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金钮扣提取物的抗炎作用及有效部位探讨



全 文 :金钮扣提取物的抗炎作用及有效部位探讨
黄庆芳1,冯承恩1,房志坚1* ,梅全喜2
(1. 广东药学院中山校区,广东 中山 528458;2. 广州中医药大学附属中山中医院,广东 中山 528400)
摘要 目的:研究金钮扣水、醇提物的抗炎作用。根据试验结果进一步分离,寻找其中的有效部位。方法:提
取金钮扣水、醇提物,将醇提物按极性大小依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。用足趾肿胀法观察抗急性
炎症作用,用棉球肉芽法观察抗慢性炎症作用。结果:金钮扣醇提物抗急性炎症和慢性炎症效果较好,优于金钮扣
水提物;金钮扣醇提物的萃取物对急性炎症均有显著抑制作用,氯仿组和水层组能较好的抑制慢性炎症组织细胞
增生和组织液渗出。
关键词 金钮扣;水茄;抗炎;有效成分
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)03-0462-03
收稿日期:2011-07-13
基金项目:中山市华南现代中药城(健康医药产业基地)专项发展基金(2007J007)
* 通讯作者:房志坚,E-mail:jian139@ tom. com。
金钮扣又名水茄、山颠茄、刺茄、鸭卡、金钮头、
金衫扣〔1〕。来源于茄科茄属植物水茄(Solanum tor-
vum Swartz)的干燥根及茎,该药味辛,性微凉,有小
毒,能散瘀、通经、消肿、止痛、止咳。根据其消肿功
效探讨金钮扣的抗炎作用,根据试验结果进一步分
离,寻找其中的有效部位。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 昆明小鼠及 SD大鼠,购自广东省
实验动物中心,许可证号:SCXK(粤)2006-0015。由
广州中医药大学中山附属医院动物实验室饲养,室
温控制在(20 ± 2)℃,湿度控制在 60%。
1. 2 药物与试剂 金钮扣由广东益和堂制药有限
公司提供,经广东药学院中山校区实验中心田素英
副教授鉴别为茄科茄属植物水茄(Solanum torvum
Swartz)的干燥根及茎,药材打成粉,过标准检验二
号筛得到粗粉;取金钮扣按常规水提法提取(提取
率 6. 13%) ;另取金钮扣按常规醇提法提取(提取率
5. 99%) ;将醇提取物流浸膏用石油醚、氯仿、乙酸
乙酯、正丁醇依次按极性大小萃取,得到石油醚萃取
物(提取率 0. 52%)、氯仿萃取物(提取率 0. 78%)、
乙酸乙酯萃取物(提取率 0. 28%)、正丁醇萃取物
(提取率 0. 72%)、水层(提取率 0. 94%) ;吲哚美辛
(临汾奇林药业有限公司,批号:070611) ;阿司匹林
肠溶片(Bayer Vital GmbH,批号:BTATRC12008-
06)。
1. 3 主要仪器 JA2003 型电子天平(上海恒平科
学仪器有限公司)。
2 方法〔2〕
2. 1 金钮扣水、醇提物的抗急性炎症作用(足趾肿
胀法) 取 18 ~ 22 g 小鼠 80 只,雌雄各半,随机分
为 8 组,分别为空白对照组,吲哚美辛组(0. 015 g /
kg) ,金钮扣醇提物高(生药 17. 12 g /kg)、中(生药
8. 56 g /kg)、低(生药 4. 28 g /kg)剂量组,金钮扣水
提物高(生药 17. 12 g /kg)、中(生药 8. 56 g /kg)、低
(生药 4. 28 g /kg)剂量组。除阳性组仅于第 5、6、7
天给药,其他组给药 1 次 /d,给药容积 20 mL /kg,连
续给药 7 d,末次给药后 1 h 测小鼠右侧足趾容积,
然后右侧足趾皮下注射 10%鸡蛋清 0. 01 mL /只,测
注射蛋清后 0. 5、1、2、4、6 h 小鼠右足趾容积,并计
算足趾肿胀百分率。
2. 2 金钮扣水、醇提物的抗慢性炎症作用(棉球肉
芽法) 取 20 ~ 25 g 雄性小鼠 80 只,随机分为 8
