全 文 ：第 6卷 第 5期 现 代 应 用 药 学 19 9 8年 1 0月
· 实验研究 ·
高效液相色谱法分离测定辽吉侧金盏花中强心试
哈尔滨医科大学 谷学林 冯速翔
白求恩医科大学 马冰谧。 石 钱
提 要 作者使 用甲醇 “ 水作为流动相 , 在 O sD 尽相柱上分离侧定了江吉侧金盏花 中强心贰。 实验结果表
明江吉侧金盏花中含有生物学活性极强的 K 一毒毛旋花子贰和 K 一毒毛旋花子次 贰一 p及 索 马 林 , 其 含盈分 别 为
`
0
.
1 3土 0 . 0 1% , 0
.
0 7 1士 0 . 0 0 5% , 0 . 0 2 4 士 0 . 00 5% 。
关键词 辽吉侧金盏花 强心贰 反相高效液相色谱法
辽吉侧 金盏花 ( A d o in s P s e ud oa 仇ur -
e sn i s w
。
T
。
W a n g ) 为 毛 蓑科 ( R a n un
c ul ac ea e) 侧金盏花属 A d o in s L . 植物 工` l , 其
同属植物均富含强心俄 12 1。 辽吉侧金盏花系
我国新发现并命名的品种 , 工9 8 5年报道 [3 ]了
从其根部提得了一单体强心试一索马林 , 但
对辽吉侧金盏花中的其它强心成分 目前还不
清楚。
药理研究表明 , 辽吉侧金盏花的强心贰
粗提物具有增强心肌收缩作用 , 其安全范围
和治疗指数大于侧金盏花中强心贰 [` J。 众所
周知 , 侧金盏花曾被认为是有价值的洋地黄
代用品 [.川 。 因此 , 在广泛寻找比洋地 黄类
治疗指数大 、 正性肌力作用更强的强心药的
今天 , 深入探索辽吉侧金盏花中所含的强心
俄是极其必要的 。
作者采用反相高效液相色谱方法分离测
定了辽吉侧金盏花根部所含的强心贰 。
材料和方法
一 、 试荆与仪器
(一 ) 试剂 甲醇 ; 分析纯 ,新鲜重蒸馏
水 ; 索马林 : 由作者分离所得, 经色谱检查
和响应值测定已达到色谱级 要 求 [吕 ], K 二毒
毛旋花子贰和 K 一毒毛 旋 花子次贰币 : 美国
IS G M A 化学公司 , 为色谱级试荆 。
(二 ) 仪器 L C 一4 A高效液相色谱仪 : 日
本岛津产 , S P D一 ZA S可 变 波长分光光度检
测器 ; O D S反 相 色谱 柱 ( 15 0 x 6 . o m m -
5卜m ) 日 本 岛津产 , C R一 3 A 微 处 理 机 ,
S a r t o r i u s电子分析天平 (准确到 0 . 0 0 1 m g ) 。
二 、 方法与过程
(一 ) 辽吉侧金盏花根部总 强心贰 的提
取
辽吉侧金盏花采自吉林省辉南县石道河
镇零点桥 。 采集时间为 1 9 8 8年 4 月 24 日。 采
集后 , 将其根部洗净放在 50 ℃烘 箱 中烘 干
后 , 粉碎 ( 2 0~ 4 0目 ) 。 取此粉末 2 5 。 0 0 9 , 用
l o 0
.
o m 1 9 5% 乙醇室温浸泡 2 4小时 , 过滤 ,
收集浸液。 如此反复数次 , 直 至 3 . 5一 二 硝
基苯甲酸试验阴性 。 于 45 ℃下减压浓缩浸液
至 5 m l , 加入 5 m l蒸 馏水 , 放入冰箱中冷
冻去胶 。 24 小时后 , 过滤浓缩液 , 滤液用 20
m l 氯仿及 2 0 m l 氯仿一乙醇 ( 1 : 1 )反复交替
萃取 , 直至水层对 3 . 5一二硝基苯甲酸试验显
阴性为止 。 合并萃取液 , 在 45 ℃下 减 压 蒸
馏 , 除去溶剂 , 得含强心贰的金 黄 色 粉末
0
。
6 2 5 4 9
, 收率为 2 . 5 0% 。
(二 ) 回收率
取辽吉侧金盏花根粉 25 . 0 9 三份 , 分别
加入 5 m g 加拿大麻试 。 处 理方法与 (一 )项
相同 。实验结果 , 平均回收率为 97 . 5土 .1 4% 。
(三 ) 标准溶液和样品溶液的配制
称取索马林 O . 72 O m g 、 K一毒 毛 旋 花
子试 1 . 2 0 m g 、 K一毒毛旋花子 次俄 一 p
i
。
10 0 m g 及 内标物加拿大麻贰 o . 9 4 0 m g ,
用 10 . o m l 流动相溶解在 I Om l 容量瓶中 , 配
制成标准溶液 ; 称取 38 . 8 m g 总强心俄提取
物两份 , 一份直接用流动相溶解在 10 m l 量
瓶中 , 配制成未加内标物的样品溶液 ; 另一
份加入 O . 90 O m g 内标物后用 10 . 0 m l流动相
溶解在 10 m l 量瓶中 , 配制成加内标物的样
品溶液 。
(四 ) 色谱过程
使用微量注射器进样 , 每种溶液进样量
均为 10 。 0时。 检测强心试在 2 18 n m 处 的紫
外吸收 , 此波长为强心 试 的 △a , 日一卜 内’ 醋
环的最大吸收波长 。 使用 C R一 3A 微处理机
进行定性定量 。 定性采用相对保 留 时 间 方
法 , 定量采用内标方法 , 使用峰面积参数 。
实验结果
一 、 色讼峰的分离与定性
由于温度对强心贰在 O D S 柱上 的分离
影响较小 〔7 1, 故分离测定工作均在略高于室
温 (3 1℃ )条件下进行。 使用甲醇和水作为溶
剂系统 。 适当选择甲醇与水的配比及流动相
流速 ,可以获得比较满意的色谱分离 。图 1 为
