全 文 ：广东土牛膝抗炎镇痛的研究
刘晓燕 曾晓春 江剑东 白秀珍 温慧婷 郭幼贤
(广东教育学院生物系, 510310,广东广州 / /第一作者女, 1962年生, 讲师)
摘 要:目的:研究广东土牛膝乙醇提取液抗炎镇痛作用。方法:采用大鼠或小鼠致炎、致痛模型, 观察
广东土牛膝对实验动物的抗炎镇痛作用。结果: 广东土牛膝可显著抑制蛋清所致大鼠足跖肿胀和棉球肉芽
组织的形成; 广东土牛膝能提高小鼠热板致痛阈值, 对醋酸致小鼠扭体反应有明显抑制作用, 显示出广东土
牛膝有良好的镇痛效果。其镇痛作用可能是通过抑制致痛部位的环氧酶, 使 PG合成减少而减轻疼痛。显
著抑制二甲苯致小鼠耳壳水肿和腹腔毛细血管通透性的增高;对热板和醋酸致小鼠疼痛模型均有抑制作用。
结论: 广东土牛膝具良好的抗炎和镇痛作用。
关 键 词: 广东土牛膝; 抗炎; 镇痛
中图分类号: R931 文献标识码:A 文章编号: 1009 - 5276( 2004) 08 - 1566 - 03
广东土牛膝 ( Eupatorium chinense Linn. ) , 又名土牛
膝、多须公、六月霜、白须公、斑骨相思、大麻等。为菊科
泽兰属植物, 多年生草本或半灌木,常生长于山谷、林缘、
草地或灌木丛中。分布于中国东南部至西南部各省, 老
挝、缅甸、泰国等国也有。全年可采挖, 晒干或鲜用。性
味: 辛、苦、凉。有祛风、消肿、清热、解毒、行瘀等功效。
主治白喉、乳蛾、咽喉肿痛、吐血、咯血、血淋、外伤肿痛、
跌打瘀痛等症。用法和用量: 内服 :煎汤 9~ 60g#d - 1, 外
用: 研末调敷或煎水洗 [1~ 3 ]。5中草药新医疗法展览会技
术资料选编#传染病6 : 治疗白喉: 土牛膝 90g, 山大颜根
60g, 木患子根 30g。上药 切片, 加水 2500mL, 煎 至
1000mL,加糖适量; 1~ 2 岁服 200mL, 3~ 6 岁服 250mL, 7
~ 12 岁服 400~ 600mL, 成人服 1000mL, 每天分 4~ 5 次
服, 重症者,药量可加倍。治感冒高热: 土牛膝60g,切碎,
煎浓汁, 加蜜糖调服 [1]。有关广东土牛膝抗炎镇痛的研
究较少, 尚未见报导。为此, 笔者进行了这方面研究, 结
果表明, 广东土牛膝有显著的抗炎镇痛作用。
1 材 料
动 物 昆明种小鼠 18~ 22g, Wistar 种大鼠 130~
150g 和 200~ 220g,均由广州市九佛强龙动物养殖场供应。
药品与试剂 广东土牛膝根(购自广东肇庆药材公
司) ,用 60%乙醇隔水加热沸腾回流 2h, 冷却过滤, 制成
乙醇提取液。阿司匹林,徐州恩华制药责任有限公司生
产,苏卫药准字( 1994) , 批号 391002。伊文思蓝, 中国医
药(集团)上海化学试剂公司, 批号: F2000617; 乙醇、二甲
苯、冰乙酸,分别由广州化学试剂厂生产, AR。
仪 器 可见光分光光度计, SP ) 1105 型, Spectrum,
上海光谱仪器有限公司;离心机, TDL ) 5 型 Centrifuge, 上
海安亭科学仪器厂制造, 编号: 5003; 电子分析天平,
Hangpng, FA1104 型,上海天平仪器厂生产。此外,还有恒
温水浴箱、大鼠足跖容积测定仪、进样器、打孔器、秒表
等。
2 方法与结果
对蛋清致大鼠足跖肿胀的影响 [4] 取大鼠 50 只,体
重 213? 4. 1g,雌雄各半, 随机等分为 5 组,用足跖容积测
定仪分别测定每只大鼠左后肢正常足跖排水量 ( mL) ,即
为该鼠足跖体积,然后, 广东土牛膝乙醇提取液 (以下简
称为广东土牛膝) 3 个剂量组, 分别给予 6、8、10g#Kg - 1体
重;阳性对照组给予阿司匹林 0. 4g#Kg - 1体重;正常对照
组给予等容量的生理盐水。ip 给药, 容量均为 0. 5mL#
100g
- 1体重,给药后 30min, 分别在大鼠左后肢足跖正中
向踝关节 sc20%新鲜鸡蛋清 0. 1mL以致炎, 分别于致炎