组,除阳性组为阿司匹林(0. 2 g /kg)外,其余各组同
“2. 1”项,每组 10 只。各组腹腔注射戊巴比妥钠 30
mg /kg麻醉,无菌状态下在小鼠的腋窝部皮下切开
一小口,将高压灭菌棉球(20 mg /个,经青链霉素浸
泡)植入腋窝皮下,随即缝合皮肤,常规消毒。灌胃
给药,给药容积 20 mL /kg,连续给药 7 d,末次给药
后 1 h脱颈椎处死小鼠,然后将棉球连同周围组织
一起取出,剔除脂肪于电子天平称量质量,减去棉球
重得到湿质量;再放入55 ℃烘箱中烘至恒重并称量
质量,减去棉球质量得到干质量,最后计算湿棉球体
质量系数和干棉球体质量系数。为了进一步探索金
钮扣抗炎的有效部位,接下来对抗炎效果较好的金
钮扣醇提物用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇有机
溶剂萃取后进行抗炎试验,以便验证是何种成分起
到了解热镇痛的作用。
2. 3 金钮扣醇提物不同萃取物的抗急性炎症作用
(足趾肿胀法) 取 18 ~ 22 g小鼠 80 只,雌雄各半,
随机分为 8 组,分别为空白对照组、吲哚美辛组
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(0. 015 g /kg)及金钮扣醇提物高剂量组(生药
17. 12 g /kg)、石油醚萃取组(生药 17. 12 g /kg)、氯
仿萃取组(生药 17. 12 g /kg)、乙酸乙酯萃取组(生
药 17. 12 g /kg)和正丁醇萃取组(生药 17. 12 g /kg)。
给药和数据采集、处理方法同“2. 1”项。
2. 4 金钮扣醇提物不同萃取物的抗慢性炎症作用
(棉球肉芽法) 取 20 ~ 25 g 雄性小鼠 80 只,随机
分为 8 组,除阳性组为阿司匹林(0. 2 g /kg)外,其余
各组同“2. 3”项,给药和数据采集、处理方法同
“2. 2”项。
2. 5 统计学处理 组间比较采用方差分析和 t 检
验,利用统计学分析软件 SPSS 17. 0作统计分析处理。
3 结果
3. 1 金钮扣水、醇提物的抗急性炎症作用(足趾肿
胀法) 从表 1 可以看出,与同时间点空白对照组
比较,金钮扣醇提高剂量组抗急性炎症效果最好,各
时间点 P < 0. 001;其次为醇提中剂量组及水提低剂
量组,在 1 h 时 P < 0. 05,其他时间点 P < 0. 001;接
下来是水提低剂量组,在 0. 5、4、6 h P < 0. 001,1、
2 h P < 0. 05 或 P < 0. 01;水提高剂量组在 4、6 h
P < 0. 001,0. 5、1、2 h P < 0. 05;醇提低剂量组在 4、
6 h P < 0. 001,0. 5、2 h P < 0. 05 或 P < 0. 01。
表 1 金钮扣水、醇提物的抗急性炎症作用(足趾肿胀法)(珔x ± s,n =10)
组别 剂量(g /kg)
足趾肿胀率 /%
0. 5 h 1 h 2 h 4 h 6 h
空白对照组 - 55. 19 ± 10. 77 29. 88 ± 17. 16 33. 54 ± 18. 56 48. 24 ± 19. 52 40. 50 ± 12. 15
吲哚美辛组 0. 015 28. 21 ± 9. 92*** 11. 12 ± 8. 53* 17. 74 ± 7. 54*** 12. 76 ± 11. 25*** 12. 85 ± 4. 91***
醇提高剂量组 17. 12 10. 65 ± 7. 37*** 12. 40 ± 7. 58*** 10. 42 ± 2. 53*** 7. 54 ± 8. 39*** 18. 34 ± 8. 83***
醇提中剂量组 8. 56 10. 77 ± 3. 82*** 17. 16 ± 11. 34* 0. 00 ± 0. 00*** 0. 00 ± 0. 00*** 1. 41 ± 0. 54***
醇提低剂量组 4. 28 36. 43 ± 15. 89* 27. 68 ± 9. 29 16. 34 ± 9. 44** 10. 35 ± 8. 74*** 13. 87 ± 5. 24***
