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药
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笔管草药材质量标准研究
★ 刘大伟 赖佐发 廖宝源 (赣州市食品药品检验所 江西 赣州 341000)
摘要:目的:建立和完善笔管草质量标准体系。方法:通过对笔管草的名称、植物来源、药材性状、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、
浸出物、有效成分含量测定等方面的质量问题进行了较为全面和系统的研究。结果:山奈素在 0． 00998 ～ 0． 0998μg 范围内线
性关系(r = 0． 9993)，平均回收率为 99． 82%(ＲSD = 0． 14%，n = 6)。结论:建立的方法准确可行，适用于笔管草的质量控制。
关键词:笔管草;质量标准;山奈素
中图分类号:Ｒ282 文献标识码:A
Study on the Quality Standards of Equisetum Debile Ｒoxb
LIU Da － wei，LAI Zuo － fa，LIAO Bao － yuan
Ganzhou Institute for Food and Drug Control，Guangzhou 341000，China．
Abstract:Objective:To provide reference for establishing and improving the quality standards system of Equisetum debile Ｒoxb． Meth-
ods:This paper focused on problems of medicinal material quality of Equisetum debile Ｒoxb from genuine medicinal materials，such as
local names，botanical origins，morphological characters，TLC，contents of moistures，total ashes，ethanol extracts，effective components．
Ｒesults:The kaempferide had good linear relationship within the range of 0． 00998 ～ 0． 0998μg(r = 0． 9993)． The average recovery
was 99． 82% with ＲSD of 0． 14%(n = 6)． Conclusion:The methods are sensitive，accurate and suitable for the quality control of Equi-
setum debile Ｒoxb．
Key words:Equisetum debile Ｒoxb;Quality Standards;Kaempferide
笔管草为木贼科植物笔管草 Equisetum debile
Ｒoxb．的干燥的地上部分。全年可采，割取地上部
分，除去杂质，晒干。用于急性结膜炎，急性黄疸型
肝炎，痢疾，尿道炎，荨麻疹。微苦、甘，平。归肝经。
清热利湿，明目退翳。分布于江西(赣州)、广东、福
建(泉州、厦门、龙岩、三明、南平)等省区，生于山谷
溪边潮湿地，为江西省赣南地区民间常用药［5］。本
品收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第九册
(1994 年版)，原标准只有简单的性状、显微鉴别和
化学反应，未对药效成分进行定性、定量检测，难以
保障其药材及其成方制剂的质量和临床用药的有效
性和安全性。［2］因此，本文在笔管草原标准基础上，
建立了水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物、山柰素
的薄层鉴别和含量测定方法，为笔管草药材及其成
方制剂的质量控制提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent1260 高效液相色谱仪(VWD 检测器、四
元低压混合泵、柱温箱、自动进样器、ChemStation 色
谱工作站);DM500 摄影摄影显微镜(德国莱卡;
USC302 超声波清洗器(上海波龙电子设备有限公
司);GZX － DH － 40ⅹ45 － BS 电热恒温干燥箱(上
海跃进医疗器械厂);SX2 － 5 － 12 C0149 箱式电阻
炉(上海实验仪器厂有限公司);梅特勒 AB265 － S
型电子天平。
乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分
析纯。山柰素对照品(中国药品生物制品检定所，
批号:110861 － 200808，含量为 95． 9%)。10 批笔管
草药材为采自赣州市信丰小江(暂定批号为 1 －
10)，经赣州市食品药品检验所刘志辉鉴定为木贼
科植物笔管草 Equisetum debile Ｒoxb． 的干燥的地上
部分。
2 方法与结果
2． 1 植物来源［5］ 多年生草本，高 18 ～ 100cm，硬
且粗糙。根茎横走，黑或黑褐色。茎绿色，直立，直
径 2 ～ 15mm，中空，基部节上有 2 ～ 5 分枝，稀无分
枝或仅有 1 小枝，有棱脊 6 ～ 20 条，棱脊上有 1 列小
疣状突起或小横纹，沟中有气孔线 1 列。叶小，轮
生，下部联合成鞘筒，疏松地包围茎节，鞘片背上无
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江 西中医药大学学报2014年12月第26卷第6期
