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壮药五指那藤的质量标准研究



全 文 :Central South Pharmacy. February 2015, Vol.13 No.2 中南药学 2015 年 2 月 第 13 卷 第 2 期
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  五指那藤,俗名尾叶那藤 [1-2]、牛藤 [3]、木通七叶
莲 [4]等,为木通科野木瓜属植物尾叶那藤 Stauntonia
obovatifoliola Hayata subsp. urophylla(Hand.-Mazz.)H.
N. Qin的干燥藤茎。五指那藤具有祛风止痛、舒筋活络、
消肿散毒、散热利尿的作用。用于风湿骨痛、三叉神经
痛、坐骨神经痛、胃痛、手术后疼痛、跌打损伤、水肿、
急性肾炎、尿血及乳腺增生 [3]。《中华本草》[2]、《中
国中药资源志要》[4]、《广西药用植物名录》[1]等大型辞
书中对其有简要记述。五指那藤原植物主要分布于广西、
广东、福建、江西、浙江等省区的山谷林缘或山脚灌丛
中 [5-6]。五指那藤为壮、瑶民族习用药材,壮药名勾拿。
在广西以外的几个省份,该植物主要以其果实作为野生
水果食用,以其干燥藤茎入药的情况较少。本课题组曾
对全国三大药市之一、广西最大的药材流通集散地玉林
药市以及广西区内较大的药材交易市场荔浦药市进行走
访调查,发现五指那藤药材均为广西区内出产,未见省
外流入的样品。此前,未见有关五指那藤生药学、质量
标准方面的研究报道,本试验通过对来源不同的 13批五
指那藤药材进行了性状、显微、薄层鉴别,并检查了其
水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物含量,拟收载于《广
西壮药质量标准(第二卷)》,为五指那藤的质量标准
及该药用植物资源的开发利用提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
  硅胶GF254板、硅胶G板、硅胶H板(青岛海洋化工厂,
简称厂 1);硅胶 GF254板、硅胶 G板、硅胶 H板(青岛
硕远化工有限公司,简称厂 2);KQ-5200数控超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限公司);CP225D电子分析天
基金项目:广西区食品药品监督管理局《 广西壮族自治区壮药质量标准(第二卷)》标准研究项目(No. MZY2010030)。
作者简介:陈乾平,男,助理研究员,主要从事药材质量控制研究,E-mail:chenqp79@126.com *通讯作者:谷筱玉,女,高级工程师,
主要从事药材质量控制研究,Tel:(0771)2443050,E-mail:guxiaoyu1977@yahoo. com.cn
壮药五指那藤的质量标准研究
陈乾平,谷筱玉 *,龙海荣,胡莹,周小雷,赵以民,彭玉德,黄宝优(广西壮族自治区药用植物园,南宁
530023)
摘要:目的 制定壮药五指那藤的质量标准,为该药用植物资源的开发利用提供科学依据。方法 依据中国
药典 2010 年版一部附录方法对 13批壮药五指那藤进行显微、薄层色谱鉴别;对水分、总灰分、酸不溶性灰
分和浸出物含量进行检查。结果 对五指那藤药材的性状、显微特征进行了描述;建立了五指那藤的薄层鉴
别方法,斑点清晰,分离度好;根据 13批次五指那藤测定结果,确定水分应≤ 13.0%,总灰分应≤ 9.0%,
酸不溶灰分应≤ 1.2%。浸出物以稀乙醇为溶剂,热浸法测定,浸出物应≥ 6.0%。结论 所建标准可用于五
指那藤药材的质量控制。
关键词:五指那藤;质量标准;薄层色谱法
中图分类号:R282    文献标识码:A    文章编号:1672-2981(2015)02-0182-04
doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2015.02.020
Quality standard of stem of Stauntonia obovatifoliola
Hayata subsp. urophylla (Hand.-Mazz.) H. N. Qin
CHEN Qian-ping, GU Xiao-yu*, LONG Hai-rong, HU Ying, ZHOU Xiao-lei, ZHAO Yi-min, PENG Yu-de, HUANG
Bao-you (Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants, Nanning 530023)
Abstract: Objective To provide scientific basis for the utilization and development of the stem of Stauntonia
obovatifoliola Hayata subsp. urophylla (Hand.-Mazz.) H. N. Qin by establishing its quality control standard. Methods
Microscopic and TLC identification were adopted to carry out the qualitative identification. The mealsurement of
inspection items and extractum was according to Chinese Pharmacopeia (2010 edition). Results Propertics and
microscopic characteristics of Stauntonia obovatifoliola Hayata subsp. urophylla (Hand.-Mazz.) H. N. Qin were
described. The moisture in the stem was lower than 13.0%, with the total ash content was less than 9.0%, the
content of acid-insolubal ash equal or less than 1.2%. The content of hot homeopathic alcohol was over 6.0%. The
spots of TLC were clear and well-sparated. Conclusion The quality standard is suitable for the stem of Stauntonia
obovatifoliola Hayata subsp. urophylla (Hand.-Mazz.) H. N. Qin.
