全 文 ：HPLC法同时测定毛果婆婆纳中 3 种环烯醚萜苷
崔红梅 * ， 罗 恒， 杨 军， 杨安东
(四川省中医院科学院，四川 成都 610041)
收稿日期:2014-06-06
基金项目:四川省科技厅基本科研业务专项基金资助项目 (A-2014N-10)
作者简介:崔红梅 (1973—) ，女，助理研究员，从事中药化学和质量评价研究。Tel:13551123569，E-mail:245416698@ qq． com
摘要:目的 建立 HPLC同时定量测定采自西藏、四川阿坝毛果婆婆纳中梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ的方法。方
法 采用外标法，Gemini C18色谱柱 (110 ，4. 60 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈 (A)-水 (B)梯度洗脱
(0 ～ 13 min，3%A;13 ～ 20 min，3% ～15%A;20 ～ 50 min，15%A;50 ～ 60 min，15% ～21%A;60 ～ 70 min，21%A;
70 ～ 110 min，21% ～100%A)，体积流量 1. 0 mL /min，柱温 25 ℃，检测波长 203 nm。结果 梓醇、桃叶珊瑚苷、胡
黄连苷Ⅱ的线性范围分别为 0. 101 5 ～ 5. 076 μg，0. 093 2 ～ 4. 66 μg，0. 043 6 ～ 2. 18 μg;平均加样回收率分别为
98. 9% (ＲSD 1. 0%)，103. 8% (ＲSD 0. 7%) ，98. 8% (ＲSD 1. 9%)。结论 10 个产地婆婆纳中梓醇、桃叶珊瑚苷、
胡黄连苷Ⅱ的量差异明显，高低差异近 10 倍之多。
关键词:毛果婆婆纳;梓醇;桃叶珊瑚苷;胡黄连苷Ⅱ;环烯醚萜苷;高效液相色谱
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)04-0810-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 04. 025
Simultaneous determination of three iridoid glycosides from Veronica eriogyne
H． Winkl by HPLC
CUI Hong-mei* ， LUO Heng， YANG Jun， YANG An-dong
(Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences，Chengdu 610041，China)
ABSTＲACT:AIM To develop a method for determining catalpol，aucubin and picroside Ⅱ from Veronica erio-
gyne H． Winkl collected from Tibet and Si’chuan Province by HPLC． METHODS External standard method
and the chromatographic Gemini C18 Column (110 ，4. 60 mm × 250 mm，5 μm)were adopted with mobile
phase consisting of acetonitrile (A)-water (B)in a gradient elution manner． The detected wavelength was set up
at 203 nm and column temperature was maintained at 25 ℃ ． ＲESULTS The linear ranges were 0. 101 5 － 5. 076
μg for catalpol，0. 093 2 － 4. 66 μg for aucubin，and 0. 043 6 － 2. 18 μg for picroside Ⅱ，respectively． The aver-
age recoveries of catalpol，aucubin and picroside Ⅱ were 98. 9% (ＲSD 1. 0%)，103. 8% (ＲSD 0. 7%)and
98. 8% (ＲSD 1. 9%) ，respectively． CONCLUSION The differences of contents of three constituents from V．
eriogyne H． Winkl collected from ten growing areas are large，almost tenfold．
KEY WOＲDS:Veronica eriogyne H． Winkl;catalpol;aucubin;picroside Ⅱ;iridoid glycoside;HPLC
婆婆纳为玄参科 Scrophulariaceae 婆婆纳属 Ve-
