全 文 :茶叶科学 2014,34(5):428~434
Journal of Tea Science 投稿平台:http: / /cykk.cbpt.cnki .net
收稿日期:2014-02-17 修订日期:2014-04-02
基金项目:国家科技支撑(2013BAD26Q01)
作者简介:栗志文(1974— ),男,内蒙古包头人,硕士,助理研究员,主要从事心脑血管及内分泌系统新药研发工作。*通讯作者:
maxiaohui@tasly.com
普洱茶提取物与绿茶提取物降糖功效的研究
栗志文,王媛媛,王根辈,陈艳芳,李长文,马晓慧*
天士力控股集团研究院,天津 300410
摘要:通过整体动物模型研究比较普洱茶提取物与绿茶提取物的降糖功效。以 C57BL/6J 小鼠作为对照组,将遗
传性糖尿病(KKAy)小鼠随机分组,分别灌胃给予普洱茶提取物与绿茶提取物 4 周,以空腹血糖、血糖曲线下
面积作为观察指标,比较二者的药效作用;以 SD 雄性大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造模糖尿病大
鼠,根据初始空腹血糖值随机进行分组,连续灌胃给予普洱茶提取物与绿茶提取物 4 周,以空腹血糖、血糖曲线
下面积和空腹血清胰岛素作为观察指标。结果显示普洱茶提取物和绿茶提取物对 KKAy 小鼠和 STZ 糖尿病模型
大鼠空腹血糖均有降低作用,同时均能降低血糖曲线下面积,但是不同的是普洱茶提取物在降低动物空腹血糖和
血糖曲线下面积方面要优于绿茶提取物,同时普洱茶提取物能够较模型组显著降低大鼠空腹血清胰岛素,而绿茶
提取物在降低大鼠空腹血清胰岛素与模型组相比无明显差异。比较了两种茶提取物对糖尿病的体外靶酶糖醛还原
酶和 PTP1B 的抑制作用,发现普洱茶提取物对 PTP1B 活性有较强的抑制作用,抑制率 88.0%,绿茶提取物对该
酶无抑制作用。综合实验结果表明,普洱茶提取物的降糖功效优于绿茶提取物。
关键词:普洱茶提取物;绿茶提取物;KKAy 小鼠;糖尿病大鼠;降糖功效
中图分类号:TS272.5+1;TS272.5+4;R587.1 文献标识码:A 文章编号:1000-369X(2014)05-428-07
Study of the Hypoglycemic Effect of Pu′er Tea and
Green Tea Extracts
LI Zhiwen, WANG Yuanyuan, WANG Genbei, CHEN Yanfang, LI Changwen, MA Xiaohui
*
Tasly Group Institute Co., Ltd., Tianjin 300410, China
Abstract: This study mainly researched the hypoglycemic effect of green tea extract and Puer tea extract by two
animal models. C57BL/6J mice were selected as control group, KKAy mice were randomly grouped. They were all
orally given Puer tea extract and green tea extract for 4 weeks. At last we selected the fasting blood glucose and
AUC as objects of observation, compare the effect of green tea extract and Puer tea extract. We selected these two
kinds of tea extract which were given orally to rats that were caused diabetic model by STZ. The results showed
that both Puer tea extract and green tea extract could reduce the content of fasting blo od glucose, the AUC at two
model experiments. But the difference was that Puer tea extract was superior to green tea extract in fasting blood
glucose and impaired AUC. At the same time Puer tea extract could significantly decrease the level of insulin
resistance than that of green tea extract. But in decreasing the levels of fasting serum insulin, green tea extract
slowed no evident difference in comparing with the model group. In the comparing of two tea extracts on diabetes
target enzyme such as aldose reductase and PTP1B inhibition in vitro, the results showed that Puer tea extracts
strongly inhibited PTP1B activity, the inhibition rate was 88.0%, green tea extract had no inhibitory effects on the
DOI:10.13305/j.cnki.jts.2014.05.002
5 期 栗志文,等:普洱茶提取物与绿茶提取物降糖功效的研究 429
enzyme. So after comprehensive evaluation the hypoglycemic effect of Puer tea’s extracts was better than that of
green tea extracts.
