全 文 ：多枝雾水葛木脂素类化合物体外抗炎作用及其机制
李开莹1，陆海玲1，陆幸妍2，钟楚倩1，陈艳芬1，郭丽冰1
(广东药学院 1． 中药学院，2． 生命科学与生物制药学院 广东省生物技术候选药物研究重点实验室，
广东 广州 510006)
摘要:目的 研究从多枝雾水葛中分离的新化合物雾水葛木脂素 (pouzolignan)D，C和 E (本文命
名为化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ)的抗炎作用，初步探讨其抗炎机制。方法 通过脂多糖 (LPS)体外刺激小鼠腹
腔巨噬细胞建立细胞炎症模型，用 Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮 (NO)的含量，用酶联免疫
分析法 (ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子 α (TNF-α)、前列腺素 E2 (PGE2)的含量，实时荧光定
量 ＲT-PCＲ法检测 TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及环氧合酶 2 (COX-2)mＲNA表达。结果 与
溶剂对照组相比，化合物Ⅰ和Ⅱ 20，40，80，160 和 320 mg·L －1对细胞无明显毒性，化合物Ⅲ 20，
40，80 和 160 mg·L －1对细胞存活率无明显抑制作用。化合物Ⅰ 40，80 和 160 mg·L －1组细胞释放 NO
含量随着化合物浓度的增加而降低 (r = 0． 675，P ＜0． 05) ，化合物Ⅰ 160 mg·L －1组 PGE2 和 TNF-α
含量与模型组相比明显降低 (P ＜0． 05)。化合物Ⅱ 40，80 和160 mg·L －1组细胞释放 PGE2 量随着化
合物浓度的增加而减少 (r =0． 992，P ＜0． 01) ，化合物Ⅱ 80 和160 mg·L －1组 TNF-α 含量逐渐减少
(r =0． 995，P ＜0． 01) ，160 mg·L －1同时也抑制了 NO 的释放 (P ＜ 0． 05)。化合物Ⅲ 20，40 和
80 mg·L －1明显降低炎症细胞释放的 NO，无明显浓度效应关系 (r =0． 605，P ＞0． 05) ，同时 40 和
80 mg·L －1组 PGE2 和 TNF-α 的释放量也均明显减少，呈浓度依赖性 (r =0． 993，P ＜0． 01;r =0．
984，P ＜0． 01)。实时荧光定量 ＲT-PCＲ结果显示，化合物Ⅰ和Ⅱ明显降低 COX-2 和 TNF-α mＲNA表
达 (P ＜0． 05，P ＜0． 01) ，化合物Ⅱ和Ⅲ能明显降低 iNOS mＲNA表达 (P ＜0． 05，P ＜0． 01)。结
论 化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ通过减少炎症细胞释放炎症因子 NO，PGE2 和 TNF-α，同时不同程度地影响 iN-
OS，COX-2 和 TNF-α基因表达而发挥抗炎作用。
关键词:多枝雾水葛;木脂素类化合物;多枝雾木脂素;巨噬细胞，腹膜;炎症介质
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标志码:A 文章编号:1000-3002 (2014)05-0731-06
DOI:10． 3867 / j． issn． 1000-3002． 2014． 05． 008
多枝雾水葛 Pouzolzia zeylanica (L．)Benn．
var． microphylla (Wedd．)W． T． Wang． 是荨
麻科雾水葛属植物，别名脓见消、啜脓膏等。该品
种广泛分布于华南地区，为民间用药，其主要功效
为解毒消肿和接骨［1 －2］。本课题组前期研究表明，
多枝雾水葛水提取物口服具有较强的抗炎镇痛作
用［3］，外搽对小鼠皮下脓肿模型有消肿排脓并促进
愈合的作用［4］，且对金黄色葡萄球菌有一定抑制作
用，其抗炎机制可能与抑制炎症因子的释放和调节免
疫功能有关［5］。实验表明，多枝雾水葛乙酸乙酯部
位和氯仿部位对二甲苯致小鼠耳肿胀均具有一定抑制
作用，且能明显减少醋酸致小鼠扭体次数，表明其具
有一定抗炎镇痛作用［3］。经过化学成分研究，从多枝
雾水葛乙酸乙酯部位中分离到 3个结构特殊的去甲木
脂素类新化合物雾水葛木脂素 (pouzolignan)D，C
和E (图1)［6］，本文分别命名为化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ，
Fig． 1 Structure of compoundⅠ (A，pouzolignan D) ，Ⅱ (B，pouzolignan C)andⅢ (C，pouzolignan E)separated fromPouzol-
zia zeylanica (L．)Benn． var． microphylla (Wedd．)W． T． Wang．
