全 文 :热带农业科技 2008,31(1)
Tropical Agricultural Science & Technology - 2 0 -
- 2 0 -
橙花长寿花叶柄组织培养技术研究
彭承霞,王力超,梁国鲁,李 柯,夏 兰,陆方方
(西南大学 园艺园林学院,重庆 北碚 400715)
摘要:以橙花长寿花叶柄作为外植体,对其进行不定芽诱导及增殖培养研究,结果表明:最适宜叶柄分化的培养基为MS+6-
BA0.5mg/L+NAA2.0mg/L,最适合芽增殖的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L,生根培养基为1/2MS+IBA0.2mg/L,试
管苗移栽基质中成活率达98%。
关键词:长寿花;叶柄;组织培养
中图分类号:S682 文献标识码:B 文章编号:1672-450X(2 08)01-0020-03
——————————————
Research on Tissue Culture and Plantlet Reproduction From Leafstalk of Kalanchoe blossfeldiana with
Orange Flower
PENG Cheng-xia, WANG Li-chao, LI Ke, XIA Lan, LU Fang-fang
College of Horticulture and Landscape Architecture,Southwest University, Chongqing 400715
Abstract: The inducing adventitious shoots and proliferation culture of Kalanchoe blossfeldiana was studied by using the leafstalks as
explants .The results indicated that the most appropriate media in culture leafstalks was MS+BA 0.5 mg/L + NAA 2.0 mg/L; The appropriate
medium for inducing buds from explants was MS+BA 0.5 mg/L + NAA0.4 mg/L and the most appropriate medium of 1/2MS+ IBA 0.2 mg/
L for rooting. The plantets are transplanted into nutrient matrix with 98% survival ratio.
Key words:Kalanchoe blossfeldiana; leaf stalk; tissue culture
——————————————————
收稿日期:2007-11-05
长寿花(Kalanchoe blossfeldiana CV. Tom Thumb)
属景天科伽蓝菜属多年生常绿多浆草本植物,别名矮
生伽蓝菜、寿星花等,原产非洲热带马达加斯加岛[1]。
长寿花植株小巧玲珑,株型紧凑,叶片翠绿,冬、春
两季开花,花色有深红、橙红、粉红、白色、黄色等,
花朵密集,适宜盆栽和花坛栽培,既可观叶又可观花,
是一种极具发展潜力的新品花卉[2]。
长寿花耐旱性强,容易栽培,一般为扦插繁殖,
但繁殖速度慢,不能满足市场需要。用组培方法离体
繁殖,受季节影响小,繁殖速度快,是一种重要育苗
手段。长寿花离体繁殖多用叶片及茎尖为外植体[3-6],
而利用叶柄再生则报道少。本研究以橙花长寿花叶柄
为试材,研究无菌体系的建立、增殖、生根及移栽技
术,以期为长寿花种苗工厂化生产奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料来源
供试材料为西南大学实验苗圃的盆栽长寿花。
1.2 材料处理
从取材茎段上摘下叶片,剪去叶片部分,留基部
2~3cm长叶柄,用自来水冲洗30min后置于超净工作
台上,用70%~75%的酒精灭菌30s,再用0.1%升汞
灭菌6min,经无菌水漂洗4~5遍后备用。
1.3 试验方法
1.3.1 不定芽诱导培养基的筛选
以MS为基本培养基,附加不同浓度的激素(表
1),蔗糖30.0g/L,卡拉胶5.8g/L,pH5.8左右,将已
消毒灭菌的叶柄切成1cm左右的小段,接种到诱导培
养基上,每瓶2段,每处理接种 2 0段,置于
(25±2)℃、光强1 500~2 000 lx下培养。接种50d
后观察不定芽发生情况。
1.3.2 继代增殖培养基的选择
切取初代培养的无菌苗接种到增殖培养基上,每
处理接种24苗,培养30d后,统计出芽的增殖倍数。
1.3.3 生根培养基的选择
将切下的长3~4cm的丛生芽,接种到不同的生
根培养基中,每瓶5苗,各接种4瓶,20d后统计生根
情况。
1.3.4 炼苗与移栽
待试管苗长到4~5cm高时,打开瓶口炼苗2~3d
后,取苗,用清水洗去根基部培养基,放入800倍多
DOI:10.16005/j.cnki.tast.2008.01.011
热带农业科技 2008,31(1)
