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普洱茶预防SD大鼠高脂血症及抗氧化、保护血管内皮的研究



全 文 :云南农业大学学报 Journal of Yunnan Agricultural University,2011,26 (2) :260 - 264 http: / /xb. ynau. edu. cn
ISSN 1004 - 390X;CODEN YNDXAX E-mail:xb@ ynau. edu. cn
收稿日期:2010 - 04 - 07 修回日期:2010 - 11 - 08
* 基金项目:国家科技支撑计划课题资助 (2007BAD58B04 - 4)。
作者简介:徐湘婷 (1979 -) ,女,云南建水人,硕士,主要从事食品、药品毒理学及药理学的研究。
**通讯作者 Corresponding author:杨继红 (1961 -) ,女,云南昆明人,博士,主要从事药物毒理学及药理学的研
究。E-mail:jihongyn@ 126. com;邵宛芳 (1957 -) ,女,云南昆明人,博士,主要从事茶叶生化分析
和功效研究。E-mail:shaowf38@ vip. sina. com
DOI:10. 3969 / j. issn. 1004 - 390X (n). 2011. 02. 022
普洱茶预防 SD大鼠高脂血症及
抗氧化、保护血管内皮的研究*
徐湘婷1,王 鹏1,罗绍忠1,罗 漪1,
江新凤2,侯 艳2,邵宛芳2**,杨继红1**
(1. 昆明医学院,云南省天然药物药理重点实验室,云南 昆明 650500;
2. 云南农业大学 龙润普洱茶学院,云南 昆明 650201)
摘要:研究普洱茶预防 SD大鼠高脂血症及抗氧化、保护血管内皮的作用及机制。SD 大鼠高脂饲料造模的同
时给予不同剂量普洱茶 35 d,检测体重及血脂水平;血清超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)、谷胱
甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidase,GSH - PX)、微量丙二醛 (malondialchehyche,MDA) ;血浆 6 -酮 -
前列腺素 F1a (6 - keto - prostaglandin F1a,6-keto-PGF1a)、血栓素 B2 (thromboxane B2,TXB2)。进行主动脉
病理组织学检查。结果显示:普洱生茶及熟茶组与模型组相比:体重明显减轻。血清总胆固醇 (total choles-
terol,TC)、甘油三酯 (triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)
明显降低。血清 MDA生成减少,SOD,GSH-PX 活性增强,其中熟茶组的作用更明显。血浆 6-keto-PGF1a 浓
度增加,TXB2 浓度降低。主动脉血管壁内皮细胞损伤减轻。普洱茶能够预防高脂饲料模型所致 SD 大鼠高脂
血症,熟茶的作用更显著。普洱茶具有保护血管内皮的作用,其作用机制可能与其抗氧化,促进 PGI2 合成,
抑制 TXA2 合成有关。
关键词:普洱茶;高脂血症;6-keto-PGF1a;TXB2
中图分类号:S 571. 1 文献标识码:A 文章编号:1004 - 390X (2011)02 - 0260 - 05
Effects of Puer Tea on Hyperlipidemia Prevention,Antioxidation
and Vascular Endothelium Protection in SD Rats
XU Xiang-ting1,WANG Peng1,LUO Shao-zhong1,LUO Yi1,
JIANG Xin-feng2,HOU Yan2,SHAO Wan-fang2,YANG Ji-hong1
(1. Kunming Medical College,Pharmacology Key Laboratory of Natural Products of Yunnan Provine,Kunming 650500,China;
2. College of Longrun Pu-erh Tea,Yunnan Agricultural University,Kunming 650201,China)
Abstract:To explore the effects and mechanisms of Puer tea on hyperlipidemia prevention,antioxida-
tion,vascular endothelium protection. Hyperlipemia was successfully induced in SD rats by high-lipid
diet. Different doses of Puer tea were administered to these rats for 35 days started from the 28th day of
induction. Body weights of all animals were recorded during experiment. At experimental endpoint,
blood lipids levels,activities of superoxide dismutase (SOD) ,glutathione peroxidase (GSH-PX) ,
malondialchehyche (MDA)in serum were measured,as well as plasma levels of 6-keto-prostaglandin
F1a (6-keto-PGF1a)and thromboxane B2 (TXB2). Aortas were collected to examine morphological
changes. The comparison among fermenting and fermented Puer tea groups and model group revealed
that: (1)Bodyweights were remarkably reduced in Puer tea groups; (2)Serum levels of total cho-
lesterol (TC) ,triglycerides (TG)and low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C)were decreased
significantly Puer tea groups; (3)Activities of SOD and GSH-PX increased significantly,however,
the MDA contents decreased in Puer tea groups (the effect of fermented Puer tea was more significant
than fermenting Puer tea ) ; (4)Plasma TXB2 content decreased significantly,6-keto-PGF1a in-
creased in Puer tea groups. And the endothelial cells damage was reduced. (1)Puer tea can prevent
high lipid diet induced hyperlipidemia,fermented Puer tea shows a stronger lipid down regulation effect
than fermenting Puer tea; (2)Puer tea can protect vascular endothelial cells,and this effect may re-
late with increasing plasma levels of PGI2 and decreasing that of TXA2 .