Keywords: Puer tea extract, green tea extract, KKAy mice, diabetes rat, hypoglycemic effect
糖尿病已成为继肿瘤、心脑血管疾病之
后,威胁人类健康的第三大杀手[1],全世界患
糖尿病的人已经超过 3 亿[2],中国的糖尿病患
者也呈现逐年增加的趋势。因此预防糖尿病已
成为全世界共同关注的课题。当前临床上常用
的口服降血糖药虽然在降血糖方面有一定的功
效,但大多存在或大或小的副作用 [3]。因此,
寻找高效、无毒副作用的天然降糖因子已成为
当前的迫切需要。
很多研究报道了茶叶多糖有降低血糖的功
效 [4-7]。关于普洱茶降低血糖的研究也很多 [8-
10],其中有实验已从普洱茶中提取出茶多糖晶
体并通过动物实验验证了其降血糖作用 [11]。
也有研究表明,普洱茶中多酚物质中的儿茶素
有降低血糖的功能 [12]。绿茶也可以降低糖尿
病小鼠的血糖水平,促进健康人体的葡萄糖代
谢 [13-14]。汪东风、金吉旭等 [15-16]发现,绿茶
可以对糖尿病起到防治的作用。一般认为茶叶
中的儿茶素类物质和抗氧化有关,而降血糖是
由于茶叶中的多糖蛋白所致[17-19]。目前关于糖
尿病靶酶的机理研究越来越受到广大学者的重
视,其中 α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、醛糖还原
酶和蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP1B)是研究最
为广泛的 4 个糖尿病体外靶酶[20],可以通过体
外实验检测普洱茶和绿茶对这些酶的抑制作用
来评价它们的降糖功效。
目前,1 型糖尿病发病后需要终生饮食控
制治疗;2 型糖尿病为后天发病,有治愈的可
能性。因此,寻找高效、无毒副作用的天然降
糖食品资源成为目前糖尿病研究的热点。随着
绿茶、普洱茶等茶饮品越来越多地被人们作为
保健佳品,哪一种饮品对降低血糖作用更有优
势也备受重视。本文选取普洱茶提取物和绿茶
提取物对其降糖功效进行了比较研究,并针对
体外与降糖相关的酶进行了机理探讨,为广大
消费者选择降糖茶饮品提供参考。
1 材料与方法
1.1 实验动物和饲养条件
遗传性糖尿病(KKAy)小鼠(SPF 级),
雌性 70 只,5~6 周龄,购自北京华阜康生物
科 技 股 份 有 限 公 司 , 许 可 证 号 :
SCXK( 京 )2009-0004。 Sprague-Dawley 大鼠
(SPF 级)雄性 85 只,8~10 周龄,由北京维
通利华实验动物技术有限公司提供,许可证
号:SCXK(京)2012-0001,饲养于天士力
集团药理毒理研究所屏障级动物实验中心。
室温 20~25℃,相对湿度 40%~70%,小鼠
每笼 10 只,大鼠每笼 5 只。照明时长 12 h,定
时添加足量饲料,定时添加足量饮水。KKAy
小鼠饲料为灭菌专用高脂饲料;大鼠饲料为食
用鼠专用颗粒饲料,每日更换一次垫料。
1.2 主要试剂和药品
马来酸罗格列酮片[批号 09090110,葛兰
素史克(天津)有限公司 ]、普洱茶提取物
(批号 2010F01,云南天士力帝泊洱生物茶集
团有限公司提供)、喷干速溶绿茶粉 [批号
20110316,大闽食品(漳州)有限公司生
产 ]、链脲佐菌素(STZ,批号 S0130-1G,
sigma);Rat/mouse Insulin ELISA Kit(批号
ST2347EN00,美国 MILLIPORE 公司)、测定
蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP1B)试剂盒(批号
ABIN1381458,antibodies-online 公司)。
1.3 实验仪器
BIOSEN 5030 型血糖/乳酸分析仪,德国
EKF 公司制造;Infinite200 多功能酶标仪,瑞
典 TECAN 公司;日立 7020 型全自动生化
仪,日本日立株式会社。
430 茶 叶 科 学 34 卷
1.4 实验方法
1.4.1 KKAy 小鼠模型和 STZ 大鼠模型体内实
验方法
1.4.1.1 分组及给药
动物高脂饲料喂养 4 周后,按照空腹血糖
测定方法测定空腹血糖,按实测空腹血糖值分
层随机分组。70 只 KKAy 中选取空腹血糖>