Tropical Agricultural Science & Technology- 2 1 -
- 2 1 -
菌灵水溶液中浸泡20min左右,移栽于配制好的基质
中。移栽后保持较高空气湿度,遮荫5~7d。
2 结果与分析
2.1 不同激素培养基对长寿花叶柄初代培养的影
响
试验中看到(表1),在不同激素的培养基上,部
分叶柄既无愈伤也无不定芽产生,有的叶柄能直接分
化不定芽,有的仅产生愈伤组织,诱导率也各不相同。
在NAA0.5~2.0mg/L范围内,芽数随浓度的升高而增
加,出愈率也随之增加,培养基为MS+6-BA0.5mg/
L+NAA2.0mg/L时诱导的芽数达到最多(55%);当NAA
浓度达到3.0mg/L时,分化芽数反而减少,愈伤率也
降低;此外还可以看到,IBA的诱导效果明显不及同
浓度的NAA,表明适当浓度的NAA有利于不定芽的产
生。
2.2 不同激素组合对长寿花不定芽继代增殖培养
的影响
试验结果(表2)表明:在BA0.2mg/L+NAA0~
0.6mg/L范围内,芽的增殖系数在1.58~1.88,变化不
大;6-BA浓度提高到0.5mg/L后,在NAA0~ .4mg/L
时,随着NAA浓度增加,产生总芽数随之增加,最高
可到2.42倍;但在NAA提高到0.6mg/L时,增殖系数
反而下降。在BA浓度较高的6-BA1.0mg/L+NAA0~
0.6mg/L的培养基中,增殖系数均未超过1.8。在6-BA
和NAA浓度达1.0和0.6mg/L的情况下,芽苗均明显
玻璃化,影响了芽丛的增殖。本实验范围内,丛生芽
增殖的最适培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L。
2.3 生根培养基对长寿花再生苗生根的影响
试验结果(表3)表明:盐浓度减半的1/2MS+
IBA0.2mg/L培养基为最佳生根培养基,不仅生根率高
(达95%),而且根粗而长,条数较多,小苗枝叶生长
旺盛,有利移栽成活;在盐浓度较高的MS和MS+
IBA0.2mg/L培养基中,苗出根慢,根的生长较差,植
株有徒长现象。
3 小结与讨论
(1)试验结果表明:适于长寿花叶柄分化的培养
基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA2.0mg/L;最适增殖培养
表1 不同激素组合对橙花长寿花叶柄不定芽诱导的影响
激素组成(mg/L) 接种数(段) 出芽叶柄数(段) 芽分化率(%) 平均芽数(个/段) 出愈率(%)
6-BA 0.2 + NAA0.5 20 7 35 1.0 15
6-BA0.2 + NAA1.0 20 10 50 1.5 15
6-BA 0.5 + NAA2.0 20 11 55 2.1 25
6-BA 0.5 + NAA3.0 20 6 30 0.9 10
6-BA 0.2 + IBA0.5 20 6 30 1.9 5
6-BA 0.2 + IBA1.0 20 5 25 0.6 30
6-BA 0.5 + IBA2.0 20 2 10 0.5 20
6-BA 0.5 + IBA3.0 20 4 20 1.6 20
表2 激素组成与橙花长寿花不定芽增殖效果的关系
激素组成(mg/L)
6-BA + NAA
接种芽数
(个)
出芽数
(个)
增殖系数
(倍)
0.2 + 0 24 40 1.67
0.2 + 0.2 24 38 1.58
0.2 + 0.4 24 45 1.88
0.2 + 0.6 24 44 1.83
0.5 + 0 24 14 0.58
0.5 + 0.2 24 39 1.63
0.5 + 0.4 24 58 2.42
0.5 + 0.6 24 17 0.71
1.0 + 0 24 43 1.79
1.0 + 0.2 24 37 1.54
1.0 + 0.4 24 21 0.88
1.0 + 0.6 24 32 1.33
表3 培养基组成对橙花瓶苗生根效果的影响
培养基组成 接种数(苗) 生根 生根率(%) 平均根数 苗的状态
MS 17 85 8~9 根细,苗弱、徒长
MS+ IBA 0.2mg/L 20 19 95 6~8 根较细,苗长势较差
1/2MS 18 90 12~15 根较粗,苗生长较好
1/2MS+ IBA 0.2mg/L 19 95 14~17 根粗而长,枝叶健壮
热带农业科技 2008,31(1)
Tropical Agricultural Science & Technology - 2 2 -
- 2 2 -
基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.4mg/L;适于生根的培
养基为1/2MS+IBA0.2mg/L。移栽成活率达98%。
(2)在初代培养中,外植体的表现差异较大:有
些叶柄不能直接诱导不定芽,而是产生愈伤组织,甚
至有些只直接产生不定根,这除了受培养基组成影响
外,可能与外植体本身的生理状况也有关,具体原因
有待进一步探讨。
(3)在芽的诱导培养中,分化率最高仅55%,而
出愈率却高达30%,如何提高不定芽分化率、降低出
愈率需要继续研究。
参考文献:
[1] 华金渭,刘南详,吴华芬,等.长寿花栽培技术[J].中
国花卉园艺,2005,(6):29.
