全 文 ：收稿日期:2009-11-23; 修订日期:2011-05-20
基金项目:国家自然科学基金(No． 30973864) ;
教育部高校博士学科点基金(No． 20090142110021) ;
湖北省自然科学(重点)基金(No． 2009CDA067)
作者简介:黄晓华(1964-) ，女(蒙古族) ，内蒙古呼伦贝尔人，现任内蒙古
呼伦贝尔职业技术学院副教授，博士学位，主要从事蒙药临床药理研究工
作．
* 通讯作者简介:阮金兰(1952-) ，男(汉族) ，湖北武汉人，现任华中科技
大学同济医学院教授，博士研究生导师，主要从事天然药化研究工作．
普通针毛蕨质量标准的研究
黄晓华，蔡亚玲，熊朝梅，汪建平，阮金兰*
(华中科技大学同济药学院，湖北省天然药物化学与资源评价重点实验室，湖北 武汉 430030)
摘要:目的 研究普通针毛蕨的质量标准。方法 运用显微鉴定、薄层色谱、紫外可见分光光度法、高效液相色谱等技术对
普通针毛蕨进行研究，对其水分、总灰分、酸不溶灰分、总黄酮、原芹菜素含量进行测定。结果 参照《中国药典》2005 年版
(Ⅰ部) ，普通针毛蕨生药中水分不得超过 15． 00%，总灰分不得超过 8． 31%，酸不溶性灰分不得超过 3． 90%，t 检验显
示，上述指标，因产地不同，无显著性差异(P ＞ 0． 05) ;生药中原芹菜素的含量不得低于 0． 71%，总黄酮含量不得低于
28． 21%。因药材产地不同，其总黄酮、原芹菜素含量有显著性差异(0． 01 ＜ P≤0． 05)。结论 实验结果为建立普通针毛
蕨药材的质量标准提供了依据，方法简单易行。
关键词:普通针毛蕨; 质量标准; 黄酮类化合物
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 10． 005
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)10-2327-02
Quality Standard of Macrothelypteris torresiana
HUANG Xiao-hua ，CAI Ya-ling ，XIONG Chao-mei，WANG Jian-ping，RUAN Jin-lan*
(Key Laboratory of Natural Medicinal Chemistry and Resources Evaluation of Hubei Province，College of Phar-
macology，Tongji Medical Center of Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China)
Abstract:Objective To establish the quality standard of Macrothelypteris torresiana． Methods The plant was studied by the
methods including microscopic identification，TLC，HPLC，and the contents of water，ashes，acid insoluble ashes were deter-
mined，respectively． Results The limits of the content of water，ashes，acid insoluble ashes were 15． 01%，8． 31% and 3． 90% ．
The minimum content of protoapigenone (C15H10O6)in the plant was not less than 0． 71% ． The content of total flavonoids was e-
qual to or higher than 28． 21% ． Conclusion The results can be used for the quality control of Macrothelypteris of Thelypteridace-
ae． The results indicated that the contents of total flavonoids and protoapigenone of different batches showed significant difference
(0． 01 ＜ P≤0． 05)probably due to the variable cultivation region．
Key words:Macrothelypteris torresiana; Quality Standard; Flavones
普通针毛蕨 Macrothelypteris torresiana (Gaud．)Ching为金星
蕨科针毛蕨属植物，分布在长江以南各省区，向西至四川和云南
东北部，民间被广泛用于治疗水肿、外伤出血，具有清热解毒、去
瘰散结的功效［1］。蕨类植物的根茎类含有多种黄酮类成分［2］，
本实验室从普通针毛蕨根茎中分离得到 16 种黄酮类化合物，其
中原芹菜素(Protoapigenone，结构式见图 1)不仅含量较高且具有
抗肿瘤活性［3，4］。本实验室已经研究出梯度反相 HPLC法测定原
芹菜素含量的方法［5］，但在实验研究中发现，等度反相 HPLC 也
可精确测定原芹菜素含量，并能与药动学实验有机结合。为了更