ronica植物，包括长果婆婆纳 V． ciliata Fisch 毛果
婆婆纳 V． eriogyne H． Winkl 及同属多种植物［1］，
产于我国西北各地及四川、西藏［1-2］，为西北高海
拔及高寒植物。全草可入药，具有清疮热、生肌、
止血功效，用于疮疡、湿疹、皮肤溃烂、出血等症
状［1］。《中华本草》记载其具有清热解毒、祛风利
湿等功效，主治肝炎、胆囊炎、风湿痛、荨麻疹
等［2］，被收录于 《西藏常用中草药》和 《国际化
妆品原料字典和手册 (第十二版)》。文献资料显
示，苯乙醇苷类和环烯醚萜苷类化合物是婆婆纳属
植物中的主要化学成分［3］。作者前期已从毛果婆
婆纳中分离得到两种环烯醚萜苷类化合物———桃叶
珊瑚苷 (aucubin，AU)和梓醇。桃叶珊瑚苷具有
018
2015 年 4 月
第 37 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2015
Vol． 37 No． 4
广泛的药理活性，它和其衍生物桃叶珊瑚苷元
(aucubigenin，AG)具有护肝解毒、抗炎、抗氧
化、抗衰老、抗骨质疏松和神经营养等作用［4］，
近年来愈来愈引起重视［5-7］。梓醇不仅能降糖利
尿［3］，保护高糖诱导 SH-SY5Y 细胞凋亡［8］，而且
对局灶性脑缺血后引起的神经血管单元病变有明显
的保护作用，并能促进脑缺血后神经功能的恢
复［9］。宋冲等［10］发现，梓醇能显著缓解阿尔茨海
默病 (Alzheimer’s disease，AD)模型小鼠的焦虑
情绪，这种改善作用可能是通过改善神经元及突触
的丢失来实现的，还可显著减少 AD模型小鼠脑内
老年斑数量，改善其空间学习记忆能力［11］。另外，
胡黄连苷等其他环烯醚萜苷类均具有广泛的药理活
性［7，12-13］。本实验建立了 HPLC 同时测定婆婆纳中
梓醇、桃叶珊瑚苷和胡黄连苷Ⅱ这 3 种环烯醚萜苷
的方法，对采自西藏、四川阿坝等 10 个不同产地，
海拔 3 000 ～ 4 300 m 山坡上的 12 批药材进行了测
定，为该植物纳质量评价提供科学依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 型高效液相色谱仪系统，由
G1311A四元梯度泵、G1315D 型二极管阵列检测
器、G1329A型全自动进样器、ChemStation 高效液
相色谱化学工作站组成 (美国安捷伦公司);
XS205DU电子天平 (瑞士梅特勒—托利多公司) ;
岛津 UV-2401PC 紫外分光光度计 (日本岛津
公司)。
乙腈为色谱纯 (美国 Fisher 公司);水为超纯
水 (自制) ，其余试剂为分析纯 (国药集团化学试
剂有 限 公 司) ;对 照 品 梓 醇 (批 号 110808-
201009)、桃叶珊瑚苷 (批号 111761-200601)、胡
黄连苷Ⅱ (批号 111596-200402)均购自中国食品
药品检定研究院，供含量测定用。
10 批样品采自主产区或购自主产区药材市场，
2 批为全人工栽培，均由西藏自治区藏医药研究院
生药研究所提供。经西藏自治区藏医药研究院生药
研究所孟千万博士鉴定为玄参科婆婆纳属植物毛果
婆婆纳 Veronica eriogyne H． Winkl的全草。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Gemini C18色谱柱 (110 ，4. 60
mm ×250 mm，5 μm);柱温 25 ℃;检测波长 203
nm;流动相为乙腈 (A)-水 (B)梯度洗脱 (0 ～
13 min，3%A;13 ～ 20 min，3% ～ 15% A;20 ～ 50
min，15%A;50 ～ 60 min，15% ～ 21% A;60 ～ 70
min，21% A;70 ～ 110 min，21% ～ 100% A);体
积流量 1. 0 mL /min。
2. 2 检测波长的选择 婆婆纳供试品溶液进样后
经二极管阵列检测器检测并储存全部光谱 (190 ～
400 nm)，3D光谱图显示在 190 nm 处对照品桃叶
珊瑚苷有最大吸收，经光谱等高线分析优化检测条
件，选择 203 nm为检测波长，杂质干扰更少。
2. 3 对照品溶液的制备 分别精密称取梓醇、桃
叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ对照品 12. 69、11. 65、
5. 45 mg，置 25 mL 棕色量瓶中，用流动相溶解并
定容，摇匀，分别制成含梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄
连苷Ⅱ0. 507 6、0. 466、0. 218 mg /mL 的对照品溶
液。分别精密吸取上述对照品溶液适量，置 10 mL
量瓶中，加流动相定容，摇匀，制成含梓醇、桃叶
珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ50. 76、46. 6、10. 9 μg /mL 的