后 0. 5、1、2、3、4h各测定大鼠左后肢足跖排水量, 与致炎
前后的排水量之差,代表足跖肿胀程度,并以下列公式计
算同一时相,给药组对鼠足跖肿胀的抑制率。
抑制率( % ) =
对照组平均肿胀度 -同时相给药组平均肿胀度
对照组平均肿胀度 @ 100%
进行 t检验,计算同一时相内阿司匹林组、广东土牛
膝各剂量组分别与生理盐水组比较, 差别有无显著意义。
结果见表 1,表明广东土牛膝 3 个剂量组和阿司匹林组,
对蛋清致大鼠足跖肿胀都有明显的抑制作用。其中广东
土牛膝低、中剂量组的抑制效果较高剂量组的好,比阿司
匹林组的也好。
对二甲苯致小鼠耳壳炎症的影响 [5] 取小鼠 50 只,
雌雄各半,随机分为蒸馏水 (正常对照)组、阿司匹林(阳
性对照)组 ( 0. 8g#Kg - 1体重 )、广东土牛膝 3 个剂量 ( 8、
12、16g#Kg - 1体重)组,每组 10 只, ig给药,药的容量为 0.
2mL#10g - 1体重,正常对照组给予相同体积的蒸馏水。连
续给药 5天, 每天 1 次, 第 6 天给药后 0. 5h, 用进样器取
二甲苯 0. 05mL 均匀地涂于右耳壳前后两面, 左耳作对
照。致炎后 4h 将小鼠脱颈椎处死, 沿耳壳基部剪下双
耳,用直径 8mm 的不锈钢打孔器在双耳对称处冲下耳
片,在电子分析天平上称重。以左右耳片重量差为肿胀
度,计算各组肿胀度平均值, 作 t检验, 比较组间差异的
显著性。
第 22卷 第 8期
2 0 0 4 年 8月
中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 22 No. 8
Aug . 2 0 0 4
中医药
1566
学刊
DOI：10.13193/j.archtcm.2004.08.204.liuxy.112
表 1 广东土牛膝对蛋清致大鼠足跖肿胀的影响 (…X ? S )
组别 剂量
( g#Kg- 1)
n
致炎前左后足
跖体积( mL)
致炎后足跖肿胀度( mL)
0. 5h 1h 2h 3h 4h
生理盐水 等容 10 1. 18 ? 0. 16 0. 66 ? 0. 1417 0. 72? 0. 1668 0. 56 ? 0. 0929 0. 50 ? 0. 0544 0. 44? 0. 0625
阿司匹林 0. 4 10 1. 16 ? 0. 19 0. 63 ? 0. 1203
( 4. 5)
0. 46? 0. 0217* *
(36. 1)
0. 38? 0. 1367* *
( 32. 2)
0. 30? 0. 1500* *
( 40. 0)
0. 23 ? 0. 0845* *
( 47. 7)
广东土牛膝 6 10 1. 21 ? 0. 07 0. 50? 0. 1304*
( 24. 2)
0. 32? 0. 1300* *
( 55. 6)
0. 25? 0. 1296* *
( 55. 4)
0. 19? 0. 1402* *
( 62. 0)
0. 16 ? 0. 07* *
( 63. 6)
8 10 1. 18 ? 0. 13
0. 55? 0. 1600
( 16. 7)
0. 34? 0. 1500* *
( 52. 8)
0. 27? 0. 1860* *
( 51. 8)
0. 21? 0. 1430* *
( 58. 0)
0. 13 ? 0. 120* *
( 70. 5)
10 10 . 17? 0. 10
0. 61? 0. 180
( 7. 6)
0. 36? 0. 140* *
( 50. 0)
0. 30? 0. 1900* *
( 46. 4)
0. 26? 0. 1630* *
( 48. 0)
0. 23 ? 0. 174* *
( 47. 7)
与生理盐水组比较: * P < 0. 05, * * P < 0. 01; ( )给药组对足跖肿胀的抑制率( % )
结果见表 2, 表明广东土牛膝 3 个剂量范围, 对二甲
苯引起的小鼠耳肿胀均有较强的抑制作用。其抑制强度
与阿司匹林的相似。
