全 文 ：（总 ）广西中医药 2013年 4月第 36卷第 2期
壮药笔管草的质量标准研究
刘华钢 广西医科大学 530021 南宁市双拥路22号
梁美艳 宁带连 韦松基 * 广西中医药大学 530001
摘 要 目的：制订壮药笔管草的质量标准，为该壮药资源的开发利
用提供科学依据。方法：采用薄层色谱法、HPLC法、水分测定法、灰分测定
法及浸出物测定法进行定性定量分析。结果：笔管草药材的薄层色谱中，
在与山柰素对照品同一位置显相同颜色的荧光斑点；HPLC定量分析中，
山柰素线性范围为0.049～0.539 μg（r=0.9998），平均回收率为98.41%，
RSD=1.78%。结论：所建立的分析方法简便、准确、可靠、重现性好，可作为
该药材的质量控制手段。
关键词 笔管草；山柰素；薄层色谱；高效液相色谱；质量标准
中图分类号：R284.1 文献标识码：A
文章编号：1003-0719（2013）02-0057-03
笔管草Equisetum debile Roxb.
是木贼科植物全草，现行质量标准
中尚未有其性状描述、鉴别、常规
检查及含量测定项，本次研究旨为
笔管草建立药材质量标准。据文献
报道，笔管草与木贼同为木贼科植
物，两者成分相似。黄酮类成分是
该科植物所含成分中数量最多，分
布最广的一类黄酮化合物，包括
山柰酚类、槲皮素类、草质素类等
20种，其中山柰素类为木贼科的特
征性成分［1-3］。据此，本文采用高效
液相色谱法和薄层色谱法对笔管
草中水解后的山柰素进行定性定
量分析，并进行常规检查（水分、总
灰分、酸不溶性灰分、浸出物），旨
为准确评价笔管草药材的质量提
供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1100高效液相
色谱仪（美国安捷伦科技公司）；日
本岛津LC-20A高效液相色谱仪
［岛津国际贸易（上海）有限公司］；
Shimadzu VP-ODS C18柱（5 μm，
4.6 mm×250 mm）；BP211D电子分
析天平（德国赛多利斯）；SB3200-T
（上海必能信超声有限公司）；
LG16-W高速离心机（北京医用离
心机厂）。
1.2 试药 笔管草10批药材采自
广西各地，均经广西中医药大学韦
松基教授鉴定为木贼科植物笔管
草Equisetum debile Roxb. 的全草；
山柰素对照品（购自中国药品生物
制品检定所，批号110861-200405，
供含量测定用）；硅胶G（青岛海洋
化工厂）；水（超纯水）；乙腈（色谱
纯）；其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层鉴别 取本品粗粉1 g，
加65%乙醇25 ml和盐酸1 ml，加热
水解1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加
水10 ml溶解，用乙酸乙酯提取2
次，每次10 ml，合并乙酸乙酯液，
基金项目：广西壮药质量标准研究项目资助（编号MZY2010019）
*通讯作者
标。考虑到石韦是方中君药，具有利
尿通淋、清热止血的功能，在制剂的
疗效中起主要作用，绿原酸是其主
要有效成分，目前采用HPLC法测定
以绿原酸含量的方法比较成熟，专
属性较强，因此确定以绿原酸含量
作为重要的评价指标。
3.2 采用HPLC法测定绿原酸的含
量时，由于绿原酸见光易分解，在实
验过程中要注意避光。
3.3 在本实验的数据处理中，采
用综合评分法［4］来优选提取工艺
条件。综合评分中将浸膏得率和绿
原酸含量按不同的权重系数得分
相加，其意义在于该制剂质量的好
坏、疗效的高低与浸膏得率及绿原
酸的含量均有关。
3.4 原方汤剂在我院已使用多
年，因其疗效显著而成为我院的品
牌制剂之一，但原汤剂沉淀较多，
口感差，不易保存，故本课题组将
其研制为颗粒剂。按试验确定的工
艺制备成样品，口感好，保存期长，
便于患者的携带，达到了提高制剂
质量和疗效的目的。
参考文献
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典［S］.一部.北京：中国医药科技出
版社，2010：83.