16 mmol·L
-1的入组,随机分为 4 组:模型组、
阳性药组(1.33 mg·kg-1·d-1)、普洱茶提取物组
(1.0 g·kg-1)、绿茶提取物组(1.0 g·kg-1),每
组 15 只。正常 C57BL/6J 小鼠(n=11)作对
照组。SD 雄性大鼠 70 只适应性喂养 1 周后,
随机分成正常对照组与糖尿病造模组。正常对
照组 10 只,糖尿病造模组 60 只。造模组 60
只大鼠禁食 16 h 后,经腹腔一次性注射 STZ
55 mg·kg
-1;正常对照组动物注射等剂量的柠
檬酸缓冲液作为对照。注射 3 d 后,动物禁食
12 h,尾静脉针刺采血测血糖,血糖值>10
mmol·L
-1 者确定为糖尿病大鼠。成模的糖尿病
大鼠随机分成模型组(蒸馏水 10 mL·kg-1·d-1)、
阳性药组(1.33 mg·kg-1·d-1)、普洱茶提取物组
(1.0 g·kg-1)、绿茶提取物组(1.0 g·kg-1)共 4
组,每组 12 只。每日灌胃,连续灌胃 4 周。
1.4.1.2 日常观察指标
实验期间观察动物精神、活动、毛色及尿量
粪便变化情况;每周定量测定进食量及体重。
1.4.1.3 空腹血糖测定
分组前及给药后 7、14、21、28 d 分别尾静
脉取血测空腹血糖值。所有动物均禁食(自由
饮水)12 h 后取血,取血前 1 h 各组动物灌胃给
药,取血时断尾取末梢血 10 μL,用 BIOSEN
5030 型血糖/乳酸分析仪测定空腹血糖。
1.4.1.4 血糖曲线下面积检测
给药 28 d 后动物禁食 12 h(自由饮水),
取血前 1 h 给药,禁食结束时经口给予葡萄糖
2.0 g·kg
-1,测定各组动物喂饲葡萄糖后 0、
0.5、1.0、2.0 h 的血糖值。血糖曲线下面积
(AUC)=1/2×(0 h 血糖值+0.5 h 血糖值)
×0.5+1/2×(0.5 h 血糖值+1.0 h 血糖值)×0.5
+1/2×(1.0 h 血糖值+2.0 h 血糖值)×1。
1.4.1.5 大鼠空腹血清胰岛素测定
给药 30 d 后禁食不禁水 12 h,腹腔注射合
适剂量的水合氯醛麻醉(0.004 mL·g-1),眼眶
静脉取血,常温静置 30 min , 2 500 g×10
min,4℃离心,分离血清,采用 ELISA 法,
按照试剂盒说明书步骤测定。
1.4.2 对 PTP1B 活性的抑制作用
利用含有磷酸的多肽 pNPP 被 PTP1B 酶
解掉 1 个磷酸后的产物 pNP 在波长 405 nm 处
有吸收峰的原理,以 PTP1B 作用后生成 pNP
的量表示化合物对酶活性的抑制情况。
用同样浓度的普洱茶或绿茶溶液作为抑制
剂体系,作为抑制组分加入酶活性测定体系
中。加样顺序为:抑制剂 200 mL,25 mmol·L-1
pH 5.0 NaOAc-HA,1.4 mmol·L-1 EDTA,1.4
mmol·L
-1
DTT,10 nmol·L-1 ΔPTP1B,最后在
反应体系中加入终浓度为 20 mmol·L-1 的 p-
NPP。于 37℃下反应 30 min,测定 OD405 的
变化值,与未加入抑制剂的空白对照比较。
用相应的数据处理软件对所得数据进行差异
显著性分析,实验数据用均数±标准差( sx )
表示,两组间差异显著性采用 t检验。
2 结果与分析
2.1 动物模型体内实验结果
2.1.1 一般日常观察及体重变化
实验期间正常对照组的小鼠和大鼠精神状
态良好,动作自如,皮毛有光泽,进食量、饮
水量稳定,体重持续增加。各组糖尿病大鼠呈
现饮食量和饮水量增加、血糖升高等情况。各
给药组动物毛色正常,活动正常,体重及进食
量变化不大。
2.1.2 两种茶提取物对动物空腹血糖影响的比较
两种茶提取物对 KKAy 小鼠空腹血糖值的
影响结果见图 1-a。两种动物模型组血糖值都
比对照组显著升高,证明造模成功。阳性药组
在给药后 1~4 周,每周空腹血糖值均极显著低
于模型组。普洱茶提取物组给药后 1~4 周,空
5 期 栗志文,等:普洱茶提取物与绿茶提取物降糖功效的研究 431
腹血糖值显著低于模型组;绿茶组在给药 2 周
和 4 周时,空腹血糖值显著低于模型组;普洱
茶提取物的降糖效果优于绿茶提取物。两种茶
提取物对 STZ 糖尿病大鼠空腹血糖值的影响结
果见图 1-b,大鼠模型阳性药组在给药后 2~4
