全 文 ：收稿日期:2008-04-27;　修订日期:2008-12-24
基金项目:贵州省省长基金〔No.(2006)55〕;
贵州省科学技术基金〔No.[ 2008] 2162〕
作者简介:陶　玲(1975-),女(汉族),贵州赫章人 ,现任贵阳医学院副教
授 ,硕士学位 ,主要从事中药现代化研究工作.
＊通讯作者简介:沈祥春(1973-), 男(汉族),山东郯城人 , 现任贵阳医学
院教授 ,博士学位 ,主要从事分子与生化药理和中药民族药活性成分研究
工作.
大蝎子草抗炎镇痛活性部位研究
陶　玲 , 支　娜 , 柏　帅 , 杨如会 , 沈祥春＊
(贵阳医学院 ,贵州 贵阳　550004)
摘要:目的 研究大蝎子草抗炎镇痛的活性作用部位 , 为进一步寻找活性成分奠定基础。方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿
胀及皮肤毛细血管通透性实验 、醋酸致小鼠扭体反应与小鼠热板致痛等实验动物模型进行整体动物生物活性评价。结
果 大蝎子草提取物水层 、醋酸乙酯层和氯仿层能够显著减少醋酸致小鼠扭体次数 , 延长热板痛反应时间 , 水层还能显著
抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性增高 ,与对照组比较均有显著性差异。结论 大蝎子草提取物水层有
较好的抗炎镇痛作用 , 醋酸乙酯层和氯仿层具有镇痛作用 , 为活性成分的寻找提供了研究基础和方向。
关键词:大蝎子草;　抗炎;　镇痛
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)06-1404-02
　　活麻药用历史悠久 ,在《楚彝本草》《滇药录》《藏本草》等均
有记载 , 主要用于治疗中风不语 , 咳嗽多痰 、风湿疼痛 、跌打损伤 、
骨折等。根据文献资料我国大部分地区所用活麻为荨麻科荨麻
属的植物 , 因此 ,目前国内外在荨麻属药用植物的活性研究较多 ,
由于其明确的疗效 , 引起相关科研人员的日益重视 [ 1] 。
活麻作为治疗药物以红禾麻药名被 2003版《贵州省中药材 、
民族药材质量标准》收录 ,该标准收载的活麻原植物为荨麻科珠
牙艾麻 Laporteabulbifera(Sieb.etZucc.)Wedd.的新鲜或干燥
全草 [ 2] 。我们经过广泛的调查 , 贵州不少民族地区以荨麻科蝎
子草属植物大蝎子草 Girardiniadiversifolia(Link)Fris的全草或
根作为活麻药材广泛使用 , 而目前对该植物的相关研究未见报
道。为促进植物资源的合理开发和利用 ,本研究以大蝎子草 Gi-
rardiniadiversifolia(Link)Fris为研究对象 , 按照传统部位分离
的方法 , 采用经典抗炎镇痛模型研究其活性部位 , 为进一步指导
大蝎子草的研究开发提供实验依据。
1　材料
1.1　药材与药物制备 大蝎子草 ,采集于贵州省贵阳市花溪区 ,
经贵阳医学院龙庆德老师鉴定为蝎子草属植物大蝎子草 Girardi-
niadiversifolia(Link)Fris的地上部分 , 药材标本留于贵阳医学
院药学院药用植物学和生药学教研室。药材经低温干燥后 , 取 1
kg加入 95%乙醇 8L进行提取 , 回流提取 3次 , 抽滤 , 合并滤液
在旋转蒸发仪上进行浓缩 , 浓缩液依次经石油醚 、醋酸乙酯 、氯仿
萃取 , 分别得到各部位萃取物 21.4, 3.2, 1.0 g和剩余水层 34.8
g。
1.2　试剂 阿司匹林 , 中国医药公司上海分公司产品(批号
840130);醋 酸 , 上海申 博化工 有限公 司产品 , AR(批号
0501101);甲酰胺 ,天津市科密欧化学试剂开发中心产品 , AR(批
号 20030909);二甲苯 , 重庆川江化学试剂厂产品 , AR(批号
20070716);伊文思蓝 , 中国医药集团上海化学试剂公司进口分装
(批号 F20020913);氯化钠 ,重庆川江化学试剂厂产品 , AR(批号
20060109)。
1.3　动物 昆明种小鼠 , ♀♂兼有 ,体重 18 ～ 22 g,由贵阳医学院
动物实验中心提供 [动物合格证号:SCXK(黔)2002-0001] 。
1.4　仪器 BS223S型分析天平 , 北京赛多利斯仪器系统有限公
司产品;HH-601超级恒温水浴锅 , 江苏金坛市环宇科学仪器厂
产品;GJ28402型热板测痛仪 , 浙江宁海白石电子医药仪器厂产
品;722光栅分光光度计 , 上海第三分析仪器厂产品。
2　方法
2.1　抗炎实验
2.1.1　对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 参照文献方法 [ 3] , 选
取体重(20 ±2)g小鼠 60只 , 随机分为 6组 , 即模型组 、阿司匹
林组(300mg/kg)、大蝎子草石油醚部位(103mg/kg)、氯仿部位
(16 mg/kg)、醋酸乙酯部位(5 mg/kg)及水层(174 mg/kg)。 各