Key words: Stauntonia obovatifoliola Hayata subsp. urophylla (Hand.-Mazz.) H. N. Qin; quality standard; TLC
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平(德国 Sartorius公司,精度:0.1 mg);明澈 TM-24UV
超纯水系统(美国默克密理博公司);DM2500生物显微
镜(德国Leica公司);DFC350FX数码摄像头及软件包(德
国 Leica公司);RM2255全自动轮转切片机(德国 Leica
公司)。
1.2 试药
  对照药材:课题组于广西灌阳县采集了尾叶那藤带
花和叶的植物样品,并制作成腊叶标本,在广西区食药
监局统一安排下,将一份腊叶标本分别送往广西中医药
研究院方鼎研究员和广西食品药品检验所黄燮才主任中
药师处鉴定,2位专家根据对照尾叶那藤植物学特征,均
单独鉴定该腊叶标本为尾叶那藤。课题组将该份腊叶标
本植株上的干燥藤茎指定为五指那藤的对照药材,其药
材编号为WZNT-1。
  供试药材:从广西不同县市收集供收集了 12批的五
指那藤药材(编号为WZNT-2~ 13),经广西中医药研
究院方鼎研究员和广西食品药品检验所黄燮才主任中药
师共同鉴定为木通科野木瓜属植物尾叶那藤 Stauntonia
obovatifoliola Hayata subsp. urophylla(Hand.-Mazz.)H. N.
Qin及其干燥藤茎。
  水为超纯水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 性状
2.1.1 性状鉴别 本品呈圆柱形,常为斜切片或段片,
直径 0.5~ 3 cm;表面灰黄色至灰褐色,粗糙,具不规
则纵沟纹;皮部易剥离,剥离处呈黄棕色,具密集纵纹理;
质硬,不易折断;切面皮部棕褐色,厚 1~ 5 mm;木
部灰黄色,有放射状纹理及密集小孔;髓部黄白色或淡
棕色;气微,味微苦。
2.2 显微鉴别
2.2.1 茎横切面鉴别 切面呈圆形或椭圆形,表皮为一
列长方形细胞,皮部棕褐色,皮层薄壁细胞数列,排列
紧密,韧皮部较宽;木部灰黄色,维管束外韧型,排列
成类圆形,中柱鞘纤维束呈帽状;髓部发达(见图 1)。
图 1 五指那藤茎横切面显微全貌图
Fig 1 Microscopy of the stem of Stauntonia obovatifoliola
1. 表皮(epidermis);2. 皮层(cortex);3. 中柱鞘(pericycle);4.