表 2 广东土牛膝对二甲苯致小鼠耳壳炎症的影响
组别 剂量
( g#Kg-1)
n 耳肿胀值(mg) 抑制率
( % )
正常对照 等容量 10 30. 39? 4. 2782
广东土牛膝 8 10 17. 25? 5. 4667* * 53. 66
12 10 16. 83? 3. 4590* * 41. 49
16 10 16. 75? 3. 7966* * 50. 15
阿司匹林 0. 8 10 17. 95? 2. 5713* * 42. 04
与正常对照组比较: * * P < 0. 01
表 3 广东土牛膝对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透
性增高的影响
组别 剂量
( g#Kg-1)
n 耳肿胀值(mg) 抑制率
( % )
模型对照 等容量 10 1. 8957 ? 0. 0681
广东土牛膝 8 10 1. 2728 ? 0. 5693 32. 86
12 10 1. 2292 ? 0. 3474* * 35. 16
16 10 1. 1942 ? 0. 3223* * 37. 00
阿司匹林 0. 8 10 0. 6913 ? 0. 3164* * 63. 53
与模型对照组比较: * * P < 0. 01
对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响[4 ]
取小鼠 50 只,雌雄各半, 随机等分为 5组。给药方法、
剂量、药的容量同上,给药后 0. 5h, 尾 iv0. 5%伊文思蓝生
理盐水溶液 0. 1mL#10g -1体重, 10min 后 ip 0. 7% 冰醋酸
生理盐水 2. 0mL /只, 20min 将小鼠脱颈椎处死, ip生理盐
水 5mL /只,轻揉腹部, 使腹腔内液体充分混匀后,用镊子
镊住并提高后腹部腹壁, 剪一小孔, 吸取腹腔液, 离心
5min, 1000r /min, 取上清液于 SP ) 1105 型可见光分光光
度计 590nm 波长下测定吸光度, 进行 t检验,计算给药组
与正常对照组的差异显著性。结果见表 3, 表明广东土
牛膝 12、16g#Kg -1体重 ig 给药, 对醋酸致小鼠腹腔毛细
血管通透性增高有明显的抑制作用, 但其抑制率较阿司
匹林的小。
对大鼠棉球肉芽肿增生的影响 [5 ] 大鼠 50 只,体重
130~ 150g, 雌雄各半, 在氨基甲酸乙酯轻麻醉和无菌条
件下,于下腹部正中将皮肤作约 1cm 的纵切口, 将 20mg
的灭菌棉球植入两侧腹股沟皮下。术后将大鼠随机分为
5 组, 每组 10只, ig给药。
正常对照组给等容量蒸馏水, 阿司匹林(阳性对照)
组( 0. 8g#Kg -1体重) , 广东土牛膝 3个剂量组 ( 8、12、16g#
Kg
- 1体重 )。手术后当天开始给药, 药容量为 0. 5mL#
100g - 1体重,每天 1 次, 连续 7 天, 第 8 天给药后 0. 5h 将
大鼠脱颈椎处死,取出并剥离棉球肉芽组织。置 60e 烘
箱内干燥 12h 后用电子分析天平称重, 减去棉球重量,即
为肉芽肿净重,进行 t检验, 比较给药组与蒸馏水组之间
的差异性。结果见表 4, 表明广东土牛膝对大鼠肉芽组
织增生有非常显著的抑制作用。其抑制作用较阿司匹林
的强。
表 4 广东土牛膝对大鼠棉球肉芽肿增生的影响
组 别 剂量
( g#Kg -1)
n 肉芽干重( mg) 抑制率
(% )
蒸馏水 等容量 10 70. 10 ? 9. 0394
广东土牛膝 8 10 41. 90 ? 7. 6696* * 43. 08
12 10 44. 18 ? 8. 7820* * 36. 98
16 10 48. 77 ? 7. 3177* * 30. 43
阿司匹林 0. 8 10 61. 30 ? 9. 0361* 12. 55
注:与蒸馏水组比较: * P < 0. 05, * * P < 0. 01
对热板致小鼠痛阈的影响 [5] 取雌性小鼠, 在 55?