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颗粒的提取工艺［J］. 中国药房，
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试验法优选排石合剂的提取工艺
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［4］张春华，严云良，王建生，等.医药数
理统计［M］. 北京：科学出版社，
2001：192-193，205-209.
（2013-01-08 收稿/编辑 陈明伟）
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2.2.3 线性关系考察 在“2.2.1”
色谱条件下，分别精密吸取对照品
溶液（0.049 mg/ml）1.0，3.0，5.0，7.0，
9.0，11.0 μl，注入液相色谱仪进行
测定，以对照品进样量（μg）为横坐
标，对应峰面积为纵坐标，绘制标
准曲线，得回归方程Y= 5×1010+
06X-23 429（r=0.9998），结果表明
山柰素进样量在0.049～0.539 μg范
围内与峰面积呈良好线性关系。
2.2.4 精密度试验 精密吸取供
试品溶液（样品采自南宁市高峰林
场）10 μl，连续进样6次，分别测定
其峰面积值，以峰面积计算相对标
准偏差，RSD=0.09%（n=6）。
2.2.5 稳定性试验 取同一批号
样品（样品为采自南宁市高峰林
场），按“2.2.2”项制备供试品溶
液，室温下保存，按“2.2.1”项色谱
条件，在0，2，4，8，12，24 h下分别
测定，RSD=2.37%（n=6），表明供试
品在24 h内稳定，能满足含量测定
要求。
2.2.6 重复性试验 取同一批号
样品（样品采自南宁市高峰林场），
按“2.2.2”项制备供试品溶液，分别
制备6份，按“2.2.1”项色谱条件测
1 天等县天等镇 2 融安县长安镇 3 南宁市老虎岭 4 南宁市高峰林场 5 灵川县谭
下镇 6 全州县咸水乡 7 容县容州镇 8 百色市永乐镇 9 藤县平福乡 10 桂平县金
田乡 11 山柰素对照品 12 空白对照
图1 笔管草TLC色谱图
A 对照品 B 供试品
图2 笔管草HPLC色谱图
蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作
为供试品溶液。另取山柰素对照
品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶
液，作为对照品溶液。吸取供试品
溶液、对照品溶液各5 μl，分别点
于自制薄层硅胶G板，以环己烷-乙
酸乙酯-甲酸（8∶4∶0.4）为展开剂，
饱和15 min，展开，展距8 cm，取
出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶
液，立即置紫外光灯（365 nm）下检
视，斑点显色清晰，分离较好。见图
1。结果表明，供试品色谱中，在与
对照品色谱相应的位置上，显相同
颜色的荧光斑点。
2.2 山柰素含量测定
2.2.1 色谱分析条件 色谱柱：
Shimadzu VP-ODS C18柱（5 μm，
4.6 mm×250 mm）；流动相：乙腈-
0.4%磷酸（50∶50）；流速：0.8 ml/min；
检测波长：365 nm；柱温：30 ℃；进
样量：10 μl；分离度（R）＞1.5；层析
柱的理论塔板数按山柰素峰计算
应不低于6 000。
2.2.2 溶液的制备 取山柰素对
照品适量，精密称定重量为2.48 mg，
加甲醇使溶解并稀释至100 ml，摇
匀，即得每1 ml含24.8 μg的对照品
溶液。将本品粉碎，通过二号筛，取
约1 g，精密称定，置烧瓶中，精密
加入65%乙醇50 ml，密塞，称定重
量，加热回流提取1 h，放冷，再称
定重量，用65%乙醇补足减失的重
量，摇匀，滤过，精密量取续滤液
20 ml，加4 ml盐酸加热回流水解
1 h，放冷，转移至25 ml容量瓶中，
加65%乙醇至刻度，摇匀，过滤，取
续滤液，即得供试品溶液。
精密吸取供试品溶液和对照品
溶液各10 μl进样，按“2.2.1”项色
谱条件测定并记录，色谱图见图2。
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10批样品测定结果显示，笔