韧皮部(phloem);5. 木质部(xylem);6. 髓部(medulla)
图 2 五指那藤粉末显微图
Fig 2 Microscopy of the stem power of Stauntonia obovatifoliola
群分布,形状不一,纹孔极孔沟较明显;具缘纹孔导管
较大,多破碎,具缘纹孔排列紧密;显微鉴别要点:纹
孔呈一字形或十字形相互交错的木纤维在本品粉末中非
常明显,具有代表性,是其显微鉴定的主要特征(见图 2)。
图 3 不同供试品制备方法五指那藤 TLC图
Fig 3 TLC of Stauntonia obovatifoliola with different preparation
methods
A. 95%乙醇超声提取法(95% ethanol ultrasonic extraction);B.乙
酸乙酯超声提取法(ethyl acetate ultrasonic extraction);1.对照药材
(proposed crude drug);2~ 13. 采摘药材(materials collected)
注(Note):展开剂:石油醚(60~ 90 ℃)-乙酸乙酯(8 :1)
[developing solvent:petroleum ether (60- 90 ℃)-ethyl acetate,8
:1)];吸附剂:硅胶 GF254板,规格:5 cm×10 cm(adsorbent:
silica gel GF254 plate,specifi cation 5 cm×10 cm);显色剂:10%磷
钼酸显色(color reagent:10% solution of phospho-molybdic acid)。
2.3 薄层色谱鉴别
2.3.1 供试品制备方法比较研究 分别比较了以下几种
供试品制备方法:① 取本品药材粉末 3.0 g于锥形瓶中,
加入 95%乙醇 80 mL超声提取 1 h,过滤,蒸干,残渣
用甲醇 5 mL溶解并转移至小瓶中,作为供试品溶液;②
取本品药材粉末 3.0 g于锥形瓶中,加入乙酸乙酯 50 mL
超声提取 1 h,过滤,滤液蒸干,残渣用甲醇 2 mL溶解
并转移至小瓶中,作为供试品溶液。结果显示方法②制
备的供试品斑点清晰(见图 3)。
2.2.2 粉末显微鉴别 粉末呈黄棕色;木纤维成束或单
个散在,纹孔呈一字形或十字形相互交错。石细胞多成
2.3.2 展开系统比较研究 将 13批五指那藤药材按照
“2.3.1”项下②的制备方法制备,对以下 3个展开系统
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图 4 不同展开剂条件下五指那藤 TLC 图
Fig 4 TLC of Stauntonia obovatifoliola under different developing solvents
A.展 开 剂 A(developing solvent A);B. 展 开 剂 B(developing solvent B);C. 展 开 剂 C(developing solvent C);1. 对照药材(reference
drug);2~ 13. 采摘药材(materials collected)
注(Note):硅胶 GF254薄层预制板规格 5 cm×10 cm(adsorbent:effi cient GF254 plate silica gel plate,specifi cation 5 cm×10 cm)
图 5 不同型号薄层板条件下五指那藤 TLC 图
Fig 5 TLC of Stauntonia obovatifoliola with different specifi cations
A.硅胶 GF254板(silica gel GF254);B. 硅胶 G板(silica gel G);C. 硅胶 H板(silica gel H);1、8、15为对照药材(1,8 and 15:the
proposed crude drug);2~ 7,9~ 14为采摘药材(2- 7,9- 14:materials collected)
注(Note):薄层预制板规格均为 10 cm×20 cm(specifi cation 10 cm×20 cm)。
