全 文 ：实验方法采用改进的 Hecht法[ 18] 。 ①样品溶解在 50%
MeOH-H2O 或 MeOH-DMSO 溶液中 , 然后将之加入反应混
合物进行反应。反应混合物包括 10 mmo l·L-1 Tris HCl(pH
8.0)21.5μL , 1 000 μmol·L-1 Cu2+ 2μL , 250μg·mL-1 PSP
64 DNA 2μL , 样品 1μL。反应混合物中样品浓度为 100μg·
m L-1。 ②37℃温育 60 min。 ③加入 0.125% 5μL 的溴酚蓝
终止反应。 ④电泳:0.1%的琼脂糖凝胶 , 1×T ris 缓冲液中
电泳 3 h。 ⑤EB 荧光显色后拍照 , 计算与对照组的比率。
化合物 1 , 4 , 7显示出极强的 DNA 裂解活性 ,见表 1。
表 1　DNA 裂解活性测定
Tab 1　DNA cleavage activity evaluation
样品 浓度1)/μg·mL-1 活性 样品 浓度1)/μg·mL-1 活性
1 100 2) 7 100
4 100 2) 8 100 -
5 100 - 9 100 -
6 100 - 10 100 -
注:1)Cu2+离子浓度 20μmol·L-1 , 2)表示出两种裂解方式 , 3) :很强; :强;
+:有活性;-:无活性
N ote:1)Sample concentration is 100 μg·mL-1 , with the existence of 20 μmoL·
L-1 Cu2+.2):showed two cleaved DNA fo rms.3) :ve ry strong; :strong;+:
ac tive;-:inactive
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(收稿日期:2001-12-11)
用细胞膜色谱法筛选研究红毛七中的有效成分
高琨 ,贺浪冲＊ ,杨广德 (西安交通大学药学院 ,陕西 西安 710061)
摘要:目的　筛选天然植物红毛七中对主动脉血管有舒张作用的有效成分。 方法　采用兔血管细胞膜色谱(cell membrane
chromatography , CMC)模型筛选 , 液-固柱层色谱法分离 ,并结合离体药理实验确定红毛七中的有效成分。结果　红毛七正丁
醇部位(HMQ-4)是红毛七中对血管有舒张作用的有效部位 ,而由红毛七正丁醇部位中分离得到的成分(HMQ-44)则是其有效
成分。结论　血管 CMC 模型基本可以反映活性成分与细胞膜及膜受体的相互作用 , 而且活性成分在 CMC 体系中的保留特
性与其离体药理作用有显著的相关性。
关键词:细胞膜色谱;有效成分;筛选;红毛七
中图分类号:R931.6 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2003)01-0014-03
作者简介:高琨 ,男 ,博士研究生　　＊通讯作者:贺浪冲 ,男 ,教授 ,博士导师 Tel:(029)5275451 , Fax:(029)5275451 E-mail:helc@xjtu.
edu.cn
Screening the effective component of Leontice robustum by cell membrane chromatography
·14· Chin Pharm J , 2003 January , Vol.38 No.1 　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2003年 1月第 38卷第 1期
GAO Kun ,HE Lang-chong＊ , YANG Guang-de(Collegeof Pharmacy , X i an J iaotong University , X i an 710061 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To screen the effective component of Leontice robustum with vasodilatation.METHODS　The effective
component of Leontice robustum was screened by cell membrane chroma tog raphy(CMC)and separated by liquid-solid column chro-
matography.I ts pharmacological effect was testified by the trial in v itro.RESULTS　I t w as found that the n-butanol ex tracting site
of Leontice robustum(HMQ-4)was a effective part and the component(HMQ-44)separated from the part w as a active one in vasodi-
la tation.CONCLUSIONS　The interaction between the effective component and the membrane or membrane receptor was reflected in
the vascular CMC model.The retention characteristics(capacity facto r)of component on the model system w as found to have a good
correlation with its pharmacological activity in v itro.
