全 文 ：No.4.2008
高效液相色谱法测定野木瓜中
齐墩果酸的含量
唐维媛 1,董永刚 2*,张义明 3,王文平 2
(1.贵州省发酵工程与生物制药重点实验室,贵阳 550003;2.贵州大学
化学工程学院,贵阳 550003;3.贵州科技工程职业学院,贵阳 550008)
摘要:采用高效液相色谱法,对野木瓜中齐墩果酸的含量进行了测定。实验表明在色谱柱为 Shim-
packVP-ODS柱(250nm×4.6mm,5μm)、流动相为乙腈-1.1%乙酸水(94∶6)、流速为0.5mL/min、检
测波长205nm、柱温为室温、进样量20μL时,分离检测效果最佳,齐墩果酸含量在0.03～0.15mg/
mL范围内线性关系良好、精密度高、重现性好,回归方程:y=3.81424×10-8x-0.00240239,相关系数
r=0.9994,平均加样回收率为100.54%。实验测得野木瓜中齐墩果酸平均含量为0.1055%。
关键词:野木瓜;齐墩果酸;高效液相色谱
中图分类号:Q657.7+2 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2008)04-0189-03
野木瓜[Chaenomelescathayensis(Hemsl.)Schneid]
是一种比较珍贵、药食一体的天然植物,盛产于贵州
省正安县。野木瓜所含的生理活性成分可分为有机
酸、黄酮、五环三萜及其甙类、原花素单宁等,其中,
齐墩果酸是野木瓜的主要生理活性物质[1]。
齐墩果酸别名土当归酸,广泛分布于植物界,
属于五环三萜类化合物,分子式为 C30H48O3,白色簇
状针晶,无色、无味、无臭,不溶于水,可溶于乙
收稿日期:2007-08-20 *通讯作者
基金项目:贵州省科技基金项目(黔科合J字[2005]2017号)。
作者简介:唐维媛(1977—),女,贵州遵义人,硕士,讲师,研究方向为天然产物活性成分分析。
Determinationofoleanolicacidin
Chaenomelescathayensis(Hemsl.)schneidbyHPLC
TANGWei-yuan1,DONGYong-gang2*,ZHANGYi-ming3,WANGWen-ping2
(1.ProvincialKeyLabofFermentationTechnologyandBiologicalPharmacy,
Guiyang550003;2.ChemicalEngineeringSchoolofGuizhouUniversity,Guiyang550003:
3.GuizhouScienceandTechnologyEngineeringProfessionColege,Guiyang550008)
Abstract:HPLCwasusedtodeterminethecontentofoleanolicacidinChaenomelescathayensis(Hemsl.)
schneid.Thestudyindicatedthattheefectsofseparationanddeterminationwereoptimum whendeter-
minationparameterswereasfolows:analyticcolumn:Shim-packVP-ODScolumn(250nm×4.6mm,5μm),
themobilephasewasacetonitrile-1.1%aceticacidwater(94∶6),Theflowratewas0.5mL/min;UVdetection
wavelengthwas205nm,columntemperaturewastheroomtemperature.Therepressiveequationwas:y=
3.81424×10-8x-0.00240239,r=0.9994.Therelationshipofinjectionamountsandpeakwaslinearintherange
of0.03～0.15mg/mLandrecoveryratewas100.54%.Themethodwassimpleandavailable,accuracyand
goodreproducibility.Bythismethod,thecontentofoleanolicacidfrom Chaenomelescathayensis(Hemsl.)
schneidwas0.1055%.
Keywords:Chaenomelescathayensis(Hemsl.)schneid;oleanolicacid;HPLC
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食品安全与检测
189
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2008.04.066
No.4.2008
样品号 1 2 3 4 5 RSD/%
峰面积 499607650789585060629499819050612500.7729
表2 精密度实验结果
醇、氯仿、乙醚、丙酮等,熔点为310℃。齐墩果酸
具有护肝降脂、提高免疫力、降低血糖血脂等多方
面的生物活性和药理作用[2-4]。传统测定齐墩果酸的
方法主要有比色法、双波长薄层扫描法等[5],由于这
两种方法的显色误差较大,定量很不准确,目前已较
少采用。现阶段被广泛应用于枣子、山楂、枇杷及山
茱萸等天然产物中齐墩果酸成分检测的方法,主要
是高效液相色谱法。但是由于以上色谱测定条件,在
测定野木瓜中齐墩果酸时,不能很好实现基线分离,
定量困难。因此,本研究针对野木瓜中齐墩果酸,研
究适宜的高效液相色谱条件,以便为其准确定量提
供可靠的科学研究依据。
1 材料与方法
1.1 主要仪器
MiliporeA10超纯水制备仪;岛津10AVp高效液
相色谱仪:包括 LC-10A高压输液泵两台,SPD-
10AVp紫外可见光检测器,SCL-10AVp系统检测器,
CTO-10AVp柱温箱及CLASS-Vp工作站软件包;超声
波清洗器;EYELAN-1000V-WB旋转蒸发仪;梅特勒
分析天平;岛津UV-2550紫外可见分光光度计等。
1.2 原料与试剂
野木瓜鲜果:由贵州省正安县天楼野木瓜有限
