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年第 1 期2016
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Study on the curative effect of different concentration of Dicranostigma leptopodum
(Maxim) Fedde total alkaloid hydrochloride against Orf
JIA Ling1, MA Zhi-hong2, DANG Yan2, GOU Xiang-zhen2, RONG Wei-zhong2, ZHANG Li-min2
(1. Bali Town Veterinary Station, Jinning Animal Husbandry and Veterinary Bureau in Gansu Province, Jinning Gansu 743400;
2. Gansu Institute of Animal Science and Veterinary Medicine，Pingliang Gansu 744000，China)
Abstract：Experiment was conducted on the treatment of sheep infected with Orf virus for determining the optimum
therapeutic concentration of Dicranostigma leptopodum (Maxim) Fedde total alkaloid hydrochloride against Orf. Firstly, 25
pathological models of Orf were established through infecting the sheep with Orf virus and randomly divided into five groups
（Ⅰ -Ⅴ）. Sheep of group I -Ⅳ were respectively treated with different concentrations of total alkaloid hydrochloride of
Dicranostigma leptopodum (Maxim) Fedde, and group Ⅴ served as control group. The results showed that significant
differences were found among the groups (P＜0.01) except that there was no difference between group Ⅲ and groupⅣ (P>
0.05). The regression equation between the dosage of total alkaloid hydrochloride of Dicranostigma leptopodum (Maxim)
Fedde and the healing rate of Orf was: y=1.709 3x+3.547 7，R2=0.977 2, and the EC50 was 7.073 7 mg/mL.
Key words：Dicranostigma leptopodum (Maxim) Fedde; Orf; optimum therapeutic concentration
态研究[J].药物分析杂志，1982，2（5）：273-277.
[6] 赵 祁，韩 寅，杜宇平，等.秃疮花提取物对红细胞氧
化性溶血的抑制机制[J].兰州大学学报：医学版，2006，
32（3）：40-45.
[7] 刘大护，张天才，柳军玺，等.秃疮花生物碱类化学成分
研究[J].中草药，2011，42（8）：1505-1508.
[8] 马志宏，张莉敏，党 岩，等.红茂草总生物碱酸水提取
法研究[J].中兽医医药杂志，2013，32（4）：32-35.
[9] 贾 凌，马志宏.红茂草总生物碱醇提取法与酸水提取法
比较研究[J].中兽医医药杂志，2013，32（5）：32-34.
黄花补血草核型分析
张超强，郑秀芳
（河西学院农业与生物技术学院，甘肃张掖 734000）
摘 要：采用常规压片法对黄花补血草体细胞染色体进行核型分析。结果表明，黄花补血草体细胞染色体数
2 n=16，为二倍体植物；黄花补血草的 8对染色体中有 4对为中部着丝粒染色体（m型），4对为近中着丝粒染色体
（sm型）；核型公式为 2 n=2 x=16=8 m+8 sm，属 2B类核型；染色体绝对长度变化范围为 2.5-5.1 μm，相对长度变
化范围为 7.88 %~18.29 %，最长染色体与最短染色体之比为 2.32，核型不对称系数为 60.71%。
关键词：黄花补血草；染色体；核型分析