0. 5e 的热板上测定每鼠的痛阈(自小鼠放于热板上至出
现舔后足的时间) , 挑选痛阈在 5~ 30s 的小鼠 100 只,随
机分为 5组, 每组 20 只。ip 给药,正常对照组 ip 生理盐
水、阿司匹林组( 0. 4 g#Kg - 1体重)、土牛膝 3个剂量组( 1、
3、5g#Kg - 1体重 ) , ip 容量为 0. 2 mL#10g - 1体重; 给药后
15、30、60min 分别测定小鼠痛阈, 若 60s 仍无反应者, 将
其取出以免烫伤, 该鼠痛阈以 60s计。进行 t 检验: 首先
自身比较,计算小鼠用药前后痛阈差异的显著性,然后,
比较给药组与生理盐水对照组之间差异的显著性。结果
见表 5, 表明广东土牛膝有显著的镇痛作用, 其镇痛效果
与阿司匹林的相似。
对醋酸致小鼠扭体反应的影响 [5] 取小鼠 100 只,
雌雄不拘, 随机分为 5 组, 每组 20 只, ip 给药, 正常对照
组给等容量生理盐水、阿司匹林 (阳性对照) 组( 0. 1g#
Kg - 1体重)、广东土牛膝 3 个剂量组( 0. 5、1. 0、1. 5 g#Kg - 1
体重) , ip容量为 0. 2mL#10g -1体重, 在 20 e 室温内进行
实验,给药后 30min, 每只小鼠 ip0. 6%冰醋酸溶液(新配)
0. 2mL,将后肢伸展, 腹部收缩, 臀部抬高, 躯干扭曲(扭
第 8 期 刘晓燕等: 广东土牛膝抗炎镇痛的研究
中医药
1567
学刊
体) ,作为疼痛指标。记录 15min 内小鼠扭体次数, 计算
扭体反应的抑制率, t检验, 比较给药组与正常对照组之
间的差异显著性。结果见表 6, 表明广东土牛膝对醋酸
致小鼠扭体反应有非常显著的抑制作用。其抑制强度与
阿司匹林的相似。
表 5 广东土牛膝对热板致小鼠痛阈的影响
组别 剂量
( g#Kg- 1)
n 给药前痛阈( s) 给药后痛阈( s)
15min 30min 60min
生理盐水 等容积 20 12. 30 ? 3. 31 14. 98 ? 4. 35 12. 55 ? 4. 07 13. 56 ? 3. 67
阿司匹林 0. 4 20 12. 36 ? 3. 04 17. 31 ? 7. 07* * 19. 70 ? 10. 53* * v v 24. 61 ? 11. 72* * v v
广东土牛膝 1 20 11. 68 ? 4. 59 16. 77 ? 7. 36* * 19. 05 ? 9. 17* * v v 24. 99 ? 9. 94* * v v
3 20 12. 41 ? 3. 12 16. 98 ? 5. 61* * 19. 84 ? 9. 12* * v v 25. 21 ? 9. 54* * v v
5 20 12. 13 ? 4. 14 17. 13 ? 6. 40* * 19. 94 ? 8. 71* * v v 26. 17 ? 9. 31* * v v
与给药前比较: * * P < 0. 01与生理盐水组同一时间的比较: v vP < 0. 01
表 6 广东土牛膝对醋酸致小鼠扭体反应的影响
组 别 剂量
( g#Kg- 1)
n 扭体数(次) 抑制率
( % )
生理盐水 等容量 10 28. 20 ? 2. 06
广东土牛膝 0. 5 10 6. 00 ? 1. 37* * 78. 72
1. 0 10 5. 91 ? 1. 49* * 79. 04
1. 5 10 5. 83 ? 1. 87* * 79. 32
阿司匹林 0. 1 10 6. 05 ? 1. 51* 78. 55