基金项目:国家自然科学基金项目 (81073045)
作者简介:李开莹 (1988 －) ，硕士研究生，主要从事中药药效物质基础研究。
通讯作者:郭丽冰，Tel: (020)39352179，E-mail:guolibing512@126． com
·137·中国药理学与毒理学杂志 2014 年 10 月第 28 卷第 5 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 28，No 5，Oct 2014
其相对分子质量分别为467． 17，515． 17 和 486。
由于3 个化合物的极性较小，其也有可能存在于多
枝雾水葛氯仿部位。为了解这3 个化合物的抗炎活
性，本研究制备了脂多糖 (lipopolysaccharide，
LPS)刺激巨噬细胞体外炎症模型，研究该化合物
体外抗炎作用并初步探讨其机制，为阐明多枝雾水
葛的药效物质基础提供依据。
1 材料与方法
1． 1 主要试剂和仪器
胎牛血清 (fetal calf serum，FCS) ，杭州四
季青生物工程材料有限公司;磷酸缓冲盐溶液
(phosphate buffered saline，PBS)、DMEM 培养
基、LPS、MTT和 DMSO，美国 Sigma 公司;一
氧化氮 (nitric oxide，NO)检测试剂盒，碧云天
生物技术研究所;前列腺素 E2 (prostaglandin
E2，PGE2)和肿瘤坏死因子 α (tumor necrosis
factor-α，TNF-α)ELISA 试剂盒，北京诚林生物
科技有限公司;ＲT 试剂盒和 PCＲ 试剂盒，加拿
大 Fermentas公司;引物由广州赛哲生物技术有
限公司设计合成。Elx800 光吸收酶标仪，美国
BioTek 公司;ABI Stepone Plus 实时荧光定量
PCＲ仪，美国应用生物系统公司。
1． 2 实验动物和药物
40 只 SPF 级 NIH 种小鼠，雌雄不限，6 ～ 8
周，由广州中医药大学实验动物中心提供，生产许
可证号为 SCXK (粤)2008-0020。多枝雾水葛药
材于 2011 年 7 月采于广州大学城，经广东药学院
中药标本馆刘基柱副教授鉴定为荨麻科雾水葛属植
物多枝雾水葛 Pouzolziazeylanica (L．) Benn．
var． microphylla (Wedd．)W． T． Wang 的全草;
化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ从多枝雾水葛乙酸乙酯部位分离
得到，用高效液相色谱法分析其纯度≥98%;吲
哚美辛肠溶片，山西云鹏制药有限公司。
1． 3 小鼠腹腔巨噬细胞的制备和培养［7 －8］
小鼠腹腔注射 1． 0 mL 1%的无菌淀粉溶液，
每天注射 1 次，3 d后以颈椎脱臼法处死，置 75%
乙醇中浸泡7 min，腹腔注射6 mL预冷无菌 PBS，
轻揉腹壁 2 min后静置 5 min，按无菌操作沿腹中
线剖开腹部皮肤并分离暴露腹肌，用9 号针头注射
器刺入腹腔后缓慢回抽灌洗液，用 PBS 液再灌洗
1 次，收集全部腹腔液后，以 200 × g，离心 5 min
收集细胞，计数，用含 10%FCS的 DMEM培养液
调整细胞密度至 2． 0 ×109 L －1。以每孔 100 μL接
种于 96 孔板中，5% CO2，37℃条件下培养 4 h
后，用 PBS洗去未贴壁细胞，即得纯化的腹腔巨
噬细胞。
1． 4 细胞分组和给药
将 96 孔板中巨噬细胞分组处理，每组设 3 复
孔。药物用含 10% FCS 的 DMEM 培养液配制药
物，化合物Ⅰ和Ⅱ终浓度均为 20，40，80，160
和 320 mg·L －1，化合物Ⅲ终浓度为 20，40，80
和160 mg·L －1。同时设空白对照组 (含 10%
FCS 血清的 DMEM 培养液)、溶剂对照组 (含
10%FCS 的 DMEM 培养液加 1‰DMSO)、LPS
组 (含 10%FCS的 DMEM 培养液加 LPS 终浓度
为 10 mg·L －1)和吲哚美辛组 (含 10%FCS 的
DMEM培养液加吲哚美辛至终浓度分别为 1． 25，
2． 5，5 和 10 mg·L －1) ，在 5%CO2，37℃条件
下培养 24 h。
1． 5 MTT法检测细胞存活率
按 1． 4 中分组，细胞培养 24 h后，吸去培养
液，每孔加入 180 μL 不含血清的培养基和 10 μL
MTT (5 mg·L －1)。放入培养箱中孵育 4 h 后，
弃去上清液，每孔加入 150 μL DMSO，振荡 10
min充分溶解细胞沉淀，在 1 h 内用酶标仪在 490
nm处测定吸光度 (A)。细胞存活率 (%) = 〔1
－ (A空白对照组 －A药物组)〕 /A空白对照组 ×100%。
1． 6 Griess法检测 NO含量
根据 MTT 检测结果显示的药物无毒性范围，
选择适宜的药物试验浓度配制药物组，使化合物Ⅰ
和Ⅱ为终浓度 40，80 和 160 mg·L －1，化合物Ⅲ