辽吉侧金盏花中所含的几种强心试标准品和
内标物 (加拿大麻贰 )的色谱图 。 图 1 中的色
谱峰均为基线分离峰 , 分离度大于 2 。 辽吉
侧金盏花根部提取物的色谱 图如图 2所示 。
图 1 与图 2 中各流出定性峰的相对保留
时间 ( 以加拿大麻贰为基准 )列在表 1 中 。
分m i n
F i g
.
1
.
C h r o m
a t o g r a P h y o f
s t a n d a r d
e a r d ia
e g l y e o s i d e s C o n d i t i o n s
C o l u m n : O D S r e v e r s e d
一
P h
a s e e o l u m n ( C
i 。 ) ,
1 50 . 6
.
O m m
, M o b i l e : m e t h a n o l
一
w a t e r
(5 5
. ` 2 ) , F l o w r a t e . o
.
o s m l加 i n , U V m o n i t o r
a t 2 1吕n m , P r e s s u r e d r o P : 1 45 k g / e m 盆.
S e q u e n e e o f
e l u t i o n . ( z ) S o m
a l i n ; ( 2 )
K
一 s t r o P h a n t h o s i d 。 , ( 3 ) K 一 s t r o P h a n t h i n -
日, (召) C y m a r i旅 ( i n t e r n a l s t a n d a r d ) .
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.
2
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C h r o m a t o g r a P h y 0 1 e a r d i a c
g l y e o s i d
e s i n A d o n i s P s e u d o a m
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( C o n d i t i o n s a s i n F i g
.
1
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w i t h a n i n t e r n a l s t a n d a r d S e q u e
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o n ,
(1 )
s o m a l i n ; (2 ) k
o t r o p h a n t h o s i d
e ,
( 3 ) k
一 s t r o p h a n t h i n 一 p
, ( ` ) e y m a r i n ( i n t -
e r n a l s t a n d a r d )
.
由图 2 及表 l 可知 , 辽吉侧金盏花中主
要含索马林 ( S o ma l i n) 、 K一毒毛旋花子贰
(玲 S t r o p h a n t h o s id e )和 K一毒毛旋花次试
一p ( K 二 S t r o Pha n th in书 )
T a l be 1Re a lti v er et e此 io ni t me
( R RT )o fc ar i d ae l gy
一
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S e q U
-
e nC e
e ar di
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R RT
gly eo si d es
st a nd ar d
so lu tio n
s amP l
e
s0 lu tio n
台 Om a li no. 8 2 4士 0. 0 0 10. 28 4士 0. 0 0 1
k
一 str o P h a ntho si d e0
.
5 8 1士 0. 0 0 10.5 8 1士 0. 0 0 1
k
一 str o P h a” ti h n一日 0.5 2 6士 0. 0 0 0 1.5 2 6士 0. 0 0 1
二 、 校正曲线和检侧限
以强心试标准品峰面积及内标峰面积为
y轴 , 以进样量为 x 轴 , 绘制强心试及 内标
物的校正曲线 (图 3 ) 。 其回归方程如表 2所
不 。
T a b le 2 E q ua t i o n o f t h e lea s t
二
Sq U a r份 r e g t e 0 S 10 n
y = a + b x
e a r d i a e
a b r
.
g l y e o s i d e
s o m
a l i n 0
.
2 1 8 6 0
.
5 6 0
.
9 99 9
k
一 ` t r o P h a n t h o s i d e 0 . 5 7 9 3 5 . 8 2 0 . 9 99 8
k
一 : t r o P h a n t h i n 一 p 0
.