与生理盐水组比较: * * P < 0. 01
3 急性毒性试验
小鼠作试验动物, 预试后,选取 50 只小鼠, 随机分为
5组, ig给药, 组间剂量比值为 1B0. 8, 连续给药 7 天, 逐
日记录动物毒副反应和死亡的分布, 死亡动物及时解剖,
肉眼观察心、肝、肾、脾、胃、肠, 未见明显病变,用改进寇
氏法计算,结果: LD50为 208. 75, LD50的 95%平均可信度
为 183. 36~ 234. 14。
4 小结与讨论
广东土牛膝对蛋清致大鼠足跖肿胀具显著抑制作
用, 对二甲苯致小鼠耳壳肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管
通透性增高均有明显的抑制作用, 能非常显著地抑制棉
球肉芽肿的增生,表明广东土牛膝对炎症早期毛细血管
扩张、通透性亢进、渗出和水肿均有抑制作用, 抗炎效果
较好。其抗炎效果与水杨酸类药物, 例如阿司匹林的相
似,其机理可能是抑制炎症部位环氧酶, 使 PGS合成减
少,炎症减轻。或者能减少缓激肽的形成,抑制透明质酸
酶奏效。
广东土牛膝资源丰富,抗炎镇痛效果好,毒副作用较
小,民间已广泛应用。该药的开发利用, 将造福于人类。
对其抗炎镇痛的机理,有待进一步研究。
参考文献
[1 ]余传隆,黄泰康,丁志遵,等.中草药辞海1M2. 第 1卷,北京:
中国医药科技出版社, 1993, 597~ 598
[2 ]罗献瑞,黄淑美,吴德邻,等.实用中草药彩色图集1M2.第二
册,广州:广东科技出版社, 1993, 182~ 183
[3 ]来平凡.牛膝类中药的本草历史考证1J2.广州: 广州中医学
院学报, 1994, 11( 2) : 111~ 112
[4 ]陈奇.中药药理研究方法1M2. 北京: 人民卫生出版社, 1993,
308~ 311, 305~ 307, 112~ 115
[5 ]徐淑云,卞如濂, 陈修,等. 药理实验方法学1M2. 第三版,北
京:人民卫生出版社, 2002, 886~ 887, 917~ 918, 886~ 887, 882
~ 883
(上接第 1547页)
智不多。0所以, 采用百会、颞三针、额三针、枕三针、合谷、
太冲,醒脑开窍,采用足三里、三阴交、外关以滋补肝肾、
疏通经络, 两二者合用则生精补髓,安神开窍,致使精能
生神, 精足智多。
儿童精神发育迟滞的康复治疗是一个长期的过程,
将伴随患儿的整个发育期, 许多精神发育迟滞儿童最终
的预后在很大的程度上取决家长对儿童的态度以及对患
儿功能障碍及低下的有效处理122。采用针刺为主的方
法, 配合精经发育疗法、认知语言训练, 能有效地减少或
减轻该病症状的发生, 明显提高精神发育迟滞患儿认知、
语言和运动功能,干预得越早,坚持的时间越长, 越能缩
短患儿与正常儿的差距。
父母亲的文化程度越高,越有利于患儿的早期诊断,
表 2、3 表明,父母亲高中文化程度与父母初中文化程度
的患儿的诊断年龄呈显著性差异 ( P < 0. 01)。针刺是
治疗儿童精神发育迟滞的一种有效的方法。
参考文献
112陶国泰.儿童少年精神医学1M2.南京:江苏科学技术出版社,
1999: 189
122Greenspan S, White R. The efficacy of preventive intervention1J2.
Bull Natl Ctr. Clin infant Program, 1985, 5: 1~ 5
5中医药学刊6期待您的关注!
中 医 药 学 刊 2004 年第 22卷
中医药
1568
学刊