周,空腹血糖值均显著低于模型组。普洱茶提
取物组给药后 2~4 周,空腹血糖值显著低于模
型组;绿茶组 2 周时空腹血糖值明显低于模型
组;普洱茶提取物降糖效果优于绿茶提取物。
2.1.3 两种茶提取物对动物血糖 AUC 的影响
两种茶粉对 KKAy 小鼠的血糖 AUC 实验
结果见图 2-a,从实验结果可以看出,灌胃外
源性葡萄糖后普洱茶提取物组、绿茶提取物组
血糖 AUC 显著低于模型组(P<0.01),但是
普洱茶组的血糖 AUC 更低于模型组。STZ 糖
尿病大鼠血糖 AUC 实验结果显示,普洱茶提
取物组在灌胃外源性葡萄糖后血糖 AUC 值显
著低于模型组(P<0.05),绿茶组在灌胃外
源性葡萄糖后血糖 AUC 值与模型组比较无统
计学差异(图 2-b)。
图 1 两种茶提取物对 KKAy 小鼠(a)和 STZ 大鼠(b)空腹血糖的影响
Fig. 1 The influence of two kinds of tea extract on fasting blood glucose in KKAy mice (a) or in STZ rats (b)
注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
Note: Compared with model group *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001.
0 1 2 3 4
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
30
32
34
36
38
40
对照组(Control group)
模型组(Model group)
阳性组(Positive group)
普洱茶组(Puer tea group)
绿茶组(Green tea group)
***
*
***
***
***
***
***
***
***
***
空
腹
血
糖
值
/
m
m
o
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1
F
a
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t
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g
b
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d
g
l
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e
时间 Time/Week
a
b
时间 Time/Week
0 1 2 3 4
0
5
10
15
20
25
30
35
40
对照组(Control group)
模型组(Model group)
阳性组 (Positive group)
普洱茶组(Puer tea group)
绿茶组(Green tea group)
**
***
*
*
**
**
*
空
腹
血
糖
值
/
m
m
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l
·
L
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1
F
a
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d
g
l
u
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s
e
图 2 两种茶提取物对 KKAy 小鼠(a)和 STZ 大鼠(b)血糖 AUC 的影响
Fig. 2 The influence of two kinds of tea extract on glucose AUC in KKAy mice (a) or in STZ rats (b)
注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01。
Note: Compared with model group *P<0.05, **P<0.01.