KEY　WORDS:cell membrane chromatography;effectiv e component;screening;Leontice robustum
　　传统的天然药物化学筛选有效成分的方法是先提取分
离 ,再逐一进行药效试验以确定有效成分 , 研究周期一般较
长 ,命中率相对较低 。而细胞膜色谱法(cell membrane chro-
matography , CMC)[ 1 ～ 2]是一种新的生物亲和色谱方法 , 被分
析成分如果与特定的细胞膜受体有特异性结合[ 3] , 则可在
CMC 模型中反映出来 , 而且被分析样品可不经提取分离步
骤 ,直接在特定的 CMC 模型上完成筛选过程。将 CMC 模型
与药效试验相结合的活性成分筛选技术已用于天然植物和
中药物质基础的研究之中[ 4 ～ 5] 。本实验报道用血管 CMC 模
型筛选秦巴山区特有植物红毛七(Leontice robustum)中对主
动脉血管有舒张作用的有效成分。
1　实验材料
1.1　仪器与试药
GILSON 高效液相色谱系统 , 配有 115 型紫外检测器 ,
470 型色谱泵 , 7725i型进样器和 ANASTAR 色谱工作站(法
国);Hermel ZK 401 型低温冷冻高速离心机(德国);CS-20
型超声波清洗器(日本)。
磷酸二氢钠 、氯化钠 、氯化钾 、盐酸 、磷酸等均为分析纯
(西安化学试剂厂)。三重蒸馏水 , 本实验室自制。柱色谱硅
胶和薄层色谱硅胶(中国青岛海洋化工集团)。
红毛七为小檗科牡丹草属植物类叶牡丹的根茎及根 , 采
自秦巴山区太白县太白山 ,非药典收录。经西安交通大学药
学院生药教研室吕居娴教授鉴定。
盐酸维拉帕米片(verapamil , VP ,天津市中央制药厂), 重
酒石酸去甲肾上腺素注射液(武汉制药厂)。
1.2　实验动物
健康家兔 ,雌雄不限(西安交通大学实验动物中心)。
2　实验方法与结果
2.1　血管 CMC 模型的建立
血管细胞膜固定相(CMSP)的制备参见文献[ 6] 的方法。
色谱柱:50 mm ×2 mm , 填充血管 CMSP;流动相:50
mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 7.4);流速:0.5 mL·min-1检测
波长:256 nm;柱温:37℃ 。平衡 3 ～ 4 h 后 ,进样分析。
2.2　红毛七有效部位的筛选
2.2.1　供试品溶液的制备　将红毛七植物晒干碾碎 , 取 5.0
kg ,用 50%乙醇回流提取 3 次 , 每次 2 h , 合并滤液。回收乙
醇。依次用不同极性的溶剂石油醚 、乙醚 、醋酸乙酯 、正丁醇
萃取 ,得不同极性溶剂萃取液。分别取适量不同萃取液 , 挥
干溶剂 ,用适量吡啶溶解 , 得 4 种不同萃取物的供试品溶液 ,
分别用 HM Q-1 ,HMQ-2 ,HMQ-3 ,HMQ-4 表示。
2.2.2　血管 CMC 模型的筛选　分别吸取不同萃取物的供
试品液(HMQ-1 , HMQ-2 , HMQ-3 , HMQ-4)5 μL , 注入血管
CMC 系统分析。 以 VP 为对照 , 结果发现正丁醇萃取物
(HMQ-4)中有成分类似于 VP 在血管 CMSP 柱上保留(图
1),表明正丁醇萃取物(HMQ-4)中可能含有与血管细胞膜及
膜受体作用的有效成分。
图 1　维拉帕米(A)和 HMQ-4(B)在血管 CMSP 柱上的色谱
图
1-维拉帕米;2 ,3-HMQ-4 中的组分
Fig 1　Chromatograms of verapamil(A)and HMQ-4(B)on the
rabbit vascular CMC column
1-verapamil;2 ,3-retention components in HMQ-4
2.2.3　离体药理实验　以模型药物维拉帕米为对照 , 对红
毛七的正丁醇萃取部位 HMQ-4 进行离体药效试验 , 结果表
明 HMQ-4 对去甲肾上腺素所诱发的血管收缩有显著的抑制
作用。
2.2.4　初步结论　红毛七的正丁醇萃取物(HMQ-4)是红毛
七中对血管有舒张作用的有效部位。
2.3　红毛七有效成分的确定
2.3.1　正丁醇萃取部位(HMQ-4)的柱层析法分离　以硅胶
为填料 ,湿法装柱并用洗脱液平衡后 , 将 HMQ-4 上柱分离。
采用醋酸乙酯-甲醇梯度下行洗脱 , 根据薄层色谱检验结果
收集洗脱液 ,回收溶剂 , 得不同的分离样品 5 份。分别取各
样品适量挥干溶剂 , 用适量吡啶溶解 , 得各分离组分的供试
品溶液 ,分别用 HMQ-41 ～ HMQ-45 表示。