水提高剂量组 17. 12 30. 83 ± 3. 71* 15. 88 ± 10. 19* 15. 02 ± 13. 69* 16. 19 ± 13. 69*** 12. 91 ± 5. 05***
水提中剂量组 8. 56 13. 57 ± 8. 92*** 16. 10 ± 8. 94* 13. 30 ± 8. 03** 15. 51 ± 6. 47*** 16. 27 ± 4. 46***
水提低剂量组 4. 28 27. 87 ± 12. 32*** 16. 00 ± 8. 94* 9. 57 ± 6. 70*** 8. 24 ± 5. 54*** 12. 28 ± 7. 79***
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01,***P < 0. 001
3. 2 金钮扣水、醇提物的抗慢性炎症作用(棉球肉
芽法) 从表 2 可以看出,与空白对照组比较,醇提
高剂量组和水提低剂量组的湿棉球体质量系数 P <
0. 01;醇提中、低剂量组的湿棉球体质量系数和醇提
高、中剂量组的干棉球体质量系数 P < 0. 05。
表 2 金钮扣水、醇提物的抗慢性炎症作用
(棉球肉芽肿胀法)(珔x ± s,n =10)
组别 剂量
/
(g /kg)
湿棉球体
质量系数 /%
干棉球体
质量系数 /%
空白对照组 - 0. 69 ± 0. 12 0. 073 ± 0. 028
阿司匹林组 0. 20 0. 54 ± 0. 12* 0. 048 ± 0. 017*
醇提高剂量组 17. 12 0. 56 ± 0. 06** 0. 054 ± 0. 059*
醇提中剂量组 8. 56 0. 56 ± 0. 13* 0. 051 ± 0. 013*
醇提低剂量组 4. 28 0. 53 ± 0. 19* 0. 067 ± 0. 016
水提高剂量组 17. 12 0. 64 ± 0. 14 0. 066 ± 0. 027
水提中剂量组 8. 56 0. 55 ± 0. 05** 0. 059 ± 0. 021
水提低剂量组 4. 28 0. 64 ± 0. 12 0. 068 ± 0. 021
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01,***P < 0. 001
3. 3 金钮扣醇提物不同萃取物的抗急性炎症作用
(足趾肿胀法) 从表 3 可以看出,与同时间点空白
对照组相比,各组均能不同程度降低小鼠足趾肿胀
率,除 0. 5 h乙酸乙酯组、水层组和 4 h乙酸乙酯组、
正丁醇组 P < 0. 01 外,其余时间点 P均 < 0. 001。
3. 4 金钮扣醇提物不同萃取物的抗慢性炎症作用
(棉球肉芽法) 从表 4 可以看出,与空白对照组比
较,氯仿组和水层组的湿棉球体质量系数 P < 0. 01,
其余各给药组 P 均 < 0. 05;醇提高剂量组、氯仿组
和水层组的干棉球体质量系数 P < 0. 05。
4 讨论
炎症是在致炎因素作用下由各种炎症细胞及其
释放的炎症介质和细胞因子共同参与,引起毛细血
管扩张、通透性增加,中性粒细胞趋化、游走至炎症
反应灶并释放炎症介质和细胞因子以及后期的细胞
外基质的改变〔3〕。以蛋清诱导鼠足肿胀模型是一
种免疫性急性炎症模型,为筛选抗炎药物的模型;棉
球肉芽法是筛选抑制炎症增殖期药物的模型〔4〕。
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表 3 金钮扣醇提物不同萃取物的抗急性炎症作用(足趾肿胀法)(珔x ± s,n =10)
组别 剂量 /(g /kg)
足趾肿胀率 /%
0. 5 h 1 h 2 h 4 h 6 h
生理盐水组 - 0. 98 ± 0. 36 1. 24 ± 0. 40 0. 91 ± 0. 29 0. 58 ± 0. 22 0. 64 ± 0. 27