为终浓度 20，40 和 80 mg·L －1;吲哚美辛终浓
度为5 mg·L －1;另设 LPS 组和空白对照组;药
物组、吲哚美辛组和 LPS 组需加入 LPS (终浓度
为10 mg·L －1)。在 5%CO2，37℃条件下培养 24
h后，吸取上清液，按试剂盒说明书操作，用酶标
仪在 570 nm处测定吸光度 (A)值，以亚硝酸钠
(NaNO2)标准品作为参考，通过标准曲线方程换
算成实际含量 (μmol·L －1)。
1． 7 ELISA法检测 PGE2 和 TNF-α含量
按 1． 6 中方法得到上清液，再按试剂盒说明
书操作，用酶标仪在 450 nm处分别测定 A值。用
标准品做出标准曲线，通过标准曲线方程换算成实
际含量 (ng·L －1)。
1． 8 实时荧光定量 ＲT-PCＲ法检测 iNOS，COX-2
及 TNF-α mＲNA表达
将巨噬细胞 (2． 0 ×109 L －1)1． 5 mL 接种
于3． 5 cm培养皿中，细胞贴壁后按 1． 6 中分组
处理，化合物Ⅰ和Ⅱ终浓度均为 80 mg·L －1，化
合物Ⅲ浓度为 40 mg·L －1。在 37℃，5%CO2 下
培养 24 h 后，收集细胞，采用 Trizol 提取法提取
ＲNA，紫外分光光度计测 ＲNA 纯度 (A260nm /
·237· 中国药理学与毒理学杂志 2014 年 10 月第 28 卷第 5 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 28，No 5，Oct 2014
A280 nm)在 1． 8 ～2． 0 之间。Primer 5． 0 软件设
计引物序列分别为:内参引物 GAPDH的上游引物
为 5ACCCCCAATGTGTCCGTCGT3，下游引物
为 5 AGCCCAAGATGCCCTTCAGTGG3，片段
长度 118 bp;诱导型一氧化氮合酶 (induced ni-
tric oxide synthase，iNOS )的上游引物为 5GT-
TCTCAGCCCAACAATACAAGA3，下游引物为
5GTGGACGGGTCGATGTCAC3，片段长度 127
bp;环氧合酶 2 (cyclooxygenase-2，COX-2)的
上游引物为 5AGGTCATTGGTGGAGAGGTG3，
下游引物为 5 CCTGCTTGAGTATGTCGCAC3，
片段长度 192 bp;TNF-α 的上游引物为 5TATG-
GCTCAGGGTCCAACTC3，下游引物为 5CTC-
CCTTTGCAGAACTCAGG3，片段长度 174 bp。
取总 ＲNA 1 μg按逆转录操作说明书逆转录成 cD-
NA;取 0． 8 μL 逆转录产物加入 20 μL 反应体系
中，按以下反应条件扩增:95℃预变性10 min→
95℃变性 15 s→60℃退火 30 s→72℃延伸 15 s，
40 个循环，72℃采集荧光信号。用 ABI Stepone
Plus进行实时 PCＲ检测。以 GAPDH 管家基因作
为内参。目标基因 mＲNA 相对表达水平用 2 －ΔΔCt
表示。
1． 9 统计学分析
计量资料实验结果数据用 x ± s 表示。采用
SPSS 11． 0 统计软件，多组比较采用单因素方差
分析，方差齐性的采用 LSD 法，方差不齐的采用
Dunnett t检验;采用 Logarithmic 进行相关分析，
以 P ＜0． 05 为具有统计学差异。
2 结果
2． 1 化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ对细胞存活率的影响
MTT 结果 (表 1)表明，溶剂对照组和 LPS
组 A490 nm与空白对照组相比无明显变化，说明其对
细胞存活率无明显影响。化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ各浓度
组 A490 nm与溶剂对照组相比无明显变化，提示化
合物Ⅰ和Ⅱ 20，40，80，160 和 320 mg·L －1以
及化合物Ⅲ 40，80 和 160 mg·L －1对细胞存活无
明显影响。吲哚美辛 10 mg·L －1组与溶剂对照组
相比明显降低 (P ＜ 0． 05) ，1． 25，2． 5 和 5
mg·L －1组无明显变化。
2． 2 化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ对细胞培养上清 NO，
PGE2 和 TNF-α含量的影响
由表 2 可以看出，LPS 模型组 NO，PGE2 和
TNF-α含量明显高于正常对照组 (P ＜ 0． 01) ，
表明 LPS诱导的细胞炎症模型造模成功。与模型组
Tab． 1 Effect of compoundⅠ，Ⅱ and Ⅲ on viability of mac-
rophage cells
Group
Concentration /
mg·L －1
A490 nm
Viability /
%