给药组均相当于大蝎子草生药剂量为 5g/kg, 每组 10只小鼠 , 给
药容积为 10 ml/kg, 连续给药 5d, 末次给药 40 min后 ,于小鼠右
耳(两面)均匀涂抹二甲苯 20 μl/只致炎 , 左耳不涂 ,同时立即尾
静脉注射 1%伊文思蓝 0.1 ml/10 g。 20 min后将小鼠颈椎脱臼
处死 , 用直径为 8 mm的打孔器沿左右耳片同一部位打下圆耳
片 , 在电子天平上称重 , 右耳与左耳重量之差即为肿胀度。并计
算肿胀抑制率 ,肿胀抑制率(%)=(模型组平均肿胀度 -给药组
平均肿胀度)/模型组平均肿胀度 ×100%。
2.1.2　伊文思蓝标准曲线的的制作 [ 4] 精密称取伊文思蓝粉末
0.010g, 置于 100 ml容量瓶中 , 用甲酰胺溶解并定容 , 配成 100
μg· ml-1溶液 , 在分别精密吸取 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 ml该溶液
于 10ml容量瓶中并再次用甲酰胺定容 ,以 620 nm波长 , 1 cm光
径测定其吸光度(A), 甲酰胺调零 , 以吸光度 (A)对溶液中伊文
思蓝的浓度(C)求得回归方程为:A=0.122 8C+0.006 8, r=
0.999 2,伊文思蓝浓度在 2.5 ～ 80 μg· ml-1与吸光度值呈良好
的线性关系。
2.1.3　对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 参照文献方法 [ 5] , 将
致炎右耳片剪成数片浸入 2 ml甲酰胺中 , 38℃水浴 48 h将染料
渗出 ,离心 , 上清液于 620nm处测吸光度 A值 , 按 “ 2.1.2”项伊文
思蓝标准曲线计算伊文思蓝的含量。
2.2　对热板致痛的影响 [ 6] 取雌性昆明种小鼠 , 体重在(20 ±2)
g,置于(55±0.5)℃的热板上 , 记录小鼠自放置于热板上至出现
舔后足反应所需的时间 , 即为痛阈值 , 凡小于 5 s或大于 30 s及
跳跃的均淘汰 , 合格小鼠再测 1次痛阈值 , 取两次平均值作为各
鼠痛阈值。选取合格小鼠 60只 ,按体重与痛阈值随机分为 6组 ,
10只 /组 ,分组与给药同 “ 2.1.1”项。于末次给药 40 min后测定
痛阈值(用药后小鼠痛阈大于 60 s者中止实验并计以 60 s), 计
算痛阈提高百分率 ,痛阈提高百分率(%)=(给药后平均痛阈值
-给药前平均痛阈值)/给药前平均痛阈值 ×100%。
2.3　冰醋酸致小鼠扭体法 [ 7] 取昆明种小鼠 60只 , ♀♂各半 , 按
体重随机分为 6组 , 分组与给药同 “ 2.1.1”项 ,于末次给药 40min
后 , 小鼠腹腔注射 0.6%冰醋酸 0.1 ml/10 g, 观察并记录 20 min
内小鼠的扭体次数并计算镇痛抑制率 ,镇痛抑制率(%)=(模型
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6
组平均扭体次数 -给药组平均扭体次数)/模型组平均扭体次数
×100%。实验过程中室温维持在(18±1)℃。
2.4　统计学处理 实验数据用 SPSS10.0统计分析软件进行分
析 , 两两比较用 t检验 , P<0.05为差异显著 , P<0.01为极显著
差异。
3　结果
3.1　对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 小鼠右耳涂二甲苯后 ,
耳廓显著肿大 , 肿胀度高达(11.20±0.53)mg, 阿司匹林显著抑
制二甲苯所导致小鼠耳廓肿胀的急性炎症反应 ,表现为肿胀度降
低 , 抑制率为 63.17%, 大蝎子草各提取部位中 , 水层对二甲苯所
导致的急性炎症反应具有显著的抑制 , 抑制率为 45.68%, 而醋
酸乙酯 、氯仿及石油醚等部位未见显著抑制作用。结果见表 1。
表 1　大蝎子草各提取部位对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
肿胀度
m/mg
抑制率
(%)
模型　　　　 - 11.20±0.53 -
阿司匹林　　 300 4.12±2.59＊＊ 63.17
大蝎子草水层提取　　 174 6.08±2.58＊ 45.68
大蝎子草醋酸乙酯提取 5 9.44±6.13 15.71
大蝎子草氯仿层提取　 16 8.62±9.06 23.04
大蝎子草石油醚提取　 103 10.22±6.02 8.93
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P< 0.01;n=10
3.2　对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性的影响 小鼠尾静
脉注射伊文思蓝后 , 由于二甲苯导致小鼠耳部充血 、水肿 ,因此伊
文思蓝随血流到达小鼠耳部分布较多。 抗炎药物抑制二甲苯所