JOUＲNAL OF JIANGXI UNIVEＲSITY OF TCM 2014 Vol. 26 No. 6
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棱脊，鞘齿短三角形，黑色，有易脱落的膜质尖尾，孢
子束穗生于分枝及主茎顶端，矩圆形，有小尖头，长
0． 5 ～ 2． 5cm，无柄;孢子同型，圆球状，有长弹丝 4，
或十字形，平时紧绕在孢子外面，遇水即弹开。孢子
成熟 8 ～ 10 月。
2． 2 药材性状 本品呈长杆状，长 30 ～ 50cm，直径
0． 2 ～ 0． 5cm，表面灰绿色或黄绿色，有 6 ～ 20 条棱
背，节明显，节间长 2 ～ 9cm，叶鞘基部和鞘齿黑棕
色，鞘齿短三角形，有的可见膜质尖尾，每节轮生枝
2 ～ 5 条。体轻，质脆，易折断，手捻之有粗糙感，断
面中空，内表面白色膜质。气微，味淡微甘。
2． 3 薄层色谱鉴别
2． 3． 1 供试品溶液的制备 取本品粉末 1g，加
75%甲醇 25mL，盐酸 1mL，加热水解 1 h，滤过，滤液
蒸干，残渣加水 10mL 溶解，用乙酸乙酯提取 2 次，
每次 10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇 1mL
使溶解，作为供试品溶液。［1］
2． 3． 2 对照品溶液的制备 另取山柰素对照品，加
甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液，作为对照品溶液。
2． 3． 3 薄层色谱的展开 照薄层色谱法(《中国药
典》2010 年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶
液各 1μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，采用双
槽展开缸，以环已烷 －乙酸乙酯 －甲酸(8∶ 4 ∶ 0． 4)
为展开剂，上行展开，展距 8 ～ 15 cm。
2． 3． 4 显色 5%三氯化铝乙醇溶液，立即置紫外
光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品
色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
1． 山奈素;2 ～ 11． 笔管草药材
图 1 笔管草药材 TLC图(365nm)
2． 3． 5 样品检识 按上述条件对 10 批土黄连药材
进行薄层色谱鉴别，结果各斑点分离良好，显色清
晰，且各批药材薄层鉴别结果一致性较好。见图 1。
2． 4 检查
2． 4． 1 水分 按照《中国药典》2010 年版一部附录
Ⅸ H第一法测定［8］。见表 1。
2． 4． 2 总灰分 按照《中国药典》2010 年版一部附
录Ⅸ K测定。见表 1。
2． 4． 3 酸不溶性灰分 按照《中国药典》2010 年版
一部附录Ⅸ K测定。见表 1。
2． 5 浸出物 用水作溶剂作溶剂，水溶性浸出物测
定法(《中国药典》2010 年版一部附录Ⅹ A)项下的
热浸法测定。见表 1。
表 1 笔管草水分、总灰分、
酸不溶性灰分、浸出物、含量测定结果
No． 水分 /% 总灰分 /% 酸不溶性灰分 /% 浸出物 /% 山柰素 /%
1 9． 7 20． 6 13． 7 21． 3 0． 086
2 9． 7 21． 3 14． 2 22． 5 0． 087
3 10． 1 18． 3 10． 6 22． 3 0． 088
4 10． 0 18． 4 10． 4 21． 6 0． 089
5 10． 5 19． 8 14． 2 21． 7 0． 085
6 11． 1 18． 7 14． 1 22． 7 0． 082
7 9． 8 18． 8 13． 9 21． 4 0． 086
8 10． 5 18． 7 12． 3 22． 3 0． 086
9 10． 5 19． 3 14． 2 20． 9 0． 087
10 9． 9 19． 1 12． 9 21． 8 0． 084
图 2 对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的 HPLC色谱图
2． 6 含量测定 笔管草主要含山柰素，因此本文采
用 HPLC法建立了笔管草药材中山柰素含量测定方
法。
2． 6． 1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil(钻石)C18柱
(4． 6mm ×250mm，5μm);流动相:乙腈 － 0． 4%磷酸
溶液(50 ∶ 50);检测波长:365nm;进样量:10μL;流
速:1． 0mL /min;柱温:35℃。理论板数按山奈素峰
计算应不低于 3000。见图 2。
2． 6． 2 对照品溶液的制备 取山奈素对照品适量，
精密称定，加 75%甲醇制成每 1mL含 20μg的溶液，
即得。
2． 6． 3 供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号
筛)约 0． 75g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入
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刘大伟等:笔管草药材质量标准研究
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75%甲醇 50mL，密塞，称定重量，加热回流 1 h，放
冷，再称定重量，用 75%甲醇补足减失的重量，摇
匀，滤过，精密量取续滤液 20mL，加盐酸 5mL，置水
浴中加热水解 1 h，放冷，转移至 50mL 量瓶中，加
75%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即
得。［1］