Blank control 0． 657 ±0． 067 100
DMSO control 0． 647 ±0． 023 99． 0
LPS 10 0． 640 ±0． 031 97． 4
Indometacin 1． 25 0． 595 ±0． 006 90． 5
2． 5 0． 559 ±0． 052 85． 1
5 0． 535 ±0． 006 81． 5
10 0． 518 ±0． 056* 78． 8
CompoundⅠ 20 0． 705 ± 0． 051 104． 5
40 0． 619 ±0． 173 96． 3
80 0． 590 ±0． 040 93． 6
160 0． 659 ±0． 023 100． 2
320 0． 637 ±0． 023 96． 9
CompoundⅡ 20 0． 629 ±0． 022 95． 7
40 0． 610 ±0． 016 92． 8
80 0． 604 ±0． 049 92． 0
160 0． 585 ±0． 031 89． 1
320 0． 576 ±0． 052 87． 7
CompoundⅢ 20 0． 659 ±0． 004 100． 3
40 0． 645 ±0． 010 98． 2
80 0． 594 ±0． 019 90． 4
160 0． 592 ±0． 120 90． 1
The mouse peritoneal macrophages were incubated with correspond-
ing drugs for 24 h，respectively ． The blank control group was given
medium 100 μL． The solvent 1‰DMSO control group was given an e-
qual volume of medium including 1‰DMSO． The cell viability was de-
tected with MTT method ． LPS:lipopolysaccharides． x ±s，n =3． * P
＜0． 05，compared with DMSO control group．
相比，化合物Ⅰ 40，80 和 160 mg·L －1作用后
NO含量显著降低，且呈浓度依赖性 (r =0． 675，
P ＜0． 05) ;160 mg·L －1组 PGE2 和 TNF-α含量
也显著减少(P ＜0． 05)。化合物Ⅱ 40，80 和 160
mg·L －1组 PGE2 含量随浓度增加而降低 (r = 0．
992，P ＜0． 01) ;80 和 160 mg·L －1明显抑制炎
症细胞中 TNF-α 的释放 (r = 0． 995，P ＜ 0．
01) ;160 mg·L －1也明显减少炎症细胞释放 NO
(P ＜ 0． 05)。化合物Ⅲ 40，80 和160 mg·L －1
组 NO 含量明显低于模型组，但无浓度效应关系
(r =0． 605，P ＞ 0． 05) ，80 和 160 mg·L －1组
PGE2 和 TNF-α 含量与模型组相比显著减少，
且呈浓度依赖性 (r = 0． 993，P ＜ 0． 01;r = 0．
984，P ＜0． 01)。
·337·中国药理学与毒理学杂志 2014 年 10 月第 28 卷第 5 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 28，No 5，Oct 2014
Tab． 2 Effect of compoundsⅠ，Ⅱ and Ⅲ on nitric oxide(NO) ，prostaglandin E2 (PGE2)and tumor necrosis factor-α (TNF-α)
production in activated macrophages
Group
Concentration /
mg·L －1
NO /
μmol·L －1
PGE2 /
ng·L －1
TNF-α /
ng·L －1
Normal control 13． 5 ±0． 8 150． 5 ±1． 6 153． 5 ±1． 2
LPS 93． 2 ±3． 3＊＊ 468． 6 ±6． 7＊＊ 581． 0 ±3． 9＊＊
LPS + Indometacin 5 43． 0 ±1． 2## 245． 9 ±2． 0## 303． 1 ±1． 9##
LPS + compoundⅠ 40 72． 3 ±6． 5# 445． 6 ±1． 8 569． 5 ±3． 8
80 72． 2 ±1． 7# 429． 5 ±2． 8 532． 9 ±4． 5
160 64． 3 ±3． 9## 417． 0 ±4． 6# 503． 0 ±4． 4#
LPS + compoundⅡ 40 85． 1 ±7． 4 375． 9 ±2． 8# 530． 4 ±4． 5
80 87． 3 ±7． 3 360． 3 ±3． 2# 490． 4 ±6． 6#
