全 文 ：通脉降脂片中笔管草特征图谱研究
黄 炜1，汪建君2(1. 福建德泰杏福医药有限公司 福州 350008;2. 厦门市食品药品质量检验研究院 厦门
361012)
摘要:目的 研究通脉降脂片中笔管草 HPLC特征图谱。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水梯度洗脱;检测波长为 265nm;
柱温为 30℃。结果 在通脉降脂片色谱中，出现与笔管草两个主色谱峰保留时间一致的特征峰。结论 本方法简单、准确、快速、重现性好，
可用于鉴别通脉降脂片中的笔管草。
关键词:通脉降脂片;笔管草;特征图谱
中图分类号:Ｒ927 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2016)-06-0254-0064-03
作者简介:黄 炜，男(1982. 8 －)。职称:主管药师。研究方向:药物
分析。联系电话:13358232305，E-mail:670335477@ qq. com
Studies on the Characteristic Chromatogram of Equisetum Debile Ｒoxb. in
Tablets for Dredging Meridians and Lowering Blood Lipid
HUANG Wei1，WANG Jian-jun2(1. Fujian Detai Xingfu Pharmaceuticals co. ，LTD，Fuzhou 350001，China;
2，Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control，Xiamen 361012，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To study the Characteristic Chromatogram of Equisetum debile Ｒoxb. in tablets for
Dredging Meridians and Lowering Blood Lipid(TDMLBL)by HPLC. METHODS Octadecyl silane bonded silica
gel as filling agent;Eluted with methanol-water gradient;Detection wavelength was 265nm;Column temperature was
30℃. ＲESULTS In chromatography of TDMLBL，appear two characteristic peaks consistent with the retention time
of main chromatographic peaks of Equisetum debile Ｒoxb. CONCLUSION This method is simple，accurate，fast，
and has a good reproducibility. It can be used to identify Equisetum debile Ｒoxb. in TDMLBL.
KEY WOＲDS:Tablet for Dredging Meridians and Lowering Blood Lipid(TDMLBL);Equisetum debile Ｒoxb.;Characteristic Chromat-
ogram
通脉降脂片是由笔管草、川芎、荷叶、三七、花椒五味中药
组成的中药复方制剂，具有降脂化浊，活血通脉的功效，用于
治疗高血脂症，防治动脉粥样硬化〔1〕。笔管草为木贼科植物
笔管草 Equisetum debile Ｒoxb. 的干燥地上部分，有降血脂作
用〔2 ～ 4〕，收载于《福建省中药材标准》〔5〕。处方中笔管草用量
约占处方总量的 63. 8%，为君药，而现行标准无针对笔管草
的相关控制项目。目前笔管草的相关文献报道较少，化学成
分研究不足。为了整体控制药品质量，研究建立了笔管草的
特征图谱。建立的笔管草特征图谱方法简便，重复性好，可作
为通脉降脂片的特征图谱项目。
1 仪器与材料
Waters 2695 液相色谱仪，Waters 2998 二极管阵列检测
器，Empower 色谱工作站;Mettler XS105 电子天平，Mettler
AE200 电子天平;和达超声波仪(厦门李氏和达超声波设备有
限公司，功率 300W，频率 28kHz)。
甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
试验共收集 8 批笔管草、10 批通脉降脂片。8 批笔管草
中，7 批产自漳州，由厦门某制药公司提供，另 1 批产地未明，
由江西某制药公司提供。经鉴定，收集的 8 批笔管草均为木
贼科植物笔管草 Equisetum debile Ｒoxb. 的干燥地上部分。10
批通脉降脂片中，2 批产自厦门某制药公司，3 批产自吉林某
制药公司，5 批产自江西某制药公司。
2 方法的建立
2. 1 色谱条件 色谱柱为 Agilent ZOＲBAX SB-C18;以水为流
动相 A，以甲醇为流动相 B，按表 1 中的规定进行梯度洗脱;
柱温为 30℃;检测波长为 200 ～ 400nm;进样量 10μL。
表 1 流动相梯度洗脱条件
时间(min) 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0 ～ 5 90 10
5 ～ 10 90→75 10→25
10 ～ 40 75→55 25→45
40 ～ 50 55→40 45→60
50 ～ 70 40→15 60→85
70 ～ 75 15→90 85→10
75 ～ 80 90 10
在此条件下，提取 265nm波长处的色谱图。供试品溶液
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海峡药学 2016 年 第 28 卷 第 6 期
中笔管草的特征峰能与其他色谱峰达到较好分离。8 批笔管
草都出现了两个主要的色谱峰(见图 1)。
图 1 液相色谱图谱及相应色谱峰的光谱图
A 通脉降脂片样品;B 笔管草样品;C 笔管草阴性样品
2. 2 供试品溶液的制备 取本品 8 片(糖衣片除去糖衣)，
研细，加 60% 乙醇溶液 50mL 超声处理(功率 300W，频率
28kHz)30min，滤过，滤液蒸干，残渣加 60%乙醇溶液转移至
5mL量瓶中，加 60%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续
滤液，即得。
2. 3 对照药材溶液的制备 取笔管草对照药材 5g，加 60%
乙醇溶液 50mL超声处理(功率 300W，频率 28kHz)30min，滤
过，滤液蒸干，残渣加 60%乙醇溶液转移至 5mL 量瓶中，加
60%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3 方法学验证
3. 1 专属性 取供试品 8 片、笔管草对照药材 5g、笔管草阴
性样品 2. 83g(按处方比例折算)，照供试品溶液制备方法制
得供试品溶液、笔管草对照药材溶液和笔管草阴性样品溶液，
进样，记录色谱图。结果供试品色谱呈现与笔管草对照药材
两个主色谱峰保留时间一致的色谱峰，且相应色谱峰的光谱
图也一致，阴性无干扰，证明按本方法测定的特征峰有专属性
(见图 1)。
3. 2 耐用性
3. 2. 1 色谱柱及仪器的选择:考察了 Waters 2695、岛津 LC-
20AD、Agilent 1200 高效液相色谱仪分别采用 Agilent ZOBAX
SB-C18(5μm，4. 6 × 250mm)、Agilent Extend-C18(5μm，4. 6 ×
250mm)、Agilent TC-C18(5μm，4. 6 × 250mm)色谱柱对通脉降
脂片特征图谱的影响。结果表明使用上述仪器和色谱柱时，