Key words:Puer tea;hyperlipidemia;6-keto-prostaglandin F1a;thromboxam B2
随着经济发展和生活水平的提高,人们的膳
食结构发生改变,高脂高蛋白类食物的增加,以
致体内脂质代谢紊乱,抗氧化能力降低,氧化脂
质产物增多从而造成动脉硬化血管损伤。据统计,
我国每年因心脑血管疾病造成死亡的人数约 260
万人,而且有逐年上升和年轻化趋势[1 - 4]。普洱
茶是深受人们喜爱的传统饮品,分为普洱生茶和
普洱熟茶两大类型[5],具有 “消食化痰,清胃生
津,解油腻”等功效 (清·赵学敏 《本草纲目拾
遗》)。现代对绿茶、乌龙茶和红茶等已有不少的
研究报道,茶的活性物质如茶多酚、茶色素、茶
皂素、茶多糖等的化学特性与结构也在不断被阐
明,但普洱茶的保健功能多停留于民间经验的总
结,对普洱茶的开发研究尚属起步阶段,研究报
道相对比较少。故本试验以高脂 SD 大鼠模型,
探讨普洱茶预防高脂血症、抗氧化、保护血管内
皮的作用及其机制,为普洱茶预防性辅助降血脂
功能研究提供试验依据。
1 材料与方法
1. 1 动物
7 周龄 SPF 级 SD 大鼠 80 只,雄性,体重
224. 4 ± 12. 1g;购自昆明医学院实验动物中心,
生产许可证号:SCXK (滇)2005 - 0009。
1. 2 高脂饲料
78. 8%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉、
10%猪油、0. 2%胆酸钠。
1. 3 受试物及对照品剂量设置及分组
根据日本东京桑野研究推荐成人每日用茶剂量
0. 1 g / (kgBW)[6 - 7]。普洱茶低中高剂量分别为人
体推荐摄入量的 5,10,20 倍,即 0. 5,1. 0,2. 0 g /
(kgBW)。将推荐用量的 20 倍设为乌龙茶对照组:
2. 0 g / (kgBW)及 HC 组 (降脂中药对照:herb
control)剂量:0. 4 g / (kgBW)。普洱茶及乌龙茶
茶汤每周浓缩 1次,由云南农业大学龙润普洱茶学
院制备提供,4 ℃ 低温冷藏保存[8]。
80 只大鼠眼底静脉丛取血测 TC,按 TC 及体
重随机分成 10 组,每组 8 只:阴性对照 (normal
control,NC) ;高脂模型 (model control,MC)乌
龙茶对照 (oolong tea control,OC) ;降脂中药组
(HC 组) ;生茶低中高剂量 (un-fermented Puer
tea of lower, mind, high dosage, UPL, UPM,
UPH) ;熟茶低中高剂量 (after-fermented Puer tea
of lower,mind,high dosage,APL,APM,APH)。
除阴性对照组外所有试验组喂饲高脂饲料,造模
同时根据不同组别每天给予相应受试物或对照品
1 次,共 35 d。
1. 4 观察指标
每天进行一般观察;每周称量体重 1 次;动
物麻醉后处死采集全血 3 ~ 4 mL,分别制备血清
和血浆,南京建成生物工程研究所试剂盒测定血
清 TC,TG,HDL-C,LDL-C,SOD,MDA,GSH-
PX;美国 ADL公司 ELASA试剂盒测定血浆 6-ke-
to-PGF1a及 TXB2;解剖取主动脉弓到髂总动脉分
叉处摘取主动脉全段,置 10%中性甲醛溶液中固
定,固定 24 h后,梯度酒精脱水,石蜡包埋,切
片厚 3 μm。病理组织学观察。
1. 5 统计方法
SPSS 12. 0 统计软件包对试验数据进行统计
学处理。多组数据的计量资料若方差齐则采用单
162第 2 期 徐湘婷,等:普洱茶预防 SD大鼠高脂血症及抗氧化、保护血管内皮的研究
因素方差分析,方差不齐采用秩和检验。
2 结果与分析
2. 1 体重变化
试验期间,普洱茶各组体重增长持续缓慢,
第 5 周,普洱生茶熟茶各组体重均明显低于模型
组 (P < 0. 01) ,HC 组、乌龙茶对照组体重与阴