2.3.3 不同型号薄层板比较研究 从提高分离度角度
考虑,将薄层板规格从 5 cm×10 cm更换成 10 cm×20
cm。将 13批五指那藤药材按照“2.3.1”项下②制备方
法制备,和“2.3.2”项下③展开系统展开,分别在以下
3种型号的硅胶板上进行薄层层析:① 硅胶 GF254板;②
硅胶 G板;③ 硅胶 H板。结果显示② 硅胶 G板所出现
的斑点清晰、拖尾少(见图 5)。
进行比较:① 展开剂 A:石油醚(60~ 90 ℃)-乙酸
乙酯(8 :1),10%磷钼酸显色;②展开剂 B:石油醚
(60~ 90 ℃)-乙酸乙酯(9 :1),10%磷钼酸显色;
③ 展开剂 C:石油醚石油醚(60~ 90 ℃)-乙酸乙酯 -
甲酸(10 :1 :0.05),10%磷钼酸显色。结果显示③
展开系统斑点清晰、分离度好、无明显拖尾现象(见图 4)。
2.3.4 耐用性研究 将 13批五指那藤药材按照“2.3.1”
项下②方法制备,“2.3.2”项下③系统展开,用不同厂家(厂
1和厂 2)的硅胶 G板(10 cm×20 cm)进行薄层层析,
比较了不同温度(8 ℃和 40 ℃)和湿度(45%和 80%)
情况下的薄层色谱。结果均显示主斑点个数及分离度无
明显变化,证明该薄层条件耐用性良好。
2.3.5 重现性试验 将 13批五指那藤药材按照“2.3.1”
项下②方法制备,“2.3.2”项下③系统展开,用厂 1的
硅胶 G板(10 cm×20 cm)进行薄层层析,各重复试验
3次。结果在横纵向的反复试验中,薄层色谱斑点均清晰,
且供试品溶液色谱的斑点均与对照药材溶液色谱斑点出
现在相应位置上,表明方法重现性良好。
  经过以上试验,最终确立了以下 TLC 鉴别方法:取
本品粉末 3 g,加入乙酸乙酯 50 mL,超声处理 1 h,滤
过,滤液蒸干,残渣加甲醇 2 mL使溶解,作为供试品溶
液。照薄层色谱法(中国药典 2010年版一部附录Ⅵ B)
试验,吸取上述 2种溶液各 8~ 15 μL,分别点于同一硅
胶 G薄层板上,以石油醚(60~ 90 ℃)-乙酸乙酯 -甲
酸(10 :1 :0.05)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以
10%的磷钼酸乙醇液,在 105 ℃下加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相
同的深蓝色斑点。
2.4 检查
2.4.1 水分检查 照中国药典 2010 年版一部附录Ⅸ H
第一法进行试验,结果 13批五指那藤药材水分质量分
数为 6.6%~ 11.7%,根据最高测定值,并考虑到药材
为南方所产,而南方气候较为湿润,故暂规定本品水分
≤ 13.0%(见表 1)。
2.4.2 总灰分、酸不溶性灰分检查 照中国药典 2010 年
版一部附录Ⅸ K 进行试验,结果 13批五指那藤药材总
灰分质量分数为 2.8%~ 9.1%,以最高测定值设限,故
暂规定本品总灰分≤ 9.0%。酸不溶性灰分质量分数为
0.4%~ 1.2%,以最高测定值设限,故暂规定本品酸不溶
性灰分≤ 1.2%(见表 1)。
2.4.3 浸出物 照中国药典 2010 年版一部附录Ⅹ A 的方
法,以乙醇为溶剂,用热浸法测定。结果 13批五指那藤
药材的浸出物质量分数为 6.4%~ 14.5%,以最低测定值
设限,暂定浸出物含量≥ 6.0%(见表 1)。
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3 讨论
  目前,有关五指那藤植物化学、药理活性方面的研
究较少,陈晓东等 [7]从五指那藤中分离鉴定到 9种化合
物,分别为软木三萜酮、二十烷酸、羽扇豆醇、谷甾醇、
豆甾醇、齐墩果酸、常春藤皂苷元 3-O-α-L-吡喃鼠李糖
基 -(1→ 2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、β-胡萝卜苷、蔗
糖。彭小冰等 [8]分离鉴定到 6种化合物为羽扇豆酮、羽
扇豆醇、豆甾醇、3β-乙酰基齐墩果酸、resinone、胡萝
卜苷。有文献 [9]报道其含有的16β-hydroxy-2,3-seco-lup-20
(29)-ene-2,3-dioic acid有抑制 HIV-1蛋白酶的活性,