中图分类号：S682.39 文献标志码：A 文章编号：1000- 6354（2016）01- 0046- 03
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2016.01.014
收稿日期：2015- 10- 16
基金项目：河西学院科研创新与应用校长基金项目（hxxyxzjj- 201003）
作者简介：张超强(1978- )，男，讲师，硕士，主要从事植物生理生化
与分子生物学研究，E- mail: zhangchaoqiang2007@163.com
通讯作者：郑秀芳(1965- )，女，副教授，主要从事植物生理生化与
生物技术研究，E- mail: xfz2188- @163.com
黄花补血草 Limonium aureum (L.) Hill. 属白花丹科
（Plumbaginaceae）补血草属多年生草本植物 [1]，具有繁殖容
易、极耐干旱、盐碱等特点，常分布于沙漠、戈壁滩和盐化
草甸等生境，能防风固沙，具有重要的生态价值 [1]，该植物
花期长，具有很高的观赏价值，可做切花和干花材料 [2，3]，
该植物还具有止痛、消炎补血、活血等功效，有较高的药用
价值 [4，5]，因此开发前景广阔。有关补血草的研究多集中在
栽培技术、组织快繁、种子保藏、抗性及药用成分等方面 [6]，
黄花补血草染色体核型分析未见报道。笔者等对黄花补血
草核型进行分析，并与已报道的二色补血草 [7]、深波叶补
血草 [8]和杂种补血草 [8]核型进行比较，旨在为该属植物的
种质鉴定、新品种培育及起源、系统演化及种间亲缘关系
等的深入研究提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
实
验
技
术
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黄花补血草种子，采集于民勤沙生植物园。
1.2 方法
将黄花补血草种子用 10 %的次氯酸钠溶液消毒，冲
洗干净后用蒸馏水浸泡 12 h，然后转入铺有湿滤纸的培
养皿，25 ℃恒温培养。当种子幼根长出 0.5 cm 取出，在
0.05 %的秋水仙素和 0.003 mol/L 8 -羟基喹啉混合液
（V∶V=1 ∶1）中预处理 2 h（上午 8：00-10：00），蒸馏水冲洗
后用卡诺固定液（无水酒精∶冰醋酸为 1∶1）固定约 20 h，用
蒸馏水冲洗后在 1 mol / L 的盐酸 60 ℃恒温水浴解离
5 min，卡宝品红染色 25 min，取根尖压片，在 Olympus
BH-2 光学显微镜下观察并拍照，以上步骤操作在室温
（20 ℃左右）条件下进行。选取 30 个染色体形态清晰、分
散性良好的细胞确定黄花补血草的染色体数目，选取 5 个
来源不同个体且分散良好的中期分裂相并拍照，打印照片
后测量染色体，根据 5 个分裂相染色体形态的平均值进行
核型分析。染色体基数和核型分析依据李懋学等 [9]的分析
标准进行，染色体类型分析按照 Levan 等 [10]的分类系统，
核型不对称系数（As.K%）按 Arano [11]的方法计算，比值越
大越不对称，核型类型分析参照 Stebbins[12]的分类标准。
2 结果及分析
2.1 黄花补血草的染色体数目及核型
对 30 个以上染色体分散良好的中期分裂细胞进行观
察计数，确定黄花补血草体细胞染色体数 2n=16，为二倍
体植物，见图 1。根据其染色体的长度、臂比、着丝粒的位
置、随体的有无和位置等进行同源染色体配对，可配成 8
对，为二倍体。这与史燕山等 [7]和张芹等 [8]报道的补血草的
染色体数目和倍体结果一致。
图 1 黄花补血草的染色体形态及核型
Fig.1 Chromosome and karytype of Limonium aureum
(L.) Hill.
黄花补血草体细胞染色体核型参数见表 1。根据
Levan的染色体分类标准，8对染色体中有 4对（分别为3、4、
6、7 对）为近中着丝粒染色体（sm 型），其余 4 对（分别为
1、2、5、8 对）均为中间着丝粒染色体（m 型），在研究中还
发现 4 号染色体有随体。根据以上数据，可确定黄花补血
草的核型公式是 2 n = 2 x = 16 =8 m+8 sm。黄花补血草
染色体绝对长度变化范围为 2.5-5.1 μm，属中等大小染
色体 [13]，相对长度的平均值在 7.88%~18.29%之间，臂比值
变化范围为 1.07-2.20，最长和最短的染色体比值为 2.32，
臂比大于 2∶1 的染色体为 3 对，根据 Stebbins 的“不对称核
型分析”分类标准，黄花补血草的核型属 2B 类核型；核型
不对称系数（As.K%）为 60.71%。根据郭幸荣等 [14]染色体
长度分类表可知，第 1、2 对染色体为长染色体，第 3 对为
中长染色体，第 4、5、6、7 为中短染色体，第 8 对为短染色
体。黄花补血草的染色体核型模式见图 2。
表 1 染色体黄花补血草核型分析
Table 1 Karyotype analysis of Limonium aureum (L.) Hill.