混合对照品溶液。
2 . 4 供试品溶液的制备 取婆婆纳药材粉末 (过
三号筛)约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，
精密加入 10%乙醇 25 mL，称定质量，超声处理
(功率 250 W，频率 40 kHz)60 min，放冷，用
10%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液
5 mL，蒸干，以流动相溶解定容到 5 mL，0. 45 μm
滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2. 5 流动相的选择 参考文献，以不同比例的乙
腈-水为流动相，在 Gemini C18 色谱柱 (110 ，
4. 60 mm × 250 mm，5 μm)上进行试验，结果乙
腈 (A)-水 (B)梯度洗脱 (0 ～ 13 min，3% A;
13 ～ 20 min，3% ～ 15% A;20 ～ 50 min，15% A;
50 ～ 60 min，15% ～ 21% A;60 ～ 70 min，21% A;
70 ～ 110 min，21% ～ 100% A)，柱温 25 ℃;体积
流量 1. 0 mL /min 时达到满意的分离效果 (见图
1)。
2. 6 方法学考察
2. 6. 1 系统适应性试验 精密吸取供试品溶液 10
μL注入液相色谱仪。结果以桃叶珊瑚苷计理论塔
板数 15 371，分离度 1. 46，对称因子 0. 97。
2. 6. 2 方法专属性即峰纯度检查 为检查样品
HPLC色谱峰是单个还是多个成分，采用二极管阵
列检测器对主峰梓醇、桃叶珊瑚苷和胡黄连苷Ⅱ的
峰纯度进行检查。结果纯度因子均大于 995. 00
(阈值)。
2. 6. 3 线性关系 分别精密吸取 “2. 3”项下的
对照品溶液 2、5、10、20、50、100 μL 注入液相
色谱仪，记录峰面积。以峰面积 (A)为纵坐标、
进样量 (M，μg)为横坐标，进行线性回归，得
118
2015 年 4 月
第 37 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2015
Vol． 37 No． 4
A． 对照品 B． 样品 1． 梓醇 2． 桃叶珊瑚苷 3． 胡黄连苷Ⅱ
A． reference substances B． sample 1． catalpol 2． aucubin
3． picroside Ⅱ
图 1 对照品及婆婆纳样品 HPLC图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances and
V． eriogyne H． Winkl sample
梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ线性回归方程分别
为 A = 770. 0M + 8. 785 (r = 0. 999 9)，线性范围
0. 101 5 ～ 5. 076 μg;A = 861. 2 M + 7. 858 (r =
0. 999 9) ，线性范围 0. 093 2 ～ 4. 66 μg;A = 2 737
M + 0. 063 (r = 0. 999 9) ，线性范围 0. 021 8 ～ 1. 09
μg。线性关系良好。
2. 6. 4 精密度试验 精密吸取 “2. 3”项下的对
照品溶液 10 μL，连续进样 6 次，记录峰面积，计
算梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ峰面积 ＲSD 分
别为 0. 02%，0. 03%，0. 08%，表明仪器精密度
良好。
2. 6. 5 重复性试验 取同批样品粉末共 6 份，每
份约 0. 5 g，精密称定，按供试品溶液的制备和测
定方法操作测定，结果梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连
苷ⅡＲSD分别为 1. 4%、0. 7%、1. 7%，可见该方
法重复性良好。
2. 6. 6 稳定性试验 取本品粉末约 0. 5 g，按供试
品制备方法制备样品液，分别于配制后 0、2、4、
8、12 h，取 10 μL 注入液相色谱仪，考察样品峰
面积的变化。结果 12 h 内，峰面积变化很小，梓
醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连苷Ⅱ峰面积 ＲSD 分别为
1. 9%、0. 4%、0. 6%，表明供试品溶液及方法稳
定性良好。
2. 6. 7 准确度试验和范围考察 结合范围的考察
进行准确度试验。因 12 批婆婆纳药材中桃叶珊瑚
苷的质量分数为 0. 6‰ ～7. 5‰，平均值 3. 0‰，均
值的 40% 约为 1. 2‰，按 “2. 4”项和 “2. 6. 8”
项下操作，注入液相色谱仪的桃叶珊瑚苷量约
0. 22 μg，所以设计范围的低限值为 0. 2 μg 左右;
均值的 6 倍约为 18. 0‰，按供试品溶液的制备和
