个溶剂部位对 AA大鼠左足跖炎症的影响
3. 1. 2　秦艽四个溶剂部位对 Freund’ s完全佐剂
所致大鼠右足跖炎症的影响
见图 2。
图 2　秦艽四个溶剂部位对 AA大鼠
右足跖免疫性炎症的影响
3. 2　秦艽四个溶剂部位体内对 ConA诱导的大鼠
脾 T淋巴细胞增殖的影响
结果见表 1。
表 1　秦艽四个溶剂部位体内对 ConA诱导的大鼠
脾 T淋巴细胞增殖的影响　(–x±s, n =9)
组别 剂量(m g /kg)
脾 T淋巴细胞增殖
A 490
正常组 - 0. 306±0. 056
模型组 - 0. 388±0. 034*
雷公藤多甙组 15 0. 325±0. 063#
QS组 400 0. 376±0. 031
QY组 400 0. 352±0. 026
QZ组 400 0. 347±0. 040#
QW组 400 0. 350±0. 054
　　注:与正常组比较 *Ρ<0. 01;与模型组比较 #Ρ <
0. 05
3. 3　秦艽四个溶剂部位体外对 ConA诱导的大鼠
脾 T淋巴细胞增殖的影响
结果见表 2。
　　 表 2　秦艽四个溶剂部位体外对 ConA诱导的大鼠脾 T淋巴细胞增殖的影响 (–x±s, n =5)
组别 A 490(μg /m L)
空白组 0. 00 1 10 100 1000
QS组 0. 64±0. 074 0. 60±0. 068* 0. 58±0. 035* 0. 48±0. 034** 0. 45±0. 024**
QY组 0. 74±0. 112 0. 67±0. 094* 0. 67±0. 105* 0. 63±0. 087** 0. 62±0. 102**
QZ组 0. 72±0. 100 0. 66±0. 074* 0. 57±0. 095* 0. 45±0. 087** 0. 44±0. 074**
QW组 0. 67±0. 150 0. 61±0. 085 0. 45±0. 054** 0. 55±0. 027** 0. 46±0. 062**
　　注:与空白组比较 * Ρ<0. 05, ** Ρ<0. 01
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4　讨论
秦艽是传统治疗痹证的常用中药 ,临床用于风
湿肢节疼痛 、筋脉挛急 、骨蒸潮热等症。秦艽抗炎
有效成分的分析一直是人们关注的内容 。以往的
研究认为其抗炎的有效成分是龙胆碱 A、B、C(gen-
tianine A、B、C)、秦艽丙素 (gentiano l)和龙胆苦苷
(gentiopicrin)[ 3, 6] 。我们观察发现大鼠左后肢足跖
部皮内注射 Freund’ s完全佐剂 0. 1 mL致敏 , 2 ～
6 d局部出现炎症反应 ,秦艽对 Freund’ s完全佐剂
引起的局部炎症有抗炎作用 ,其主要起效部位为
QS、QZ、QW部位 ,作用强度不如雷公藤多甙 ,且量
效关系不明确 ,可初步推测参与抗炎是多成分的综
合作用 。其 QS部位也具有较好的抗炎作用 ,研究
发现秦艽的脂溶部位含有秦艽酰胺 、苯丙吡喃酮 、
红百金花内酯 、栎瘿酸 、齐墩果酸[ 7] , 推测秦艽中
所含的酰胺 、萜类 、酚酸类等成分也是抗炎作用的
有效成分;阻止免疫炎症反应的发生是治疗类风湿
性关节炎的关键所在 ,实验结果初步反映秦艽对免
疫性炎症也有较弱的抗炎作用 ,其阻止免疫炎症反
应的主要有效部位为 QZ、QW 部位 ,作用强度不如
雷公藤多甙;且量效关系不明确 。推论其抗炎作用
也是多成分的综合结果 。其具体化合物及相互作
用有待于进一步研究 。
免疫性炎症的病变过程中尤其是 T淋巴细胞
的免疫反应是发病和病程发展的重要因素 ,抑制淋
巴 T细胞特别是 CD 4细胞的活化是其治疗的重要
环节 。实验结果提示秦艽 QZ部位体内对 ConA诱
导的大鼠脾 T淋巴细胞增殖均有抑制作用 ,而体
外秦艽 QS、QY、QZ、QW四个部位对 ConA诱导的
大鼠脾 T淋巴细胞增殖呈现出抑制作用 ,这一结
果提示秦艽的有些在体外有作用的成分通过代谢
而失去其活性 ,或者存在于这些部位的成分对免疫
性炎症无作用 ,有待于进一步研究。
参考文献:
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上海:上海科技出版社 , 1999:231.
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北京:人民卫生出版社 , 1994:723.
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[ 6]《全国中草药汇编》编写组. 全国中草药汇编 [M ] . 北
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[ 7]陈千良 , 孙文基 ,涂光忠 , 等. 陕西产秦艽脂溶部位化学
成分研究 [ J] . 中草药 , 2005, 36 (1):4 - 7.
In itial study ofRadixGentianaeM acrophyllae on anti-in flammatory and mi munoregulatory active part
Dong Jianyong
1 , LiGuangyuan2 , LiChang tian2
(1. W enzhouM ed ica lCo llege, 325035,W enzhou, China;
2. G ansu C ollege o f TCM , 730000, Lanzhou, China)
Abstract:Objective:To research the anti-inflammato ry and immuno regu latory active part of RadixG enti-
anae macrophy llae. M e thods:Rats mode l of adjuvant arthritis(AA)were estab lished to observe the an ti-in-
flammatory e ffec t o f 4 so lven t parts of Radix Gentianae macrophy llae. The proliferation reaction o f T lympho-
cy tes induced by ConA was used to analyse the impre ss of RadixGentianaemacrophy llae on the p ro life ra tion o f
T lymphocy tes in sp leen. Results:Rad ix G entianae macrophy llae had an ti-inflamma to ry effect on the local in-
flammation caused by Freund’ s comple te ad juvan t, and its active parts w ereQS , QZ and QW. QZ parts had
inh ib itive e ffec t on the rats’ sp lenic T lymphocy te pro life ra tion induced by ConA in vivo, and QS , QY , QZ
and QW pa rts had the effect in v itro. Conc lusion:RadixGentianaemacrophy llae has anti-inf lammatory and im-
muno regu latory effec.t
Key words:Radix Gentianae mac rophy llae;anti-inflammato ry;immunoregula to ry;active part
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