性对照组相当 (P > 0. 05) ,而生茶中高剂量组,
熟茶低高剂量组体重明显低于阴性对照组 (P <
0. 01) ,提示预防性给予普洱生茶、熟茶均能明
显抑制高脂饲料引起的 SD 大鼠体重增长,其作
用优于 HC组及乌龙茶对照组 (表 1)。
表 1 普洱茶对 SD大鼠体重变化的影响 (mean ± SD)
Tab. 1 Effect of Puer tea on body weight in SD rats g
组别
group
时间 /周 time of treatment /week
0 1 2 3 4 5
阴性对照 (NC) 223. 4 ± 6. 6 244. 3 ± 18. 4** 257. 7 ± 13. 0** 274. 0 ± 15. 5** 290. 3 ± 14. 5** 311. 6 ± 17. 8**
高脂模型 (MC) 227. 5 ± 8. 7 283. 1 ± 8. 8 310. 0 ± 7. 4 333. 3 ± 7. 7 365. 5 ± 9. 5 377. 0 ± 12. 1
降脂中药组 (HC) 222. 6 ± 12. 1 247. 5 ± 14. 3** 268. 3 ± 16. 8** 294. 1 ± 16. 9** 315. 7 ± 21. 4** 312. 7 ± 22. 6**
乌龙茶对照 (OC) 230. 3 ± 7. 2 254. 4 ± 8. 2** 275. 1 ± 11. 7** 297. 3 ± 13. 0** 312. 7 ± 15. 0** 304. 3 ± 14. 1**
生茶低剂量 (UPL) 219. 5 ± 13. 3 240. 3 ± 18. 4** 255. 2 ± 18. 7** 279. 9 ± 20. 1** 282. 8 ± 18. 1** 297. 5 ± 18. 7**
生茶中剂量 (UPM) 217. 6 ± 11. 3 229. 0 ± 17. 1** 244. 4 ± 15. 0** 264. 2 ± 14. 1** 271. 0 ± 14. 1** 279. 7 ± 14. 6**
生茶高剂量 (UPH) 221. 9 ± 18. 2 231. 8 ± 20. 6** 237. 8 ± 25. 9** 252. 6 ± 28. 2** 259. 8 ± 28. 0** 265. 4 ± 28. 0**
熟茶低剂量 (APL) 224. 2 ± 8. 4 237. 3 ± 12. 0** 257. 0 ± 16. 6** 272. 7 ± 20. 3** 283. 9 ± 18. 4** 292. 9 ± 18. 5**
熟茶中剂量 (APM) 228. 1 ± 14. 5 242. 1 ± 18. 0** 253. 2 ± 14. 0** 273. 8 ± 17. 1** 290. 4 ± 17. 2** 300. 6 ± 20. 1**
熟茶高剂量 (APH) 224. 9 ± 14. 9 231. 8 ± 11. 3** 250. 1 ± 9. 7** 265. 7 ± 9. 2** 273. 4 ± 10. 4** 283. 4 ± 8. 3**
注:n = 8;与相应时期模型组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01,下同。
Note:NC. normal control;MC. model control;HC. herb control;OC. oolong tea control;UPL,UPM,UPH. un-fermented Puer tea of lower,
mind,high dosage;APL,APM,APH. after-fermented Puer tea of lower,mind,high dosage. Compared with MC:* P < 0. 05,**P < 0. 01;the
same as bellows.