定量测定方法操作，注入液相色谱仪的桃叶珊瑚苷
量约 3. 2 μg，所以设计范围的高限值为 3. 5 μg 左
右;结合准确度试验，取两个不同质量 (0. 03 g，
0. 6 g)的同批样品粉末各 6 份，共 12 份，精密称
定，分别精密加入一定量的梓醇、桃叶珊瑚苷、胡
黄连苷Ⅱ对照品溶液，分别测定在范围低限值和高
限值处的加样回收率，结果见表 1 ～ 3。
表 1 梓醇的加样回收率
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests for catalpol
称样量 /
mg
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均值 /
%
ＲSD /
%
35. 5 0. 153 0. 167 0. 315 4 97. 5
32. 3 0. 139 0. 167 0. 309 8 102. 3
36. 2 0. 156 0. 167 0. 322 8 100. 1
41. 0 0. 176 0. 167 0. 340 8 98. 5 98. 9 2. 1
37. 2 0. 160 0. 167 0. 320 0 95. 8
34. 9 0. 150 0. 167 0. 315 4 99. 0
636. 0 2. 735 2. 538 5. 189 96. 7
662. 5 2. 849 2. 538 5. 356 98. 8
665. 0 2. 860 2. 538 5. 367 98. 8
631. 3 2. 715 2. 538 5. 228 99. 0 98. 3 0. 9
625. 8 2. 691 2. 538 5. 168 97. 6
634. 7 2. 729 2. 538 5. 239 98. 9
表 2 桃叶珊瑚苷的加样回收率
Tab. 2 Ｒesults of recovery tests for aucubin
称样量 /
mg
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均值 /
%
ＲSD /
%
35. 5 0. 242 0. 233 0. 484 6 104. 0
32. 3 0. 220 0. 233 0. 460 0 102. 8
36. 2 0. 247 0. 233 0. 490 3 104. 4
41. 0 0. 280 0. 233 0. 519 6 102. 9 103. 8 0. 7
37. 2 0. 254 0. 233 0. 498 5 105. 0
34. 9 0. 238 0. 233 0. 480 2 103. 9
636. 0 4. 340 4. 522 5 8. 825 99. 2
662. 5 4. 521 4. 522 5 8. 967 98. 3
665. 0 4. 538 4. 522 5 8. 976 98. 1
631. 3 4. 308 4. 522 5 8. 871 100. 9 100. 2 1. 1
625. 8 4. 270 4. 522 5 8. 837 101. 0
634. 7 4. 331 4. 522 5 8. 838 99. 6
由以上实验结果可见:桃叶珊瑚苷和梓醇、胡
黄连苷Ⅱ分别在 0. 18 ～ 3. 6 μg，0. 12 ～ 2. 1 μg，
218
2015 年 4 月
第 37 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2015
Vol． 37 No． 4
表 3 胡黄连苷Ⅱ的加样回收率
Tab. 3 Ｒesults of recovery tests for picroside Ⅱ
称样量 /
mg
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均值 /
%
ＲSD /
%
35. 5 0. 048 0. 043 6 0. 091 3 99. 5
32. 3 0. 044 0. 043 6 0. 087 7 101. 1
36. 2 0. 049 0. 043 6 0. 091 4 97. 6
41. 0 0. 055 0. 043 6 0. 097 0 95. 6 98. 8 1. 9
37. 2 0. 050 0. 043 6 0. 093 2 98. 6
34. 9 0. 047 0. 043 6 0. 090 9 100. 4
636. 0 0. 859 0. 872 1. 712 9 98. 0
662. 5 0. 894 0. 872 1. 789 4 102. 6
665. 0 0. 898 0. 872 1. 773 9 100. 5
631. 3 0. 852 0. 872 1. 739 3 101. 7 99. 9 1. 9
625. 8 0. 845 0. 872 1. 697 4 97. 8
634. 7 0. 857 0. 872 1. 717 5 98. 7
0. 034 ～ 0. 7 μg (高低限值分别对应按 “2. 4”项