注：* 随体染色体，随体长度不包括在内。
图 2 黄花补血草染色体核型模式图
Fig.2 Idiograms of Limonium aureum (L.) Hill.
2.2 核型比较
已报道的二色补血草和深波叶补血草 [8]以及本研究中
黄花补血草的核型均为 2B 型，核型不对称系数分别为
56.12%、58.47%和 60.71%，杂种补血草的核型类型为 1 B，核
型不对称系数为 56.72%，根据 Levitzky-Stebbins 对高等植
物核型进化中的对称-原始、不对称-进化的观点，四者均
属于进化程度较低的类型，并且具有较近的亲缘关系。在
进化程度上四者由低到高依次为杂种补血草、二色补血
草、深波叶补血草和黄花补血草；从亲缘关系上来说，二色
补血草、深波叶补血草和黄花补血草的亲缘关系可能比杂
1 2 3 4 5 6 7 8
1
2
3
*4
5
6
7
8
染色体序号
相对长度 /%
长臂 短臂 全长
臂比 类型
9.46
9.15
9.78
7.89
6.31
6.94
6.31
4.73
m
m
sm
sm
m
sm
sm
m
8.83
6.94
5.68
3.79
4.73
3.15
3.15
3.15
18.29
16.09
15.24
11.68
11.04
10.09
9.46
7.88
1.07
1.32
1.72
2.08
1.33
2.20
2.00
1.05
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
-1
-2
-3
-4
-5
-6
-7
-8
-9
-10
相
对
长
度
/%
实
验
技
术
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种补血草更近。
3 讨论
补血草属植物全世界约 300 种 [15]，有关该属植物染色
体数目和倍性报道的有 40 种左右 [16,17]，多为二倍体，也有
少数为三倍体和六倍体，染色体基数为 x=6、7、8、9。本研
究中黄花补血草为二倍体，染色体数为 16 条，染色体基数
为 x=8，与史燕山等 [7]和张芹等 [8]的研究结果一致，但在臂
比、最长与最短染色体之比等具体核型参数与以上的报
道有差异，说明染色体的数目具有很高的稳定性和再现
性，而染色体大小、形态可能因受不同取材地点影响而表
现多样性，在其他物种的染色体研究中也有不同聚群核型
差异的报道 [18-21]，但不同物种、不同居群染色体变异大小
各异，Stebbins 认为染色体变异幅度大小与物种核型对称
性程度有关，核型不对称性程度越高，其染色体变异越大，
相反，变异越小。本研究中黄花补血草核型不对称系数相
对较低，因此不同居群染色体变异相对较小。
黄花补血草的种子萌发速率较快，应掌握好预处理开
始时间，以胚根长度不超过 0.5 cm 为宜。若过长，则细胞
分裂相减少，催芽控制在 2-3 d 即可。
试验中发现，前一年收集的黄花补血草种子发芽率明
显高于当年的种子，且发芽速度也快，这可能与越冬时低
温对种子的影响有关。因此，观察黄花布血草根尖染色体
时，用上一年越冬后的种子为宜。
参考文献：
[1] 尤 佳，王文瑞，卢 金，等.盐胁迫对盐生植物黄花补
血草种子萌发和幼苗生长的影响 [J].生态学报，2012，
32（12）：3825-3833.
[2] 罗广元，唐志红.甘肃省补血草属植物的分布与利用[J].
特种经济动植物，2001，4（9）：30.
[3] 顾峰雪，潘晓玲.中国西北干旱荒漠区盐生植物资源与
开发利用[J].干旱区研究，2002，19（4）：17 -20.