好地开发利用这一药用植物资源，有效控制该药材的质量，为其
深入研究提供参考，本课题运用显微鉴定、薄层色谱、紫外可见分
光光度法、高效液相色谱等技术对普通针毛蕨进行了研究，旨在
对普通真毛蕨的质量标准进行可行的探索［6］。
1 材料与仪器
1． 1 仪器 电子显微镜(200 W，50 kHz) ;THZ －台式恒温振荡
箱(大仓市华美生化仪器厂) ;LC － 9A 高效液相色谱仪(日本
SHIMADZU公司) ，T2000P 色谱工作站;SPD － 10AVP 紫外检测
器(SHIMADZU公司)。
图 1 原芹菜素的化学结构式
1． 2 药材 普通针毛蕨为金星蕨科针毛蕨属植物普通针毛蕨
Macrothelypteris torresiana (Gaud．)Ching的干燥根茎。2006，2007
年 9 ～ 10 月采于江西省九江县、湖北恩施，共 10 个样品，按采集
年月日编辑药材样品批号，药材除去泥沙，削去叶柄，晒干，碾碎，
过 20 目筛，制成药材细粉，备用。由九江森林植物标本馆馆长谭
策铭鉴定为金星蕨科针毛蕨属植物普通针毛蕨 Macrothelypteris
torresiana (Gaud．)Ching的干燥根茎。
2 方法与结果
2． 1 供试品和对照品溶液的制备
2． 1． 1 供试品溶液的制备 采用醇提水沉法［5］制备各批次的普
通针毛蕨总提取液，用于检测药材中总黄酮含量及主要化合物原
芹菜素的含量。将普通针毛蕨药材细粉，减压干燥至恒重，精确
称取其 2． 0 g，加 95%乙醇 200 ml，室温超声提取 40 min，过滤并
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收集提取液，重复上述提取步骤，合并两次提取液减压蒸干，加适
量纯净水沉淀，沉淀物于 60 ～ 65℃恒温箱内干燥后，加 100ml
甲醇使之完全溶解，用 0． 45 μm微孔滤膜过滤，即得普通针毛蕨
总提取液(含药材相当于 20 mg·ml －1)。
2． 1． 2 对照品溶液的制备 对照品原芹菜素(Protoapigenone)由
本实验室从普通针毛蕨地下部分分离提纯得到，并经过 UV、IR、
1D － NMR、2D － NMR 结构鉴定，HPLC － UV 测其纯度 ＞ 97%。
精密称取对照品原芹菜素 2． 0mg，加甲醇 10ml，用 0． 45 μm 微孔
滤膜过滤，即得浓度为 200 μg·ml －1对照品母液，备用。
2． 2 普通针毛蕨药材的化学鉴定［7］
2． 2． 1 浓氨水反应 取供试品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上
放熏 0． 5 min，在紫外灯下观察，滤纸呈明显的灰褐色斑点，表明
供试品含有黄酮类化合物［8］。
2． 2． 2 三氯化铝反应 取供试品溶液点在滤纸上，滴加 1%三氯
化铝乙醇溶液，吹干，在紫外光下滤纸呈黄褐色荧光斑点，表明供
试品含有黄酮类化合物［8］。
2． 3 普通针毛蕨的显微鉴别
2． 3． 1 横切面 该药材横切面呈黄白至棕色，可见断续环状排
列的黄白色维管束。
2． 3． 2 粉末 该药材粉末呈深黄色至棕色。纤维成束或单个散
在，细长;可见明显腺毛和管胞;管胞大多为梯纹，狭长形，两端尖
斜，管胞之间的纹孔大小不一;数个维管束环状排列，韧皮部围绕
在木质部的四周，每一维管束外围有内皮层;内皮层细胞不规则
长方形或类方形，壁薄;薄壁细胞呈长方形或圆形，其内可见淀粉
粒。非腺毛、管胞、纤维、薄壁组织的特征明显，据此可与同属他
种植物相区别，显微鉴别结果见图 2。
图 2 普通针毛蕨根茎粉末显微图
2． 4 普通针毛蕨原芹菜素成分的薄层鉴别 参照《中国药典》所
载薄层色谱法［8］，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各 4 μl，分
别点于同一硅胶 G薄层板，以氯仿 －甲醇(12 :1)为展开剂，取
出晾干，喷以 10%硫酸 －乙醇溶液，在 105℃烘约 5 min 后观察。
结果供试品与对照品在薄层色谱同一位置上，显示相同的黄色斑
点。见图 3。
a －供试品 b －对照品
图 3 薄层鉴别图
2． 5 普通针毛蕨灰分、水分、总黄酮测定
2． 5． 1 灰分测定 参照《中国药典》所载灰分测定［8］，对各批次
的药材细粉所含总灰分和酸不溶性灰分进行测定。结果见表 1。
2． 5． 2 水分测定 因本品不含挥发性成分，故采用烘干法［8］对
各批次的药材细粉所含水分进行测定。结果见表 1。
2． 5． 3 总黄酮的含量测定 对照品原芹菜素(protoapigenone)从
普通针毛蕨药材中分离提纯获得，其甲醇溶液与普通针毛蕨供试
品溶液的最大吸收波长相同，均为 248 nm。故采用对照品测定
法［8］检测供试品溶液中总黄酮的含量。其计算公式为:C样 = (
A样 / A对)× G对，其中 C样 为供试品的总黄酮浓度，A样 供试品的吸
光度，G对 为原芹菜素的浓度，A对 为原芹菜素的吸光度。
标准曲线:取对照品母液(200 μg·ml －1)用甲醇稀释成2． 0，
4． 0，5． 0，10． 0，20． 0 μg·ml －1对照品系列溶液。以 248 nm波长
检测吸光度，以浓度(μg·ml －1)对吸光度值进行回归处理，得回
归方程为:Y = 90． 58X － 0． 04，R2 = 0． 999 9，检测范围为 2． 0 ～
20． 0 μg ·ml －1。