公司提供。
齐墩果酸对照品:中国药品生物制品检定所提
供;乙腈、甲醇、醋酸:TEDIACOMPANY.INC提
供,色谱纯;其他试剂:国产分析纯。
1.3 方法
1.3.1 色谱条件 色谱柱为 Shim-packVP-ODS柱
(250nm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-1.1%乙酸水
(94∶6);流速 0.5mL/min;检测波长 205nm;柱温为
室温;进样量20μL。
1.3.2 对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的齐
墩果酸对照品6.00mg,于 10mL容量瓶中,加甲醇
溶解稀释至刻度,得浓度为 0.60mg/mL标准溶液。
再分别精密吸取标准溶液 0.50、1.00、1.50、2.00、
2.50mL,于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度后摇匀,
配制成 0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mg/mL的对照
品溶液。
1.3.3 供试品溶液的制备 取野木瓜鲜果切片干燥后
粉碎,过 120目筛,精确称取经以上处理的粉末
10.00g于烧瓶中,并加入100mL石油醚,在回流装
置上回流两次,每次2h,过滤。将脱好酯的木瓜粉
干燥后,称取 2.00g于索氏提取器中,加入 100mL
75%乙醇回流 2～3h,然后对提取液进行真空浓缩,
并将所得浸膏用甲醇富集定容于 50mL容量瓶中,
过0.45μm滤膜,即得供试品溶液。
2 结果与分析
2.1 标准曲线绘制
吸取 1.3.2中浓 度 分 别 为 0.03、0.06、0.09、
0.12、0.15mg/mL的对照品溶液各20μL,进样检测,
以峰面积为横坐标、对照品浓度为纵坐标作标准曲线
(见图1),得回归方程为y=3.81424×10-8x-0.00240239,
相关系数r=0.9994。实验结果表明:齐墩果酸对照品
溶液浓度在0.03～0.15mg/mL范围内,线性关系良好。
2.2 样品含量测定
按1.3.3的供试品溶液制备方法配制平行样品1、
2。并分别对它们采用 1.3.1中色谱条件进行检测,
结果见图2,根据峰面积计算供试溶液浓度及齐墩果
酸含量,结果见表1。
2.3 精密度实验
取1.3.2中配制好的浓度为0.15mg/mL的对照品
溶液重复进样5次,每次20μL,得齐墩果酸峰面积
RSD为 0.7729%,此值小于 5%,说明所使用的仪器
性能良好,随机误差小,所采用的色谱分析方法适
宜[6-8],结果见表2。
2.4 重复性实验
样品号 1 2 平均
供试溶液浓度/(mg/mL) 0.0850 0.0840 0.0845
齐墩果酸含量/% 0.1060 0.1050 0.1055
表1 齐墩果酸样品溶液浓度
图1 齐墩果酸标准工作曲线
18 20 22 24
1齐
墩
果
酸
2熊
果
酸
a.对照品
18 20 22 24
1齐
墩
果
酸
b.样品1
18 20 22 24
1齐
墩
果
酸
c.样品2
图2 齐墩果酸色谱图
0 5 10 15 20 25 30
峰面积(×105)
浓
度
/(
m
g/
m
L)
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
食品添加剂安全与检测
190
No.4.2008
取1.3.3中配制的齐墩果酸供试品溶液 5份,在
1.3.1色谱条件下进样测定,根据峰面积值,计算重
复测定齐墩果酸的 RSD为 1.9445%,说明此方法对
野木瓜中齐墩果酸的检测,具有很好的可重复性,
结果见表3。
2.5 稳定性实验
将 1.3.3中的供试品溶液,室温放置 1、2、4、
6、8h后,分别进样测定,结果供试品溶液在8h内
没有明显变化,齐墩果酸峰面积 RSD为 1.3390%,
说明样品溶液在8h内稳定,结果见表4。
2.6 加样回收率实验
精密吸取已测得浓度为 0.0840mg/mL的齐墩果
酸供试品溶液 0.50mL共 9份,每 3份为 1组,第 1
组分别加入齐墩果酸对照品(质量浓度为 0.0300mg/
mL)1.00mL,第 2组分别加入上述齐墩果酸对照品
1.50mL,第 3组分别加入上述齐墩果酸对照品
2.00mL。按照 1.3.1色谱条件分别进样,测定峰面
积,结果每组齐墩果酸的回收率如表 5所示,RSD
为 1.6007%。3组样的平均回收率为 100.54%,在理
想范围之内,表明本方法对样品的定量分析结果准
确度高[6]。
3 结论
本研究所得检测齐墩果酸的高效液相色谱条件,
能够实现野木瓜中齐墩果酸的良好分离及准确测定,
方法简便快捷、精密度高、重现性好,实验测得野木
瓜中齐墩果酸含量为0.1055%。
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44-45
样品中齐墩果
酸含量/mg
加入标
样量/mg
测得总
量/mg
回收
率/%
平均
/%
RSD
/%
0.0420 0.0300 0.0703 102.42
0.0420 0.0300 0.0711 101.27
0.0420 0.0300 0.0730 98.63
0.0420 0.0450 0.0879 98.98
0.0420 0.0450 0.0881 98.75 100.54 1.6007
0.0420 0.0450 0.0849 102.47
0.0420 0.0600 0.1009 101.09
0.0420 0.0600 0.1027 99.32
0.0420 0.0600 0.1001 101.90
表5 回收率实验结果
样品号 1 2 3 4 5 RSD/%
峰面积 114821711638681193258118162112057431.9445
表3 重复性实验结果
时间/h 1 2 4 6 8 RSD/%
峰面积 120125711845521175496117216811586911.3390
表4稳定性实验结果
食品安全与检测
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