但该成分与五指那藤跌打止痛的用途并不相符。迄今为
止,关于五指那藤作为壮药使用时的主要有效成分及作
用机制的研究目前尚处于空白。
  TLC鉴别中,本研究曾试图以与五指那藤同样有跌
打止痛效果的齐墩果酸为对照品,对五指那藤进行薄层
色谱鉴别和质量控制,但五指那藤对照药材及样品中薄
层色谱中均未显示出齐墩果酸的斑点,表明该提取物中
不含有齐墩果酸或含量较低,不能用作薄层鉴别的指标
成分。因此,在未能找到适宜的薄层鉴别指标成分的情
况下,采用经专家鉴定的五指那藤作为对照药材用于五
指那藤的薄层鉴别。预试验阶段,曾用对照药材供试液
进行了展开剂及显色剂的初步摸索,尝试过的展开系统
有石油醚(60~ 90 ℃)-乙酸乙酯(4 :1),10%磷
钼酸显色;氯仿 -丙酮(3 :1),10%磷钼酸显色;氯仿 -
甲醇(6 :1),10%磷钼酸显色,石油醚(60~ 90 ℃)-
乙酸乙酯(8 :1),10%磷钼酸显色;石油醚(60~ 90
℃)-乙酸乙酯(4 :1),碘熏;石油醚(60~ 90 ℃)-
乙酸乙酯(4 :1),10%硫酸乙醇显色。经摸索,发现
石油醚 -乙酸乙酯系统有明显的斑点;磷钼酸显色和硫
酸乙醇显色相当,碘熏较差,但硫酸乙醇易吸潮,所以
选择用磷钼酸作为显色剂。
  浸出物检查中,首先对比了 4种不同浓度的乙醇(稀
乙醇、75%乙醇、85%乙醇及乙醇)作为提取溶剂的提
取效果,结果表明,随着乙醇的浓度降低,醇溶性浸出
物含量也随之下降。最终确定乙醇为提取溶剂,照醇溶
性浸出物测定法项下的热浸法测定。
  本文对五指那藤开展了药材性状、显微鉴别、薄层
鉴别、水分、灰分、酸不溶性灰分、浸出物等方面的研究,
初步制定了五指那藤药材质量标准,为五指那藤的质量
控制提供了技术支持,并可为进一步完善和提升五指那
藤药材质量标准提供试验基础。
参考文献
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版 .南宁:广西人民出版社,1986:79.
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[8] 彭小冰,高伟略,胡冬群,等 . 尾叶那藤地上部分化学成
分研究 [J].中药材,2013,36(11):1795-1798.
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from Stauntonia obovatifoliola Hayata subsp [J]. Intermedia,
2008,69(9):1875-1879.
(收稿日期:2014-12-02;修回日期:2014-12-15)
表 1 壮药材五指那藤水分、总灰分、酸不溶性灰分及浸出物含量
Tab 1 Determination of moisture,ash,acid insoluble ash and extract of Stauntonia obovatifoliola Hayata subsp. urophylla (Hand.-Mazz.) H. N. Qin
药材来源
(source)
编号
(number)
水分
(moisture)/%
总灰分
(ash)/%
酸不溶性灰分
(acid insoluble ash)/%
浸出物
(extract)/%
广西灌阳县 WZNT-1 6.6 6.4 0.8 13.0
广西灌阳县 WZNT-2 8.0 5.9 0.6 13.9
广西金秀县 WZNT-3 11.7 5.5 0.7 13.7
广西金秀县 WZNT-4 8.0 6.3 0.9 9.4
广西金秀县 WZNT-5 9.5 5.8 0.7 11.4
广西防城市 WZNT-6 7.4 2.8 0.4 6.4
广西荔浦县 WZNT-7 8.5 6.4 0.8 11.7
广西金秀县 WZNT-8 9.4 5.1 1.0 10.9
广西荔浦县 WZNT-9 11.3 5.5 0.9 14.5
广西龙胜县 WZNT-10 8.6 5.3 0.8 11.9
广西荔浦县 WZNT-11 7.6 6.5 1.1 10.8
广西贺州市 WZNT-12 10.1 9.1 1.2 12.1
广西临桂县 WZNT-13 9.6 6.0 0.8 11.7