0
20
40
60
80
**
**
**
血
糖
曲
线
下
面
积
/m
m
o
l·
L
-1
·h
-1
B
lo
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o
se
A
U
C
/
m
m
o
l·
L
-1
·h
-1
对照组 模型组 阳性组 普洱茶组 绿茶组
Control Model Positive Puer tea Green tea
group group group group group
a
对照组 模型组 阳性组 普洱茶组 绿茶组
Control Model Positive Puer tea Green tea
group group group group group
血
糖
曲
线
下
面
积
/m
m
o
l·
L
-1
·h
-1
B
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g
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A
U
C
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m
m
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l·
L
-1
·h
-1
b
0
20
40
60
80
*
*
432 茶 叶 科 学 34 卷
2.1.4 两种茶提取物对大鼠空腹血清胰岛素
的影响
对大鼠空腹血清胰岛素测定结果见图 3,
可以看出模型组血清胰岛素显著增高,与正常
组比较差异极显著(P<0.001);与模型组比
较,阳性药组、普洱茶提取物组均能显著降低
大鼠血清胰岛素(P<0.001,P<0.05);绿茶组
与模型组相比无明显差异。
2.2 两种茶提取物对 PTP1B 的抑制作用
普洱茶和绿茶提取物对 PTP1B 活性的抑
制作用(表 1)显示,普洱茶提取物对 PTP1B
活性有较强的抑制作用,半抑制浓度达到了
1.03 μg·mL
-1,与阳性药的抑制作用相比差别不
大。而绿茶提取物对 PTP1B 活性的抑制作用则
比较低,不能用有效的半抑制浓度表示。普洱
茶与绿茶对 PTP1B 活性抑制作用的差异可能与
二者组成成分的差异有关,尤其是与普洱茶发
酵后茶褐素含量升高有关。
表 1 两种茶提取物对 PTP1B 活性的抑制作用
Table 1 The inhibitory effects of two kinds of tea extracts on protein tyrosine phosphatase activity
样品 Sample 终质量浓度 Final concentration/μg·mL-1 抑制率 Inhibition rate/% 半抑制浓度 IC50/μg·mL
-1
普洱茶 Puer tea 10 88.0 1.03
绿茶 Green tea 10 4.7 -
阳性对照组 Positive group 10 97.4 1.00
3 讨论
茶叶中的茶多酚、茶多糖、茶色素等是抑
制血糖升高的主要活性成分,茶多酚可以保护
胰岛 β 细胞、提高胰岛素活性、促进胰岛素分
泌,抑制肠道内相关酶类活性,抑制葡萄糖运
转载体活性[20-22],以及下调控制葡萄糖异生作
用基因的表达;茶多糖主要通过抑制肠道蔗糖
酶和麦芽糖酶的活性,使进入机体内的碳水化
合物减少,起到降血糖作用;茶色素可以通过
降低血浆粘度和纤维蛋白原,降低胆固醇和甘
油三酯含量,提高高密度脂蛋白含量等途径来
降低血糖、血脂含量 [23]。本实验中对普洱茶
提取物和绿茶提取物处理的两种动物模型的空
对照组 模型组 阳性组 普洱茶组 绿茶组
Control Model Positive Puer tea Green tea
group group group group group
0
10
20
30
40
50
***
*
空
腹
血
清
胰
岛
素
/m
U
·L
-1
F
a
st
in
g
s
e
ru
m
i
n
su
li
n
图 3 两种茶提取物对 STZ 大鼠空腹血清胰岛素的影响
Fig. 3 The influence of two kinds of tea extract on fasting serum insulin of STZ rats
注:与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
Note: Compared with model group *P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001.