致耳廓炎症 , 小鼠耳片伊文思蓝含量减少。表 2实验结果提示 ,
阿司匹林和大蝎子草水层部位具有显著的抑制炎症渗出 ,降低皮
肤毛细血管通透性的作用。
表 2　大蝎子草各提取部位对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1 吸光度(A)
伊文思蓝浓度
C/μg· ml-1
模型　　　　 - 0.609±0.190 49.04±14.97
阿司匹林　　 400 0.152±0.080＊＊ 11.82±5.94＊＊
大蝎子草水层提取　　 174 0.393±0.220＊ 31.44±17.32＊
大蝎子草醋酸乙酯提取 5 0.657±0.309 52.95±24.63
大蝎子草氯仿层提取　 16 0.484±0.246 38.89±19.48
大蝎子草石油醚提取　 103 0.587±0.249 47.26±19.72
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P< 0.01;n=10
3.3　对热板致小鼠疼痛反应的影响 连续给药 5d后 , 阿司匹林
组 、大蝎子草水层部位 、醋酸乙酯层 、氯仿层均显著延长小鼠的痛
阈值 , 与模型组比较差异显著 , 痛域值提高百分率分别为
43.92%, 31.95%, 19.95%, 20.56%。结果见表 3。
表 3　大蝎子草提取部位对小鼠热板法痛阈的影响( x±s)
组别 剂量C/mg· kg-1
痛阈值 C/s
给药前 给药后
痛阈提高
百分率(%)
模型　　　　 - 16.35±3.64 13.44±4.42 -
阿司匹林　　 400 16.19±4.53 23.30±7.24＊＊ 43.92
大蝎子草水层提取　　 174 16.78±5.13 22.15±6.91＊＊ 31.95
大蝎子草醋酸乙酯提取 5 15.96±4.37 19.11±2.94＊＊ 19.95
大蝎子草氯仿层提取　 16 15.82±5.03 19.07±3.35＊＊ 20.56
大蝎子草石油醚提取　 103 16.01±3.67 15.78±7.67 -
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
3.4　对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 结果显示大蝎子草水层 、
醋酸乙酯和氯仿部分能够有效抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛
反应 , 减少扭体次数。结果见表 4。
表 4　大蝎子草各提部位对醋酸致小鼠扭体反应的影响( x±s)
组别 剂量C/mg·kg-1 扭体次数
抑制率
(%)
模型　　　　 - 36.50±11.80 -
阿司匹林　　 400 16.30±9.70＊＊ 53.3
大蝎子草水层提取　　 174 18.80±10.90＊＊ 48.6
大蝎子草醋酸乙酯提取 5 18.90±12.90＊ 48.2
大蝎子草氯仿层提取　 16 22.30±11.30＊ 39.0
大蝎子草石油醚提取　 103 27.10±11.10 25.8
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P< 0.01;n=10
4　讨论
大蝎子草为荨麻科蝎子草属植物 Girardiniadiversifolia
(Link)Fris系贵州少数民族民间习用的活麻原药材之一。根据
苗族用药经验 ,大蝎子草具有舒筋活络 、消肿止痛等功效 ,主要用
于治疗腰腿痛 、风湿痛 、跌打损伤 、前列腺炎等 , 具有独特的疗效 ,
且通过民间广泛应用证明其作用安全可靠。
本研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀 、皮肤毛细血管通透性增
高两种非特异炎症模型评价大蝎子草对早期急性炎症的影响 , 以
热板法和醋酸所致扭体实验两种用于镇痛药初筛的经典常用方
法评价其镇痛作用及可能的活性部位。实验结果证实 ,大蝎子草
提取物的水层部分能够有效抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤
毛细血管通透性增高 ,提高小鼠热刺激体表的痛阈 ,抑制醋酸刺
激腹腔粘膜引起的痛反应 ,减少扭体次数。氯仿层和醋酸乙酯层
也能够提高小鼠热刺激体表的痛阈 ,抑制醋酸刺激腹腔粘膜引起
的痛反应 , 减少扭体次数;但是本次研究未见明显的抗炎作用。
而石油醚层在本次研究中未见抗炎镇痛作用 ,这可能与石油醚主
要成分为油脂等成分相关。
以上实验结果证实 ,民间采用水煎煮的用药方法可以最大程
度地得到药效的活性部位 , 发挥药物的抗炎镇痛作用;同时为进
一步研究其活性成分提供了研究方向。其抗炎作用的活性成分
及可能的作用机制有待于进一步深入研究。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期