均能从通脉降脂片中鉴别出笔管草的特征峰。
3. 2. 2 稳定性实验:取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分
别在 4、8、12、24h进样，结果均能从通脉降脂片中鉴别出笔管
草的特征峰。
3. 3 样品测定 按正文方法测定 10 批样品，结果(见表 2)。
表 2 样品测定结果
生产厂家 批号 结果
厦门某制药公司 100601 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
厦门某制药公司 100602 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
吉林某制药公司 20100701 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
吉林某制药公司 20100801 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
吉林某制药公司 20100901 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
江西某制药公司 090601 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
江西某制药公司 100301 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
江西某制药公司 100401 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
江西某制药公司 100801 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
江西某制药公司 100802 检出保留时间为 14. 9min、30. 0min的色谱峰，且紫外吸收光谱一致
4 讨论
4. 1 通过实验条件优化，比较了石油醚(60 ～ 90℃)、三氯甲
烷、乙酸乙酯、60%乙醇等溶剂的回流提取及超声提取效果。
结果表明，60%乙醇超声 30min得到的色谱信息最多，与通脉
降脂片制备工艺相吻合〔1〕。
4. 2 采用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-磷酸溶液、
甲醇-三乙胺溶液、乙腈-三乙胺溶液等体系作为流动相，考察
了对通脉降脂片成分分离的影响。结果表明，采用甲醇-水梯
度洗脱，在 80min内可洗脱完全，且目标色谱峰能与其他杂质
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Strait Pharmaceutical Journal Vol 28 No. 6 2016
峰分离，纯度满足要求。用 PDA检出笔管草的两个主特征峰
在 250nm及 350nm附近有两个较强的特征吸收带，与黄酮化
合物的紫外特征吸收相吻合，也与笔管草相关成分的报道吻
合〔6〕。
4. 3 在分离通脉降脂片成分时，通过与芦丁对照品保留时间
及光谱图的比较，发现通脉降脂片含有芦丁。曾参照《中国
药典》2010 年版一部项下山楂叶提取物、连翘提取物等品种
的特征图谱格式〔7，8〕，以芦丁为内标，以特征峰与芦丁的相对
保留时间为指标，规定通脉降脂片色谱应出现两个与芦丁相
对保留时间为某一定值的特征峰。考察耐用性时发现，采用
不同色谱柱时，特征峰与芦丁的相对保留时间不够稳定，误差
较差，最终还是采用对照药材对特征峰进行定位。
4. 4 通过 10 批次通脉降脂片特征图谱的测定，可以发现不
同厂家生产的药品都能检出笔管草的两个特征峰，但峰的大
小差异较大。如要进一步控制通脉降脂片药品质量，应固定
笔管草产地及加工方法，确认特征峰的具体结构，制定相应限
度。
参考文献
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哈尔医学院学报，2004，25(2):121-123.
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国医药科技出版社，2010，372-373.
〔8〕国家药典委员会编 .《中国药典》. 2010 年版 . 一部〔S〕. 北京:中
国医药科技出版社，2010，381.
荧光染色法测定生物制品中 DNA残留量的研究
王秋红* ，郑绍红(厦门特宝生物工程股份有限公司 厦门 361028)
摘要:目的 对荧光染色法测定生物制品中的 DNA 残留量进行初步的研究和分析，确定该方法用于 DNA 质量控制的可行性。方法 依据
《中国药典》2010 年版三部附录ⅨB《外源性 DNA残留量测定法》之荧光染色法。结果 该方法的线性、重复性、回收率均能满足生物制品中
DNA残留量检测的要求，如果用作生物制品行业适用的检测方法，应制备统一的 DNA标准品。结论 该方法具有简便、快速、可定量分析等优
点，可基本满足生物制品行业对 DNA残留量质量控制的要求。
关键词:荧光染色法;PicoGreen试剂;DNA残留量
中图分类号:Ｒ927 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2016)-06-0218-0066-03
作者简介:王秋红，女(1981. 7 －)。毕业于厦门大学细胞生物专业。在厦门特宝生物工程股份有限公司从事药品质量分析工作。联系电话:
13950172367，E-mail:wqiuhong@ amoytop. com
Studies on the Method of Ｒesidual DNA in Biological Products by Fluores-
cence Method
WANG Qiu-hong，ZHENG Shao-hong(Ximen Amoytop Biotech Co. Ltd. ，Xiamen 361028，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE Preliminary research and analysis of fluorescence staining method for the determina-
tion of residual DNA in biological products，determine the feasibility of this method used in the quality control of
DNA. METHODS According to the Chinese Pharmacopoeia 2010 edition three appendix IX B the exogenous DNA
residues determination by fluorescent staining method. ＲESULTS The method was linear，repeatability and recovery
rate can meet the biological products in residual DNA detection requirements，if used as the test methods applicable
in biological products industry，should prepare a unified standard DNA. CONCLUSION The method has the ad-
vantages of simple，rapid and quantitative analysis，and it can basically meet the requirements of the quality control of
residual DNA in the biological products industry.
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