160 83． 1 ±8． 7# 310． 7 ±3． 4## 422． 8 ±1． 2##
LPS + compoundⅢ 20 79． 8 ±1． 8# 429． 7 ±3． 9 564． 9 ±7． 8
40 70． 0 ±5． 2## 380． 2 ±3． 0# 493． 8 ±3． 8#
80 69． 3 ±6． 5## 313． 0 ±3． 0## 416． 0 ±4． 5##
The mouse peritoneal macrophages were incubated with LPS 10 mg·L －1 and corresponding drugs for 24 h，respectively ． The content of
NO，PGE2 and TNF-α in supernatant was detected with ELISA． x ± s，n = 3． * P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，compared with normal control
group;#P ＜0． 05，##P ＜0． 01，compared with LPS model group．
2． 3 化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ对小鼠腹腔巨噬细胞
iNOS，COX-2 和 TNF-α mＲNA表达的影响
图2结果显示，与正常对照组比较，LPS刺激后
巨噬细胞 iNOS，COX-2 和 TNF-α mＲNA表达均增
加 (P ＜0． 05，P ＜0． 01)。与模型组比较，化合物
Ⅰ 80 mg·L －1组 COX-2和 TNF-α mＲNA表达显著
降低 (P ＜0． 05)，iNOS mＲNA表达无显著性差异;
Fig． 2 Effect of compoundⅠ，Ⅱ and Ⅲ on mＲNA expression
of TNF-α，induced nitric oxide synthase(iNOS)and cyclooxyge-
nase-2 (COX-2)in activated macrophages detected by real-time
PCＲ． See Tab． 2 for the cell treatment． CompoundⅠ and Ⅱ:80
mg· L －1;compound Ⅲ:40 mg · L －1 ． The relative mＲNA
expression of target genes was expressed as 2 －ΔΔCt ． x ± s，n =3．
* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01，compared with normal control group;#P
＜0． 05，##P ＜0． 01，compared with LPS model group．
化合物Ⅱ80 mg·L －1组 iNOS，COX-2 和 TNF-α
mＲNA表达均显著降低 (P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) ;
化合物Ⅲ 40 mg·L －1组 iNOS mＲNA表达显著减少
(P ＜0． 05) ，但 COX-2和 TNF-α mＲNA表达无明
显变化。
3 讨论
在正常情况下，静止的巨噬细胞仅产生极少量
的炎症因子，当巨噬细胞经 LPS、炎症因子等诱
导活化后通过一系列信号转导通路，表达大量炎症
靶基因，如 iNOS，COX-2 和 TNF-α等，从而产生
大量 NO，PGE2 和 TNF-α，活化后产生的一系列
炎症介质推动炎症的级联瀑布反应。TNF-α 在级
联反应中属于末期的效应分子，也是炎症中起正反
馈调控的一个关键分子，参与多种局部和全身的炎
症反应［9］。NO 产生受 iNOS，COX-2 影响，其在
体内广泛参与多种生理和病理过程，如调节血管张
力、参与神经传递、介导炎症反应和免疫反应等，
同时也是炎症和细胞毒素血症中细胞毒性因子［10］。
PGE2 是一种重要的炎症介质，在炎症疾病中通过
COX-2作用产生过多的 PGE2
［11］，能介导炎症反应
中疼痛和发热的产生［12］。所以本研究采用 NO，
PGE2，TNF-α，iNOS和 COX-2 作为评价药物抗炎
效应的标准。
本研究结果显示，化合物Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ对各炎症
因子有不同程度的抑制作用。化合物Ⅰ能明显抑制
·437· 中国药理学与毒理学杂志 2014 年 10 月第 28 卷第 5 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 28，No 5，Oct 2014
巨噬细胞释放 NO，且呈浓度依赖性，在 160 mg
·L －1时，对 PGE2 和 TNF-α也有抑制作用。与模