[4] 中国科学院冰川冻土沙漠研究所.中国沙漠地区药用植
物[M].兰州：甘肃人民出版社，1973.
[5] 中国人民解放军新疆军区生产建设兵团医科专科学
校.新疆中草药手册[M].乌鲁木齐：新疆工程建筑出版
社，1970.
[6] 田福平，时永杰，陈子萱 .我国补血草属野生植物资源
的分布及研究现状[J].草业与畜牧，2010（3）：49-52.
[7] 史燕山，骆建霞，苏世欣，等 .二色补血草核型分析 [J].
天津农学院学报，2006，13（4）：7-9.
[8] 张 芹，李保会，张 凡 .3 种补血草属植物的核型分
析[J].河北农业大学学报，36（2）：65-68.
[9] 李懋学，陈瑞阳 .关于植物核型分析的标准化问题 [J].
武汉植物研究，1985，3（4）：297-302.
[10] Levan A, Fredga K, Sandberg A A. Nomenclatrue for
centromeric position of chromosomes [J].Hereditas, 1964,
52: 201-220.
[11] Arano H. Cytological studies in subfamily carduoideae
(Compositae) of Japan, IX. The karyotype analysis and
phylogentic considerationson Pertya and Ainsliaca [J].
Bot Mag(Tokyo),1963,76:32-40.
[12] Stebbins G L.Chromosomal evolution in higher plants [M].
London:Edward Arnold,1971：85-104.
[13] 卢龙斗，常重杰 .遗传学实验技术 [M].北京：科学出版
社，2007：23-28.
[14] Kuo S R,Wang T T, Huang T C .Karyotype analysis of
some Formosan gymnosperms [J]. Taiwania，1972，17:66.
[15] 中国科学院植物志编委会.中国植物志[M].北京：科学
出版社，1979，60（1）：28-29.
[16] Brullo S, Pavone P. Chromosome numbers in the Sicillian
species of “Limonium”Miller (“Plumbaginaceae”) [J].
Anales del Jardin Botánico de Madrid,1980,37(2):535-555.
[17] Artelari R, Kamari G.A karyological study of ten Lim
onium species (Plumbaginaceae) endemic in the Ionian
area greece[J]. Willdenowia,1986,15(2):497-513.
[18] 刘庆华，王奎玲，王 玮，等.美丽胡枝子核型分析[J].
西北植物学报，2009，29（8）：1595-1598.
[19] 袁 艺，王 莲，王小娟，等.不同居群鱼腥草的核型比
较[J].园艺学报，2008，35（9）：1377-1383.
[20] 刘华敏，智 丽，赵丽华，等 .四种野生百合核型分析
[J].植物遗传资源学报，2010，11（4）：469-473.
[21] 魏玉杰，何庆祥，张金文，等 .中国不同地区罂粟的核
型比较[J].草业学报，2012，21（2）：171-179.
Karyotype analysis of Limonium aureum (L.) Hill.
ZHANG Chao-qiang, ZHENG Xiu-fang
( College of Agriculture ＆ Biotechnology, Hexi University, Zhangye Gansu 734000, China)
Abstract：The chromosome numbers and karyotype of Limonium aureum (L.) Hill was studied by squash method. The results showed
that Limonium aureum (L.) Hill. was diploid with 2n=16 chromosomes in its somatic cell. Among its 8 pairs of chromosomes, 4
pairs were metacenters(Type m) and 4 were submetacenters(Type sm). Karyotype formula of Limonium aureum (L.) Hill. could
be described as 2n=2x=16=8m+8sm, and its karyotype belonged to 2B type. Pure length of chromosomes was in the range
from 2.5 μm to 5.1 μm with relative length from 7.88% to 18.29%. Length ratio of the longest chromosome to the shortest one
was 2.32 and the asymmetry index was 60.71%.
Key words：Limonium aureum (L.) Hill; chromosome; karyotype analysis
实
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