管草中山柰素的含量最高为
1.5418 mg/g，最低为0.4479 mg/g；
考虑到不同产地的药材中山柰素
含量不一，以及在贮存等过程引起
的损失，故将笔管草中山柰素含量
的限度适当降低，暂定山柰素含量
为不低于0.35 mg/g。
2.3 水分、总灰分、酸不溶性灰分
和浸出物的测定［4］ 参照中华人
民共和国药典2010年版（一部）附
录ⅨH水分测定（烘干法）、ⅨK灰
分测定法、ⅩA浸出物测定法（水热
浸法），对以上10批样品进行测定。
结果：水分含量为11.24%～13.87%，
总灰分含量为17.15%～20.93%，酸
不溶性灰分含量为8.69%～14.18%，
浸出物含量为13.35%～21.88%。上
述测定结果对笔管草药材的质量
评价具有一定的参考价值。
3 讨 论
3.1 本文薄层色谱结果表明，采
用薄层色谱法可以检测出笔管草
中的主要成分山柰素，斑点清晰且
方法简便、快速、可行，可作为笔管
草的定性鉴别依据。
3.2 预试验中曾考察了不同浓度
的甲醇、乙醇以及水作为溶剂，采
用加热回流的方法测定同批样品，
结果表明采用65%乙醇为溶剂回
流提取较完全。另提取时间的考察
结果表明，60 min提取效果较好。
本实验还考察了水解时间和盐酸
的用量，结果显示水解60 min，盐
酸用量为4 ml时测得的山柰素含
量较高。
3.3 本研究建立的定性定量分析
方法简便易行，能够科学地评价笔
管草的质量。从所测的样品来看，
不同产地笔管草中山柰素含量存
在一定的差异，可作为评价笔管草
质量优劣的判断依据。
参考文献
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分研究概况［J］.中药通报，1985，10
（3）：3.
［2］佟丽华，赵艳.不同产地木贼有效成
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［3］周荣汉，于荣敏.木贼科植物化学成
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1984（1）：5.
［4］国家药典委员会.中华人民共和国药
典［S］.一部.北京：化学工业出版社，
2010：附录52-53.
（2012-11-16 收稿/编辑 陈明伟）
定。结果山柰素峰面积RSD=2.26%
（n=6）。
2.2.7 加样回收率试验 取同一
批号样品（样品采自南宁市高峰林
场）约0.5 g，精密称定，再分别精密
加入浓度为0.775 mg/ml山柰素对
照品溶液1 ml，按“2.2.2”项制备供
试品溶液，平行制备6份，按“2.2.1”
项色谱条件测定，计算回收率（样
品含量以0.754 mg/g计），见表1，结
果表明回收率试验良好。
表1 山柰素加样回收率试验结果 （n=6）
序号
取样量
（g）
原有量
（mg）
加入量
（mg）
测出量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
1 0.5201 0.7539 0.775 1.5376 101.11
98.41 1.78
2 0.5204 0.7543 0.775 1.5252 99.47
3 0.5204 0.7543 0.775 1.5216 99.00
4 0.5207 0.7547 0.775 1.5040 96.68
5 0.5207 0.7547 0.775 1.5059 96.90
6 0.5208 0.7549 0.775 1.5089 97.29
表2 不同产地笔管草含量测定结果 （mg/g）
序号 批号 产地 山柰素含量
1 20110301 天等县天等镇 1.4340
2 20110304 融安县长安镇 0.4479
3 20110625 南宁市老虎岭 1.5418
4 20101028 南宁市高峰林场 1.4712
5 20101107 灵川县谭下镇 0.9731
6 20110313 全州县咸水乡 1.5294
7 20110311 容县容州镇 1.4168
8 20101028 百色市永乐镇 0.9322
9 20101211 藤县平福乡 1.4598
10 20110411 桂平县金田乡 1.0057
2.2.8 样品测定 按“2.2.2”项制
备供试品溶液，测定10批不同产地
笔管草药材中山柰素的含量，结果
见表2。
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