2. 2 血清 TC,TG,HDL-C及 LDL-C
普洱生茶、熟茶各组血清 TC,TG,LDL-C明显
低于模型组 (P < 0. 01),与阴性对照组相当 (P >
0. 05),提示预防性给予普洱生茶、熟茶,均能明显
降低高脂饲料饲喂的 SD 大鼠血脂水平,其作用与
HC组及乌龙茶对照组相当 (P >0. 05),见表 2。
表 2 普洱茶对 SD大鼠血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)及
低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)的影响 (mean ± SD)
Tab. 2 Effect of Puer tea on serum levels of total cholesterol (TC) ,triglycerides (TG) ,high density
lipoprotein-cholesterol (HDL-c)and low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C)in SD rats mmol /L
组别 group TC TG HDL-C LDL-C
阴性对照 (NC) 1. 37 ± 0. 19** 0. 44 ± 0. 07** 1. 26 ± 0. 17 0. 53 ± 0. 07**
高脂模型 (MC) 2. 34 ± 0. 31 0. 75 ± 0. 21 1. 19 ± 0. 14 0. 91 ± 0. 28
降脂中药组 (HC) 1. 45 ± 0. 36** 0. 43 ± 0. 16** 1. 26 ± 0. 15 0. 52 ± 0. 13**
乌龙茶对照 (OC) 1. 65 ± 0. 34** 0. 25 ± 0. 06** 1. 34 ± 0. 23 0. 62 ± 0. 16**
生茶低剂量 (UPL) 1. 47 ± 0. 18** 0. 26 ± 0. 06** 1. 31 ± 0. 07 0. 55 ± 0. 07**
生茶中剂量 (UPM) 1. 54 ± 0. 20** 0. 23 ± 0. 04** 1. 34 ± 0. 12 0. 61 ± 0. 10**
生茶高剂量 (UPH) 1. 48 ± 0. 14** 0. 14 ± 0. 04** 1. 38 ± 0. 20 0. 57 ± 0. 07**
熟茶低剂量 (APL) 1. 41 ± 0. 10** 0. 28 ± 0. 03** 1. 22 ± 0. 14 0. 55 ± 0. 07**
熟茶中剂量 (APM) 1. 49 ± 0. 20** 0. 28 ± 0. 08** 1. 36 ± 0. 25 0. 60 ± 0. 08**
熟茶高剂量 (APH) 1. 47 ± 0. 11** 0. 19 ± 0. 05** 1. 35 ± 0. 09 0. 56 ± 0. 06**
262 云南农业大学学报 第 26 卷
2. 3 血清 SOD活力、GSH-PX活力及 MDA浓度
普洱生茶熟茶各组血清 SOD、GSH-PX 活
力均明显高于模型组 (P < 0. 01) ,MDA 浓度
明显低于模型组 (P < 0. 01) ,而熟茶各各组
GSH-PX 活力高于生茶各组、乌龙茶对照组及
HC 组 (P < 0. 05) ,表明普洱生茶熟茶均有
明显预防高脂饲料引起的 SD 大鼠 SOD、GSH-
PX 活力下降,MDA 浓度增高的作用,其作用
熟茶优于生茶、乌龙茶及 HC 组 (表 3)。
表 3 普洱茶对 SD大鼠血清 SOD,GSH-PX,MDA的影响 (mean ± SD)
Tab. 3 Effect of Puer tea on serum levels of SOD,GSH-PX and MDA in SD rats
组别 group SOD / (U·mL -1) GSH-PX / (U·mL -1) MDA / (nmol·mL -1)
阴性对照 (NC) 107. 48 ± 8. 35** 1648. 15 ± 167. 50** 3. 39 ± 2. 05**
高脂模型 (MC) 95. 45 ± 7. 01 337. 78 ± 101. 03 11. 61 ± 1. 90
降脂中药组 (HC) 138. 36 ± 8. 02** 1172. 22 ± 78. 57** 4. 46 ± 1. 80**
乌龙茶对照 (OC) 132. 53 ± 3. 43** 1511. 11 ± 142. 78** 6. 12 ± 3. 07**
生茶低剂量 (UPL) 137. 87 ± 1. 97** 1264. 82 ± 92. 87** 3. 84 ± 1. 86**
生茶中剂量 (UPM) 128. 77 ± 4. 57** 953. 33 ± 228. 74** 3. 27 ± 4. 02**
生茶高剂量 (UPH) 127. 56 ± 3. 03** 1388. 89 ± 155. 62** 3. 40 ± 1. 88**