精密度实验:取 5． 0，10． 0，20． 0 μg·ml －1对照品溶液各 5
份，按 248 nm波长检测吸光度，结果其 RSD(n = 15)为 2． 16%。
重现性实验:取 10． 0 μg·ml －1对照品溶液各 5 份，在 248
nm波长检测吸光度，结果其 RSD(n = 5)为 1． 84%。
稳定性实验:取 10． 0 μg·ml －1对照品溶液，分别在室温下放
置 0，2，3，4，6 h检测其吸光度，结果其 RSD(n = 5)为 1． 12%。
加样回收实验:精确称取已知总黄酮含量的供试品溶液 15
份，分 3 组，依次加入 10． 0 μg·ml －1对照品溶液 0． 2，0． 4，0． 8
ml，配成低、中、高浓度样品，测定其吸光度，结果其平均加样回收
率(n = 15)为 102． 2%，RSD为 2． 7%。
上述结果表明，此法符合检测要求，各批次药材的总黄酮含
量检测结果见表 1。
2． 6 原芹菜素含量测定 参照《中国药典》所载高效液相色谱
法［8］对供试品进行原芹菜素含量测定。
2． 6． 1 色谱条件 Agilent C18色谱柱(250 mm × 4． 6 mm，5
μm) ;流动相:甲醇 －乙腈 － 0． 2%磷酸水 1 ∶ 2 ∶ 7(V ∶ V) ;流
速:1． 0 ml·min －1;检测波长:248 nm，20 μl进样;柱温:25℃(恒
温箱控制温度)。
2． 6． 2 线性关系考察 采用逐级稀释法，配制 0． 5，1． 0，5． 0，
10． 0，20． 0 μg·ml －1的对照品系列溶液，按“2． 6． 1”项色谱条件
进行 HPLC检测，原芹菜素峰的理论板数均不低于 3 000，与最邻
近峰的分离度大于 1． 7，完全符合《中国药典》［8］的要求。以浓度
对峰面积进行回归处理，原芹菜素在 0． 5 ～ 20． 00 μg·ml －1范围
内线性关系良好，标准曲线方程为 Y = 71 332X － 323． 94 (R2 =
0． 999 9) ，检测限为 5ng·ml －1。
2． 6． 3 精密度实验 将 2． 0，10． 0，20． 0 μg·mL －1 3 个浓度对照
品溶液，在室温下，日内进样 5 次，一周内隔日进样一次的方法，
按“2． 6． 1”项色谱条件，计算日内精密度(within － day － preci-
sion)和日间精密度(between － day － precision)。结果其日内 RSD
值(n = 3)为 1． 1%，日间 RSD值(n = 3)为 3． 4%。
2． 6． 4 稳定性实验 取 2． 0，10． 0，20． 0 μg·ml －1对照品溶液各 5
份，在室温下放置 0，3，6，9，12 h 放置后，按“2． 6． 1”项色谱条件
检测，结果其 RSD值(n = 15)为 1． 4%。
2． 6． 5 加样回收率实验 精确称取已知原芹菜素含量的供试品
15 份，分 3 组，依次加入 10 μg·ml －1对照品溶液 0． 1，0． 2，
0． 4ml，按“2． 6． 1”项色谱条件，测定其原芹菜素含量，结果其平
均回收率(n = 15)为 98． 1%，平均 RSD值为 2． 1%。
2． 6． 6 上述结果表明，此法符合检测要求，各批次药材的原芹
菜素含量检测。结果见表 1。
3 讨论
普通针毛蕨中主要含黄酮类成分，其中新化合物原芹菜素具
有明显的抗肿瘤作用，故本研究将总黄酮和原芹菜素同时作为普
通针毛蕨的质量评价指标。此次 10 批药材样品试验结果显示，
按质量均值计算药材总灰分含量为 6． 93%，酸不溶性灰分含量
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为 3． 25%，水分含量为 12． 51%，原芹菜素含量为 1． 05%，总黄酮
含量为 41． 49%;按 ± 20%的误差计算，生药中总灰分不得超过
8． 31%，酸不溶性灰分不得超过 3． 90%，水分不得超过 15． 01%，
原芹菜素的含量不得低于 0． 71%，总黄酮含量不得低于
28． 21%;t检验结果显示，10 批药材样品的原芹菜素和总黄酮含
量有显著性差异(0． 01 ＜ P≤0． 05) ，其他指标无显著性差异(P ＞
0． 05) ，扩大区域样品的质量评价尚在进行之中。
表 1 普通针毛蕨生药中总灰分等含量测定结果 %
产地 批号 总灰分 酸不溶性灰分 水 分 总黄酮 原芹菜素
060915 6． 86 3． 16 12． 07 44． 63 1． 05
江 060921 7． 06 3． 41 12． 71 41． 59 1． 21
西 060930 6． 92 3． 25 12． 35 44． 25 1． 12
省 061009 6． 75 3． 02 12． 49 47． 32 1． 24
061018 6． 83 3． 12 12． 17 40． 64 1． 17
070829 7． 11 3． 43 12． 89 34． 72 0． 75
湖 070909 7． 22 3． 46 12． 24 37． 46 0． 81
北 070917 6． 59 2． 98 12． 23 39． 82 0． 92
省 070924 7． 06 3． 39 12． 96 42． 27 1． 18
071005 6． 90 3． 30 13． 03 41． 34 1． 09
均值 6． 93 3． 25 12． 51 41． 49 1． 05