和“2. 6. 8”项下操作，注入 HPLC 仪测定的量)
范围内能准确测定。
2. 6. 8 样品测定 按上述方法，分别精密吸取对
照品溶液 10 μL与供试品溶液 10 μL，注入液相色
谱仪，测定，结果见表 4。
表 4 不同来源婆婆纳药材中梓醇、桃叶珊瑚苷、胡黄连
苷Ⅱ的质量分数 (n =2)
Tab. 4 Contents of catalpol，aucubin and picroside Ⅱ in
V． eriogyne H． Winkl (n =2)
编号 样品来源
梓醇 /
(mg·g － 1)
桃叶珊瑚苷 /
(mg·g － 1)
胡黄连苷Ⅱ /
(mg·g － 1)
1 甘露藏药药用 4. 6 7. 5 1. 5
2 墨竹贡卡罗纳 4270 m 4. 1 6. 5 2. 7
3 林芝鲁纳镇 1. 3 2. 2 1. 4
4 鲁朗 3391 m 0. 8 1. 0 2. 0
5 墨竹贡卡扎西岗 4098 m 1. 8 1. 7 1. 2
6 墨竹贡卡日多 4266 m 2. 6 2. 8 1. 7
7 墨竹贡嘎县尼玛江日 4025 m 5. 0 4. 9 1. 7
8 贡布江达县 3497 m 0. 6 0. 6 0. 1
9 曲松县(山南)4164 m 1. 5 1. 3 1. 6
10 四川阿坝 3. 0 3. 9 3. 1
11 全人工栽培 0. 8 2. 2 1. 2
12 全人工栽培 0. 7 2. 1 1. 2
3 讨论
分别考察了甲醇、50%乙醇、10%乙醇、流动
相 (乙腈-水 3 ∶ 97)、水等不同提取溶剂;超声、
回流等不同提取方式;并进行了提取时间为 15、
30、60 min，提取次数为 1 次、2 次，提取溶剂用
量为 20、50、100 倍药材量的考察。结果表明，以
50 倍药材量的 10%乙醇超声 60 min，1 次即基本
提取完全，与回流提取结果相差很小，因此本实验
采用该提取方法。
由测定结果可知，不同产地婆婆纳中梓醇、桃
叶珊瑚苷和胡黄连苷Ⅱ的含有量差别显著，高低差
异近 10 倍之多，说明药材产地的不同环境和土壤
条件或采收季节的差异对药材内在活性成分影响显
著。现有标准都没有对婆婆纳中活性成分定量测定
提出要求，因此制订科学合理的婆婆纳成分测定方
法，控制药材质量势在必行。本研究建立的测定方
法简便易行，结果准确可靠，为探索制订完善的婆
婆纳药材质量标准提供了依据。
参考文献:
［1］ 青海省藏医院研究所，青海省药品检验所． 中国藏药:第
一卷［M］． 上海:上海科学技术出版社，1996:242-246．
［2］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草:第七
卷［M］． 上海:上海科学技术出版社，1999:404-405．
［3］ 田 亮，周金云． 婆婆纳属植物的研究进展［J］． 中药材，
2004，27(1) :68-70．
［4］ 康 桢，吴卫华，王俊杰，等． 桃叶珊瑚苷及其甙元的药
理研究进展［J］． 中 国 中 药 杂 志，2007，32 (24) :
2585-2587．
［5］ 薛宏宇，韩 震，李光坤，等． 桃叶珊瑚苷提取及对细胞
氧化损伤保护作用［J］． 光谱实验室，2013，30(5) :
2202-2205．
［6］ 郑 杰，刘 端，赵肃清，等． 杜仲叶桃叶珊瑚苷的酶法
提取及其抑菌活性［J］． 中药材，2012，35(2) :304-306．
［7］ 杨春辉，马 莉，魏振平． 环烯醚萜类化合物在防治糖尿
病方面研究进展［J］． 化学工业与工程，2011，28(6) :
68-73．
［8］ 杨清俊，李宗泽，朱艳凌，等． 梓醇对高糖诱导 SH-SY5Y
细胞凋亡的保护作用［J］． 中药药理与临床，2013，29
(3) :43-46．
［9］ 谭灵莉，崔丹丹，祝慧凤，等． 梓醇对脑缺血后神经血管
单元构筑的影响［J］． 中国药理学通报，2014，30(1) :
44-48．
［10］ 宋 冲，楚亚楠，贺桂琼，等． 梓醇对 APP /PS1 双转基因
小鼠焦虑行为和脑内神经元的影响［J］． 重庆医科大学学
报，2013，38(6):598-601．
［11］ 宋 冲，楚亚楠，贺桂琼，等． 梓醇对淀粉样蛋白前体 /早
老素 1 双转基因小鼠老年斑和学习记忆的影响［J］． 中华
神经科杂志，2013，46(4):265-268．
［12］ 赵 丽，郭云良，李晓丹，等． 胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤
后神经元特异性烯醇化酶表达的影响［J］． 中国药理学通
报，2014，30(2) :192-199．
［13］ 逢芳芳，张美增，张 睿，等． 胡黄连苷Ⅱ在大鼠脑缺血
损伤中的抗氧化作用及其最佳治疗剂量和时间窗［J］． 中
国中医药信息杂志，2013，20(11) :40-43．
318
2015 年 4 月
第 37 卷 第 4 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
April 2015
Vol． 37 No． 4