2.3.2　血管 CMC 模型的筛选　分别吸取各组分供试品溶
液(HMQ-41 ,HMQ-42 ,HMQ-43 , HMQ-44 ,HMQ-45)5μL , 注
·15·中国药学杂志 2003年 1月第 38卷第 1期　　　　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2003 January , Vol.38 No.1
入血管 CMC 系统分析。以红毛七的 HMQ-4 为对照 , 结果发
现其中有 2 个分离组分(编号为 HMQ-44 和 HMQ-42)在血
管 CMSP柱上有保留(图 2), 表明 HMQ-44 和 HMQ-42 为红
毛七 HMQ-4 中对血管细胞膜及膜受体有作用的活性成分。
对其进一步纯化和结构分析的工作仍在进行之中。
图 2　HMQ-4(A)、HMQ-44(B)和 HM Q-42(C)在血管 CMSP
柱上的色谱图
Fig 2　Chromato grams of HMQ-4(A),HMQ-44(B)and HMQ-
42(C)on the rabbit vascular CMC column
2.3.3　HMQ-44 和 HMQ-42 的药效试验　以模型药物 VP
为对照 , 对 HMQ-44 和 HMQ-42 进行了离体动脉条药效试
验。结果发现:组分 HMQ-44 对去甲肾上腺素所诱发的血管
收缩有类似竞争性拮抗剂的作用 ,可使去甲肾上腺素引起的
动脉条收缩受到抑制 , 从而具有舒张血管的作用 , 并存在量
效关系(图 3)。而组分 HMQ-42 对去甲肾上腺素所诱发的
血管收缩有较弱的促进作用。
3　讨　论
本实验利用血管 CMC 模型 ,对红毛七进行了较为系统
的分离 、筛选和验证 , 结果被分离组分在模型上的保留特性
与其离体药理作用有显著的相关性。同时 , 进一步确定
HMQ-4 是红毛七中对血管有舒张作用的有效部位 , 而
HMQ-44 则是其主要有效成分。这些结果为研究红毛七的
药用价值 、质量控制和体内分析奠定了基础。
图 3　维拉帕米和 HMQ-44 对去甲肾上腺素量-效关系的影
响
1-去甲肾上腺素;2-维拉帕米(40 mg·L-1);3-维拉帕米(160 mg·L-1);4
-HM Q-44(2 mg·L-1);5-HMQ-44(20 mg·L-1)
Fig 3 　Influence of verapamil and HMQ-44 on the E ～ logC
curve o f norepinephrine
1-no repinephrine;2-verapamil(40 mg·L-1);3-ve rapamil(160 mg·L-1);4
-HM Q-44(2 mg·L-1);5-HMQ-44(20 mg·L-1)
陕西秦巴山区天然药用植物资源丰富 ,有许多特有的药
用品种值得深入研究和开发。因此 , CMC 模型的应用对加
快发现药用植物中的有效成分具有实际意义。本实验和前
文[ 4 ～ 5]的研究结果表明 , 由 CMC 法结合制备色谱技术以及
药效实验方法形成的有效成分快速筛选系统 , 对筛选有明确
作用靶体的活性成分特别实用。
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(收稿日期:2001-10-09)
乌梢蛇与其混淆品白条锦蛇的鉴别
李钦 ,张保国 (河南大学药学院 ,河南 开封 475001)
摘要:目的　比较鉴别乌梢蛇与白条锦蛇。方法　对乌梢蛇与其混淆品白条锦蛇的生药性状 、薄层色谱 、纸色谱 、紫外吸收光
谱进行了鉴别研究。结果　乌梢蛇与白条锦蛇的生药性状 、薄层色谱有明显差异 , 纸色谱 、紫外吸收光谱差异不大。结论　
白条锦蛇不能混充乌梢蛇入药 ,应予以鉴别。
关键词:乌梢蛇;白条锦蛇;鉴别
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-2494(2003)01-0016-04
Identification of Zaoys dhumnades and its adulterant Eiaphe dione
LI Qin ,ZHANG Bao-guo(Pharmacy School , Henan University , Kai feng 475001 , China)
·16· Chin Pharm J , 2003 January , Vol.38 No.1 　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2003年 1月第 38卷第 1期