型组相比，化合物Ⅱ 40，80 和 160 mg·L －1对
PGE2 有抑制作用，且呈浓度依赖性，80 和 160
mg·L －1能降低 TNF-α 含量，160 mg·L －1时对
NO有抑制作用。化合物Ⅲ 20，40 和 80 mg·L －1
明显抑制炎症细胞释放 NO，同时 40 和 80 mg·
L －1组 PGE2 和 TNF-α的释放量也明显减少，呈浓
度依赖性。在空白对照组中 iNOS，COX-2 和
TNF-α的基因水平都低表达，但经 LPS 刺激后它
们的mＲNA表达均上调。与模型组相比，化合物Ⅰ
对COX-2和 TNF-α 的 mＲNA 表达均有抑制作用，
但对iNOS mＲNA表达无明显影响;化合物Ⅱ能显
著降低 iNOS，COX-2 和TNF-α的mＲNA表达。化
合物Ⅲ能明显抑制 iNOS 的 mＲNA 表达，但对
COX-2 和 TNF-α的mＲNA表达无明显影响。说明
3 个化合物都具有一定程度的抗炎作用。本研究结
果显示，化合物Ⅲ抑制炎症细胞释放 TNF-α，但
对 TNF-α mＲNA表达无明显抑制作用，可能由于
在转录到翻译的过程中有某些因素影响最终产物的
表达。因为转录与蛋白质表达是2 个不同的过程，
转录本身的稳定性和被翻译的效率及已经翻译后的
产物的稳定性都会影响最终产物的表达量，还有翻
译后加工的过程都会有一定影响。
化合物Ⅰ通过降低 COX-2 和 TNF-α mＲNA
表达抑制 NO，PGE2 和 TNF-α 生成，而起到抗炎
作用;化合物Ⅱ通过下调致炎系统中 iNOS，COX-
2 和 TNF-α mＲNA表达，同时减少炎症因子 NO，
PGE2 和 TNF-α 释放起到抗炎作用;化合物Ⅲ能
通过降低 iNOS mＲNA表达，减少 NO，TNF-α 和
PGE2 分泌而发挥抗炎作用。据文献报道，细胞毒
性物质 LPS、前炎症细胞因子 (TNF-α 和 PGE2
等)可通过激活巨噬细胞使 NF-κB 活化并从细胞
质易位到细胞核，启动多种炎症基因如炎症酶
(如 iNOS和 COX-2 等)和细胞因子 (如 TNF-α)
表达［13 －14］。该木脂素类化合物抑制炎症介质的生
成而实现抗炎效应是否在一定程度上影响 NF-κB
需要进一步研究。综上所述，该类化合物具有一定
体外抗炎作用，其发挥抗炎作用的机制可能与其影
响炎症介质的基因和蛋白表达有关。本研究为进一
步探讨多枝雾水葛的抗炎机制提供了实验依据。
参考文献:
［1］ Editorial Committee from State Administration of
Traditional Chinese Medicine of ″Chinese Materia
Medica″． Chinese Materia Medica (中华本草) ［M］
∥Second book·volume 5． Shanghai:Shanghai
Science and Technology Press， 1999: 579，
1673．
［2］ Editorial Board of Flora of China from CAS． Flora
of China (中国植物志) ［M］ ∥Second book·
volume 23． Beijing:Science Press，1995:364．
［3］ Liu XY，Du QT，Li KY，Deng Q，GUO LB． Anti-
inflammatory and analgesic effects of different ex-
tract fractions from Pouzolzia zeylanica var． mi-
crophylla ［J］． Drugs Clin (现代药物与临床) ，
2012，27 (4) :356-359．
［4］ Li KY，Xie YF，Chen YF，Liu TZ，Guo LB． Effect
of Pouzolzia zeylanica extracts in mouse subcuta-
neous abscess ［J］． J Guangdong Pharm Univ
(广东药学院学报) ，2012，28 (5) :540-544．
［5］ Chen YF，Li KY，Deng Q，Liu XY，Shen ZB，
Guo LB． Therapeutic effect and mechanism of
Pouzolzia zeylanica on skin ulcers in rats ［J］．
Tradit Chin Drug Ｒes Clin Pharmacol (中药新药
与临床药理) ，2013，24 (3) :247-251．
［6］ Guo LB， Liu XY， Xie YF， Tao SH． A method
about separating and identifying lignans com-
pounds from Pouzolzia zeylanica (一种去甲木脂
素类化合物及其从多枝雾头葛分离鉴定的方法) :