5 期 栗志文,等:普洱茶提取物与绿茶提取物降糖功效的研究 433
腹血糖和血糖曲线下面积进行了评价,并对其
降糖机理做了体外实验研究。从 KKAy 小鼠模
型的实验结果来看,普洱茶对空腹血糖的降低
作用比绿茶的效果要好,可以看出绿茶组的空
腹血糖值只有在第 2 周和第 4 周的时候显著低
于模型组,其余检测时间相对于模型组并无差
异。但是若横向比较绿茶组的空腹血糖实验和
血糖曲线下面积的实验会发现,绿茶提取物对
血糖曲线下面积的控制比降低空腹血糖的功效
要好。总体来看普洱茶组不管是对小鼠空腹血
糖还是血糖曲线下面积的作用都比较好,能较
绿茶显示出明显的优势。而大鼠模型空腹血糖
实验第 1 周测定的结果绿茶组的血糖含量甚至
高于模型组,之后的第 3 和第 4 周绿茶组的大
鼠空腹血糖值虽然较模型组有所降低,但都没
有达到统计学意义。综合评价在调节空腹血糖
和血糖曲线下面积作用方面,普洱茶的功效要
好于绿茶。
文献报道绿茶可能通过抑制小肠黏膜的 α-
葡萄糖苷酶活性和葡萄糖转运能力,来降低 l
型和 2 型糖尿病动物的血糖[9]。降血糖、降血
脂是普洱茶最为突出的功效之一,但其作用机
制也是众多学者研究的重点。通过 STZ 糖尿
病大鼠模型实验可以看出,普洱茶提取物能够
降低 STZ 糖尿病大鼠的空腹血清胰岛素含
量,而绿茶在降低空腹血清胰岛素方面效果不
明显。推测这可能是由于普洱茶与绿茶在糖尿
病作用机制中对糖尿病靶酶的作用差异,又或
者是这两种茶中茶多酚、茶多糖、茶色素等活
性成分含量有所不同而致。
本研究结果显示普洱茶提取物在降糖功效
研究中效果优于绿茶提取物,推测可能是二者
所含物质组成不同所致。而究竟是二者当中何
种成分起到降低血糖作用或者几种成分协同作
用达到降低血糖的效果有待进一步研究。本实
验中发现绿茶和普洱茶在对 PTP1B 的抑制效
果上差异很大,普洱茶能够较高地抑制
PTP1B 的活性,而绿茶则没有此功效。分析原
因为 PTP1B 是茶褐素降糖的一个强作用靶
点,普洱茶中含有茶褐素,而绿茶几乎不含茶
褐素。已有研究报道也证明了发酵普洱茶能够
抑制 PTP1B 的活性[24]。绿茶与普洱茶降血糖
的其他机理还不是很明确,需深入研究;二者
可能通过何种代谢途径进行血糖的控制与调
节,具体机制还有待进一步研究确定。
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中国农业科学院茶叶研究所茶叶加工工程研究中心
发明专利介绍
1. 一种降低砖茶含氟量的加工制作方法,授权编号:CN02137323.X。
2. 一种蒸青珠茶的加工工艺,授权编号:ZL200410066260。
3. 一种茶氨酸的提取工艺,授权编号:ZL200310109053.9。
4. 一种提高γ -氨基丁酸含量的茶叶加工方法,授权编号:ZL200310109054.3。
5. 一种茶叶汁的提取方法,授权编号:ZL200310108149.3。
6. 茶叶保鲜剂,授权编号:ZL200510062020.2。
7. 一种制备四种茶黄素单体的方法,授权编号:ZL200610154852.1。
8. 绿茶鲜茶固体饮料及其生产工艺,授权编号:ZL200810059437.7。
9. 一种扁形名优绿茶加工方法,授权编号:ZL200910090769.0。
10. 一种加工颗粒绿茶的方法,授权编号:ZL20101039564.8。
11. 一种茶叶植物染料染棉纤维的方法,授权编号:ZL201010281680.0。
12. 一种扁形名优绿茶的加工方法,授权编号:ZL200910098769.0。
13. 一种特色醇味茶的加工方法,授权编号:ZL201110052534.5。
14. 一种发酵红茶饮料的生产工艺, 授权编号:ZL200810121831.9。
15. 离子交换树脂载体固定多酚氧化酶的方法, 授权编号: ZL20081 121635.1。
16. 高茶黄素速溶红茶的外源酶法生产工艺,授权编号:ZL201210157076.6。
17. 高酯型儿茶素茶多酚的绿色制备方法,授权编号:ZL201110134785.8。
18. 一种滚筒式红茶自动发酵设备,授权编号:ZL201210127466.9。
19. 一种低苦涩味高儿茶素茶饮料的加工方法,授权编号:ZL201110209424.5。
20. 一种调味茶饮料用原料茶的制备方法,授权编号:ZL201210059773.8。
21. 一种多层隧道式茶叶远红外提香机,授权编号:ZL201110088296.3。
22. 用于茶叶提香作业的微域环境湿度调控方法,授权编号:ZL201210049679.4。
联系人:俸春红 电话:0571-86653173
E-mail: fengchunhong@ tricaas.com