熟茶低剂量 (APL) 122. 77 ± 5. 75** 1561. 11 ± 204. 73** 3. 60 ± 3. 62**
熟茶中剂量 (APM) 120. 28 ± 2. 89** 2053. 70 ± 306. 39** 4. 59 ± 3. 08**
熟茶高剂量 (APH) 112. 46 ± 3. 99** 1537. 04 ± 217. 92** 6. 19 ± 1. 01**
2. 4 血浆 6-keto-PGF1a,TXB2
普洱生茶熟茶各组,血浆 6-keto-PGF1a 浓度
均明显高于模型组,除生茶中剂量组外,各组血
浆 TXB2 浓度均明显低于模型组 (P < 0. 05,P <
0. 01)。与阴性对照组、乌龙茶对照组、HC 组相
当 (P > 0. 05)。表明普洱生茶熟茶均有明显预防
高脂饲料引起的 SD 大鼠血浆 6-keto-PGF1a 下降,
TXB2 升高的作用,预防作用可达正常水平 (表
4)。
表 4 普洱茶对 SD大鼠血浆 6-keto-PGF1a,
TXB2 的影响 (mean ± SD)
Tab. 4 Effect of Puer tea on plasma levels of
6-keto-PGF1a and TXB2 in SD rats pg /mL
组别 group 6-keto-PGF1a TXB2
阴性对照 (NC) 43. 37 ± 4. 63** 420. 06 ± 31. 45**
高脂模型 (MC) 29. 82 ± 4. 52 509. 08 ± 33. 56**
降脂中药组 (HC) 30. 01 ± 9. 04 386. 44 ± 57. 38**
乌龙茶对照 (OC) 44. 85 ± 4. 01** 429. 36 ± 56. 10**
生茶低剂量 (UPL) 44. 58 ± 4. 38** 425. 33 ± 53. 61**
生茶中剂量 (UPM) 44. 49 ± 3. 40** 505. 89 ± 27. 16
生茶高剂量 (UPH) 47. 33 ± 3. 35** 444. 64 ± 82. 37*
熟茶低剂量 (APL) 37. 57 ± 4. 06* 384. 64 ± 49. 26**
熟茶中剂量 (APM) 45. 50 ± 7. 17** 440. 19 ± 58. 02*
熟茶高剂量 (APH) 46. 28 ± 5. 28** 469. 22 ± 43. 03**
2. 5 主动脉病理检查
高脂模型组主动脉内皮细胞肿胀、增生,
内皮下间隙增宽,脂质空泡较多,中膜明显增
厚;而生茶熟茶高剂量组主动脉基本正常。普
洱生茶熟茶 6 个剂量组主动脉病变明显轻于模
型组 (图 1)。
362第 2 期 徐湘婷,等:普洱茶预防 SD大鼠高脂血症及抗氧化、保护血管内皮的研究
3 讨论
高脂血症时体内自由基产生与清除之间的平
衡破坏,产生的脂质过氧化物 (LPO) ,LPO的终
极产物 MDA 极易修饰 LDL,形成的 MDA-LDL 可
被单核巨噬细胞识别和吞噬,促使泡沫细胞形成。
MDA含量的测定可间接地反映出机体细胞受自由
基攻击,导致细胞损伤的严重程度;SOD和 GSH-
PX为有效的抗脂质过氧化物酶,能够迅速分解
LPO,具有重要的防御自由基损伤作用。本试验
结果显示:普洱茶 6 个组血清 MDA含量均明显下
降,SOD 和 GSH-PX 活性明显升高,说明普洱茶
可通过抗脂质过氧化来调节血脂紊乱,抑制细胞
膜脂质过氧化与 Ox-LDL 形成的作用,减少 LPO
对血管和内皮细胞的损伤,及泡沫细胞形成,达
到抗动脉粥样硬化 (AS)作用。
前列环素 (prostacyclin,PGI2)是花生四烯
酸 (arachidonic acid,AA)的代谢产物,具有强
烈扩张血管和抑制血小板聚集作用,血浆 PGI2 含
量升高,有利于改善血管内皮功能,预防 AS 和
CHD 。而血栓素 A2 (TXA2)与 PGI2 相拮抗,具
有强烈收缩血管和促进血小板聚集作用[9]。TXB2
和 6-keto-PGF1a分别为血浆 TXA2 和 PGI2 的稳定
代谢产物,故通常以测定 TXB2 和 6-keto-PGF1a
来反映 TXA2 和 PGI2的血浆水平。本试验研究发
现:预防性给予普洱茶能有效调节高血脂引起的
TXA2 和 PGI2 之间的不平衡,与高脂模型组相比,
血浆 TXB2 明显下降,而 6-keto-PGF1a 明显升高,
提示普洱茶能有效调节 TXA2 和 PGI2 之间的平
衡,保护血管内皮细胞及减轻内皮功能障碍,减
少血栓形成和维护正常的血管舒缩功能,起到抗
AS和预防 CHD作用。
以往研究显示普洱茶提取物在自由基清除方
面优于乌龙茶提取物[10 - 14]。本试验中,低剂量普
洱生茶及熟茶降低 MDA,升高 GSH-PX,SOD 抗
氧化损伤的作用就与高剂量的乌龙茶相当或更好,
表明普洱茶抗氧化损伤的作用优于乌龙茶,考虑
可能与普洱茶特殊工艺产生的复杂成分协同作用
有关。
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462 云南农业大学学报 第 26 卷