吲哚美辛组 0. 015 0. 48 ± 0. 13** 0. 39 ± 0. 08*** 0. 35 ± 0. 03*** 0. 18 ± 0. 05*** 0. 12 ± 0. 06***
醇高组 17. 12 0. 25 ± 0. 03*** 0. 23 ± 0. 07*** 0. 24 ± 0. 07*** 0. 11 ± 0. 05*** 0. 14 ± 0. 05***
石油醚组 17. 12 0. 12 ± 0. 04*** 0. 12 ± 0. 01*** 0. 10 ± 0. 02*** 0. 14 ± 0. 06*** 0. 00 ± 0. 00***
氯仿组 17. 12 0. 18 ± 0. 06*** 0. 36 ± 0. 02*** 0. 12 ± 0. 08*** 0. 16 ± 0. 05*** 0. 13 ± 0. 05***
乙酸乙酯组 17. 12 0. 46 ± 0. 03** 0. 30 ± 0. 07*** 0. 46 ± 0. 01*** 0. 25 ± 0. 09** 0. 17 ± 0. 02***
正丁醇组 17. 12 0. 44 ± 0. 01*** 0. 29 ± 0. 11*** 0. 23 ± 0. 09*** 0. 24 ± 0. 02** 0. 14 ± 0. 05***
水层组 17. 12 0. 43 ± 0. 20** 0. 54 ± 0. 08*** 0. 21 ± 0. 02*** 0. 21 ± 0. 05*** 0. 17 ± 0. 08***
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01,***P < 0. 001
表 4 金钮扣醇提物不同萃取物的抗慢性炎症
作用(棉球肉芽法)(珔x ± s,n =10)
组别 剂量
/
(g /kg)
湿棉球体
质量系数 /%
干棉球体
质量系数 /%
生理盐水组 - 0. 43 ± 0. 069 0. 043 ± 0. 014
阿司匹林组 0. 15 0. 32 ± 0. 053*** 0. 029 ± 0. 006*
醇高组 17. 12 0. 35 ± 0. 057* 0. 032 ± 0. 011*
石油醚组 17. 12 0. 35 ± 0. 052* 0. 031 ± 0. 007
氯仿组 17. 12 0. 33 ± 0. 061** 0. 028 ± 0. 009*
乙酸乙酯组 17. 12 0. 38 ± 0. 028* 0. 039 ± 0. 008
正丁醇组 17. 12 0. 36 ± 0. 058* 0. 037 ± 0. 013
水层组 17. 12 0. 37 ± 0. 049** 0. 037 ± 0. 009*
注:与空白对照组比较,* P < 0. 05,**P < 0. 01,***P < 0. 001
从结果可以看出,金钮扣醇提物组对抗蛋清引
起急性炎症的组织液渗出效果较好,且效果和剂量
呈现正相关,而水提组效果较差;醇提物的各种萃取
物的抗急性炎症效果均较好,在各时间点均有较好
的抑制炎症组织液渗出的作用。对于植入棉球造成
的炎症组织细胞增生和组织液渗出,金钮扣醇提物
各组抗炎效果略强于金钮扣水提物各组,在醇提物
的各种萃取物中氯仿组和水层组能较好的抑制炎症
组织细胞增生和组织液渗出。
笔者的前期研究从金钮扣中分离出生物碱、挥
发油、黄酮类及三萜类等〔5〕。另有研究从金钮扣地
上全草的 95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离出
11 种成分,包括酰胺类、甾体皂苷类、黄酮类、有机
酸类成分〔6〕。最近,陆园园等〔7〕在金钮扣中发现甾
体、生物碱、皂苷、芦丁、山柰酚和槲皮素等。金钮扣
的抗炎作用可能与其中的一些成分具有一定相关
性,由于金钮扣成分很复杂,还有待进一步研究以定
位其抗炎成分。
参 考 文 献
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30-32.
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