0 3 7 4吐 . 5 6 0 . 0 9 0 7
e y m a r i n
一 0 . 8 6 8 5 6 . 6 9 0 . 9 99 9
r i 相关系数
三 、 江吉侧金盏花根中强心试含盆的洲
定
内标法定量结果列在表 3 中。 虽然样品
中 2 号峰与 3 号峰未完全分开 , 但使用微处
理机处理色谱峰 , 不影响定量的准确性。
T a b le 3 T h e e o n t e n t s o f ca r d i a e
g l y e o s id e s in A d o n i s sP e u d ao m u r e sn i s
r 0 0 t
e a r d ia e g l y
e o s i d e e o n t e n t (% )
s o m
a l i n 0
.
0 2 4士 0 . 0 0 3
k
一 s t r o P h a n t h o s id e 0
.
1 3 土 0 . 0 1
k
一 s t r o Ph a n t h i n 一 p 0
.
0 7 1土 0 . 0 0 5
.匆仗
:
,入
召毛内.盛
r 一获一而 办 。刀 . , , .: 俘 。 ` , 分
I n j
e e t i o n w e i g h t (卜g )
F i g
.
3
.
C a L i b r a t io n g r a p h s o f s o m
e
e a r d i a e g l y e o s i d e s
由图 3 及表 2 可知 ,在 o ~ 2 . 0 “ g 范 围
内三种强心试标准品及内标物 (加拿大麻俄 )
的峰面积与其进样量存在良好的线性关系 。
用 2 18 n m 作为强心试紫外检测 波 长 ,
当信噪比为 10 : 1 时 , 、检测下限为20 0 n go
讨 论
1
. 本文采用室温冷浸 溶 剂萃取法在防
止原生试水解方面是成功的 , 这已在同属其
它植物的强心贰测定中得到证实 。 因此 ,本文
在辽吉侧金盏花中发现的三种强心贰均为原
生俄 。
2
。 除索马林外 ,其余两种为该植物中新
发现的强心试。
3
. 索马林 、 K 一毒毛旋花子次试一 日及
K一毒毛旋花子试的生物学活性均很强 [吕 l ,
因此 , 辽吉侧金盏花作为强心药的资源很有
开发价值 。
.
3
.
致谢 东北师范大学生物系张文仲教授为本实验使
用的辽吉侧金盏花进行了鉴定 , 在此表示谢 意。
参 考 文 献
〔 1 」中国科学院植物研究所编 : 中国植 物志北京 , 科
学出版 社 , 1 9 8 0 , 28 : 2 4 6
[ 2 〕 杨学敏等 : 中草 药 1 9 8 3 , 1 4 ( 3 ) : 4 3
〔 3 〕 马冰如等 : 自 求恩 医 科 大 学 学 报 1 9 85 , 1
( 4 )
: 3 7 1
仁通」迟立国等 . 药学 学报 1 ” 8 , 2 5 ( 2 ) : 马1
〔 5 〕 P a t n a i k C K , e t a l二 A r 名 n e im Fo r s e h
1 9 7 8 , 2 8 : 1 3 6 8
〔 6 〕 V a t n e r S F , e t a l : J . : C l i n I n v e s t 1 9 7 1 ,
50 : 2 5 8 5
〔 7 〕 D a v y d o v V . Y a . ,二e t a l : J . C h r o m a t o g r .
1 9 8 1 , 2 0 4: 2 9 3
〔 s 〕 D a v y d o v V . Y a . , e t a l . J . C h r o m a t o g r .
1 9 8 2 ; 2 4 8 : 4 9
I s o l a t i o n a n d D e t e r m i n a t i o n o f S o m e
C a r d i a e C l y e o s i d e s f r o m A d o n i s P s e u d o a m u r e n s i s
b y H i g h一 p e r f o r m a n e e L i q u id C h r o m a t o g r a P h y
G u X u e l i n F e lg S
u x i a n g
( H a r b i n U n i v
e r s i t y o f M e d i e a l S e i e n e e s )
M a B i n g r u S h i Y u e
( B e t h u n e U n i v e r s i t y o f M e d i e a l S e i e n e e s )
A b s t r此 t
W h
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w a t e r a s m o b i l
e P h a s e w a s u s e d
, e a r d ia e g l y e o s i d e s f
r o m A d o n i s P s e u d o a
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m u r e n s i s w e r e s e P a r a t e d a n d q u a t i t a t i v e l y d e t e r m i n a t e d o n O D S r e v e r s e d
一
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一 s t r o p h
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一日a n d S o m a l i n t h a t h a v e h i g h e r b i o lo g i e a l a e t i v i t v
i n A d o n i s p s e u d o a m u
r e n s i s
.
T h o e o n t e n t s o f k
一 s t r o p h a n t h o s i d e , k 一 s t r o p h a t h s n 一 p
a n d s o m
a l s n
a r e r e s p e e t i v e l y 0
.
3士 0 . 0 1% , 0 . 07 1 士 0 . 0 0 5% a n d 0 . 0 2 4士 0 . 0 0 3% 。
K e y w a r d s A d
o n i s P s u d o a m
u r e n s i s C a r d i a e g l y e o s i d e H i g h
一
p e r f o r m
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a t o g r a P h y
.
4
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