指标 ≤8． 31 ≤3． 90 ≤15． 01 ≥28． 21 ≥0． 71
在研究过程中发现，以等度反相 HPLC方法测定普通针毛蕨
原芹菜素含量，快速灵敏，简便易行，也可用于质量标准的评价及
药动学分析。
参考文献:
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学出版社，1999:79．
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［8］ 国家药典编委会． 中国药典，Ⅰ部［S］． 北京:化学工业出版社，
2005:35．
收稿日期:2010-12-20; 修订日期:2011-05-11
基金项目:国家自然科学基金(No． 30801520) ;国家中医药管理局中医药行业科研专项中药类项目(No． 200807020)
江西省教育厅项目(No． GJJ10212) ;
作者简介:邵 峰(1980-) ，男(汉族) ，江西九江人，现任江西中医学院讲师，硕士学位，主要从事中药质量评价工作．
* 通讯作者简介:刘荣华(1964-) ，男(汉族) ，江西吉安人，现任江西中医学院教授，博士学位，主要从事中药质量评价工作．
附子不同炮制品镇痛抗炎作用研究
邵 峰，李赛雷，刘荣华* ，黄慧莲，任 刚，姚迎新，郝行程
(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004)
摘要:目的 比较附子不同炮制品(盐附子、黑顺片、白附片)的镇痛抗炎作用差异。方法 通过醋酸扭体法，以小鼠扭体
反应次数为考察指标，观察附子不同炮制品的镇痛作用;通过二甲苯致小鼠耳肿胀法，以小鼠耳肿胀度为考察指标，观察
附子不同炮制品的抗炎作用。结果 与模型组比较，盐附子与黑顺片均可明显抑制醋酸所致小鼠扭体反应次数 (P ＜
0． 05) ，黑顺片可明显降低二甲苯所致的小鼠耳肿胀度 (P ＜ 0． 05)。结论 附子不同炮制品的镇痛抗炎作用不尽相同，其
中，黑顺片具有良好的镇痛抗炎作用，盐附子仅镇痛作用效果明显，白附片镇痛抗炎作用效果均不明显。
关键词:附子; 炮制; 镇痛; 抗炎
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 10． 006
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)10-2329-02
Analgesic and Anti － inflammatory Effects of Different Processed Products of Aconiti late-
ralis radix praeparata
SHAO Feng，LI Sai-lei，LIU Rong-hua* ，HUANG Hui-lian，REN Gang，YAO Ying-xin，HAO Xing-cheng
(Key Laboratory of Modern Preparation of TCM，Ministry of Education，Jiangxi University of Traditional Chi-
nese Medicine，Nanchang 330004，China)
Abstract:Objective To campare analgesic and anti － inflammatory effects of different processed products of Aconiti lateralis ra-
dix praparata． Methods The analgesic effect of different processed products of Aconiti lateralis radix praparata was tested by the
acetic acid － induced writhing body method in mice． The anti － inflammatory effect of different processed products of Aconiti latera-
lis radix praparata was tested by the xylene － induced ear swelling method in mice． Results Yan fu zi and Hei shun pian obviously
decreased the times of the acetic acid － induced writhing test in mice(P ＜ 0． 05) ;Hei shun pian obviously inhibited the xylene －
induced ear swelling(P ＜ 0． 05)． Conclusion There are different degrees of analgesic and anti － inflammatory effects in different
processed products of Aconiti lateralis radix praparata．
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL ． 22 NO． 10 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 10 期