2． 6． 4 线性关系考察 精密吸取 1． 0，2． 5，5． 0，
7. 5，10． 0μg /mL 的山奈素对照品溶液，分别进样
10μL，测定。以进样量(μg)为横坐标，山奈素峰面
积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y = 4046． 3X
－ 18． 885，r = 0． 9993。结果表明山奈素在 0． 00998
～ 0． 0998μg范围内线性关系良好。
2． 6． 5 精密度试验 取本品(批号 20130116)
0. 75g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备，精
密吸取 10μL 注入液相色谱仪，测定，重复 6 次，计
算山奈素 ＲSD = 0． 46%，表明精密度良好。
2． 6． 6 重复性试验 取本品(批号 20130116)6
份，每份 0． 75g，精密称定，按供试品溶液的制备方
法制备，精密吸取 10μL 注入液相色谱仪，测定，记
录山奈素峰面积并计算 ＲSD = 0． 54%，表明方法重
复性良好。
2． 6． 7 稳定性试验 取本品(批号 20130116)
0. 75g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备，分
别于 0，2，4，6，8，12，24h测定，记录山奈素峰面积并
计算 ＲSD = 0． 38%，结果表明供试品在 24h内稳定。
表 2 山奈素加样回收率试验
称样量
/g
样品中量
/mg
加入量
/mg
实测量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
0． 3754 0． 3322 0． 3125 0． 6432 99． 77
0． 3742 0． 3312 0． 3125 0． 6432 99． 92
0． 3755 0． 3323 0． 3125 0． 6421 99． 58
0． 3761 0． 3328 0． 3125 0． 6443 99． 85
0． 3739 0． 3309 0． 3125 0． 6432 99． 97
0． 3754 0． 3322 0． 3125 0． 6436 99． 83
99． 82 0． 14
2． 6． 8 加样回收率试验 取本品(批号 20130116)
6 份，每份 0． 375g，精密称定，分别加入 0． 0125mg /
mL的山奈素对照品溶液 25mL，按供试品溶液的制
备方法制备，精密吸取 10μL 注入液相色谱仪，测
定，计算山奈素的含量及 ＲSD。结果山奈素的平均
回收率为 99． 82%，ＲSD = 0． 14%，表明该方法回收
率良好。见表 2。
2． 6． 9 药材含量测定 取本品细粉约 0． 75g，精密
称定，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，按
上述色谱条件分别测定山柰素的含量，结果见表 1。
3 讨论
3． 1 薄层色谱鉴别 实验考察了供试品溶液的稳
定性，每隔一定时间点样一次，在放置 0，2，6，24 h
内点样，结果表明:在 2 h内，供试品色谱中，在与对
照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
证明供试品溶液要临用新配。
3． 2 浸出物测定考察 实验分别采取热浸法和冷
浸法，热浸法中用水、50%乙醇、75%乙醇、乙醇分别
做溶剂进行考察;冷浸法中用水、50%乙醇、75%乙
醇、乙醇做溶剂进行考察，结果表明:水作溶剂热浸
浸出率最高。故选取水作溶剂热浸。
3． 3 灰分和酸不溶性灰分测定考察 针对本品灰
分和酸不溶性灰分测定值较高，实验分别采取水洗
和加 10%硝酸铵溶液湿润后测定。实验所用样品
均为干燥的地上部分，考虑到样品是否已洗净，如果
样品带有灰尘和泥沙，均会影响最后的检测结果。
所以，第一步采取水洗，净制样品，并延长炭化时间。
水洗过程中，未发现有尘土和泥沙。样品的水洗前
和水洗后的测定结果比较接近。考虑到考虑到样品
炭化后有可能不易灰化，故采取加 10%硝酸铵溶液
湿润。具体操作为:当样品炭化后，放冷，加 10%硝
酸铵溶液 3mL，使残渣湿润，置水浴上蒸干，再放进
高温炉内进行炽灼，至坩埚内容物完全炭化。测定
结果比较接近。因此，灰分和酸不溶性灰分测定值
较高是样品成分原因。
3． 4 含量测定
3． 4． 1 波长选择 取山柰素对照品适量，用 75%
甲醇制成适当的浓度，以 75%甲醇为空白，在 400 ～
300nm波长范围内进行光谱扫描，结果在 365nm 波
长处有稳定的吸收，同时参考《中国药典》中山柰素
的检测波长，确定检测波长为 365nm。
3． 4． 2 流动相的选择 参考《中国药典》中山柰素
含量测定方法，采用乙腈 － 0． 4%磷酸溶液(50∶ 50)
为流动相体系，山柰素与其它组分分离完全，结果满
意。
参考文献
［1］国家药典委员会·中华人民共和国药典(一部)［S］．北京:中医
医药科技出版社，2010:285 － 286．
［2］中华人民共和国卫生部药典委员会．卫生部药品标准﹒中药成
方制剂第九册［S］．北京:中华人民共和国卫生部药典委员会出
版，1996:180 － 181．
［3］北京市卫生局．北京中药材标准［M］． 北京:首都师范大学出版
社，1998:211．
［4］福建省食品药品监督管理局． 福建省中药材标准［M］． 福州:海
风出版社，2006:211．
［5］中国科学院植物研究所． 中国高等植物图鉴(第一册)［M］． 北
京:科学出版社，1972:116．
(收稿日期:2014-05-05)编辑:曾文雪
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江西中医药大学学报 2014 年 12 月第 26 卷第 6 期