[2] 黄海帆,李保印,李平.影响长寿花离体培养及植株再生
的几个因素[J].中国农学通报,2004,20(2):12-14.
[3] 张瑞姿,郭晓霄.长寿花叶片再生体系的研究[J].山西
林业科技,2005,(1):8-9.
[4] 陈玉梁,支小刚,张艳萍,等.长寿花叶盘离体培养及植
株高效再生研究[J].中国农学通报,2004,20(10):
33-35.
[5] 冯林剑,贾东坡,张信栓.不同培养条件下长寿花叶片再
生体系的构建[J].中国农学通报,2006,22(5):79-
81.
[6] 孙新政,李庆伟,梁明勤.白花长寿花组培快繁技术研究
[J].中国农学通报,2006,22(2):39-42.
(上接第9页)
5级:叶片严重皱缩或落叶1/2以上。
发病指数={∑(发病级别×各级株数)/(最高分
级级别×调查总数)}×100
防治效果(%)={(空白区最终病情指数-处理
区最终病情指数)/空白区最终病情指数}×100
2 结果与分析
各处理最终病情差异显著性测定结果(表1)表
明,常规硫磺粉防治的防效极显著地优于氟硅唑·咪
鲜胺热雾剂的3个处理(P=0.01);热雾剂处理依参试
胶树受药雾量和均匀度的降低(每带、隔带、隔二带
施烟雾)而效果逐渐下降,其中每带施烟雾处理的效
果最好,防效达80%以上,显著优于隔带处理(P=
0.05)和极显著优于隔二带处理(P=0.01),隔带处理
亦极显著优于隔二带处理。
表1 最终病情指数统计分析
处理 重复Ⅰ 重复Ⅱ 重复Ⅲ 平均 防效(%)
每带施放烟雾 7.9 8.5 9.7 8.7 80.2dC
隔带施放烟雾 17.6 11.5 13.9 14.3 67.4cC
隔二带施放烟雾 24.2 32.1 21.2 5.8 41.2bB
喷施硫磺粉 1.2 0.6 0.6 0.8 98.2eD
CK 38.8 45.5 47.3 43.9
3 讨论
常规硫磺粉防治技术受天气的影响大,喷施硫磺
粉后持续2~5d出现最高温度>25℃的多云间晴天
气,才可获得良好的防治效果[2]。本试验2007年3月
11日喷药后的1周,日平均温度22.8℃,日最高温度
>25℃的天气有5d,平均日照时数为4h,日平均云
量为7,天气状况以多云间晴为主,有利于硫磺粉的
药效发挥,防效达98.2%。然而,在河口垦区,在橡
胶树白粉病流行期间这样有利于防治的天气过程并不
多见,大多是以阴天或阴雨天气为主。因此,在不利
于喷施硫磺粉的天气条件下应用20%氟硅唑·咪鲜胺
热雾剂防治亦可以达到较好的防治效果。本项试验结
果可以看出,在只施一次药的情况下,20%氟硅唑·
咪鲜胺热雾剂每带施烟雾处理的防效能达80.2%,可
在生产上进一步试验和应用。同时在病情较重时可加
大烟雾剂剂量。从试验结果来看,20%氟硅唑·咪鲜
胺热雾剂应用前景良好,是可以取代15%粉锈宁烟雾
剂的一种新的热雾剂类型,其生产性应用的技术、规
范和经济上的容许性等,还有待进一步的研究。
参考文献:
[1] 张丽萍,白建相,邵志忠,等.河口地区橡胶白粉病防治
失败原因的研究[J].云南热作科技,2002,(4):1-7.
[2] 谭伏美,王树明.云南河口地区应用硫磺粉防治橡胶白粉
病技术总结[J].热带农业科学,2003,(3):8-13.