China，CN103333176A ［P］． 2013-10-02．
［7］ Huang XJ， Ｒen W， Pan L， Chen FＲ，Zou
DJ． Investigation on the anti-inflammatory effect
of ethanolic extract of Aconitum brachypodum
Diels in vitro ［J］． J South-Cent Univ Nat (Nat Sci
Ed)〔中南民族大学学报 (自然科学版)〕，2012，31
(4):36-40．
［8］ E Z． The Cell and Tissue Culture (组织细胞学培
养) ［M］． Beijing:Peoples Medical Publishing
House，1993:185．
［9］ Toussirot E， Wendling D． The use of TNF-al-
pha blocking agents in rheumatoid arthritis:an
update ［J］． Expert Opin Pharmacother，2007，8
(13) :2089-2107．
［10］ Xiao F，Zhu J，Zhao L，Zheng GH，Yang AS，
Tao JY，et al． Involvement of pro-inflammatory
and anti-inflammatory cytokines in the anti-inflam-
matory activity of Ｒubus idaeus L． on LPS-treated
ＲAW 264． 7 cells ［J］． J Chin Pharm Sci，
2010，(19) :201-208．
［11］ Linton MF，Fazio S． Cyclooxygenase-2 and in-
flammation in atherosclerosis ［J］． Curr Opin
Pharmcol，2004，4 (2) :116-123．
［12］ Zhang Y，Wang XG． Studies on in-vitro ant-iin-
flammatory mechanism of luteolin ［J］． J Guang-
zhou Univ Tradit Chin Med (广州中医药大学学
报) ，2007，24 (3) :231-234．
［13］ Lawrence T，Bebien M，Liu GY，Nizet V，Karin
·537·中国药理学与毒理学杂志 2014 年 10 月第 28 卷第 5 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 28，No 5，Oct 2014
M． IKKalpha limits macrophage NF-kappaB acti-
vation and contributes to the resolution of inflam-
mation ［J］． Nature，2005，434 (7037) :1138-
1143．
［14］ Geng DS． NF-кB and its effect on the inflamma-
tory and chemical inhibitors ［J］． Pharm J Chin
PLA (解放军药学学报) ，2009，25 (3) :250-
253，282．
Anti-inflammatory effect and mechanism of lignans compounds
fromPouzolzia zeylanica in vitro
LI Kai-ying1，LU Hai-ling1，LU Xin-yan2，ZHONG Chu-qiang1，CHEN Yan-fen1，GUO Li-bing1
(1． College of Traditional Chinese Medicine，2． Guangdong Provincial Key Laboratory of Biotechnology
Candidate Drug Ｒesearch，College of Life Sciences and Biological Pharmacy，Guangdong
Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
Abstract:OBJECTIVE To study the anti-inflammatory effect of three new lignans:pouzolignan D，C
and E，named compoundⅠ，Ⅱ and Ⅲ，from Pouzolzia zeylanica and investigate the mechanism． METH-
ODS An inflammatory cell model was established by stimulating the mouse peritoneal macrophages in vitro
with lipopolysaccharide (LPS)． The content of nitric oxide (NO)in the supernatant was determined by
Griess，the production of tumor necrosis factor-α (TNF-α)and prostaglandin E2 (PGE2)was deter-
mined by ELISA． The expression of mＲNA of TNF-α，induced nitric oxide synthase (iNOS )and
cyclooxygenase-2 (COX-2) was detected by real-time fluorescent quantitative PCＲ (ＲT-PCＲ)．
ＲESULTS CompoundⅠ and Ⅱ 20，40，80，160 and 320 mg·L －1 had no inhibitory effect，just like
compoundⅢ 40，80 and 160 mg·L －1 ． The level of NO in compoundⅠ 40，80 and 160 mg·L －1 groups
was decreased in a concentration-dependent manner (r =0． 675，P ＜0． 05) ，and the level of TNF-α
and PGE2 in compoundⅠ 160 mg·L
－1 group was lower than that of LPS-induced group (P ＜0． 05)．
The level of PGE2 in compoundⅡ 40，80 and 160 mg·L
－1 groups was decreased in a concentration-de-
pendent manner (r =0． 992，P ＜0． 01)． The content of TNF-α in compoundⅡ 80 and 160 mg·L －1
groups was significantly reduced in a concentration-dependent manner (r = 0． 995，P ＜ 0． 01) ，and
the level of NO in 160 mg·L －1 group was reduced (P ＜ 0． 05)． Compound Ⅲ 20，80 and
160 mg·L －1 significantly inhibited the release of NO (r =0． 605，P ＞0． 05) ，while the level of PGE2
and TNF-α was decreased by compoundⅢ 80 and 160 mg·L －1 in a concentration-dependent manner
(r =0． 993，P ＜0． 01;r =0． 984，P ＜0． 01)． CompoundⅠ and Ⅱ reduced the expression of mＲ-
NA of COX-2 and TNF-α while compoundⅡ and Ⅲ reduced the expression of mＲNA of iNOS． CONCLU-
SION CompoundⅠ，Ⅱ and Ⅲ can significantly resist inflammation． They can inhibit the release of in-
flammatory cytokines NO，PGE2 and TNF-α while lowering the gene expression of iNOS，COX-2 and
TNF-α．
Key words:Pouzolzia zeylanica var microphylla;lignans compounds;pouzolignan;macrophages，
peritoneal;inflammation mediators
Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China (81073045)
Corresponding author:GUO Li-bing，Tel: (020)39352179，E-mail:guolibing512@126． com
(收稿日期:2014-01-10 接受日期:2014-09-13)
(本文编辑:齐春会)
·637· 中国药理学与毒理学杂志 2014 年 10 月第 28 卷第 5 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 28，No 5，Oct 2014