全 文 ：基金项目：太原市科技项目人才专项明星专题 （１２０２４７－０８）；
国家自然科学基金 （８１１７３４７３）；山西省自然科学
基金 （２０１００１１０４８－２）；山西医科大学青年基金
（０２２０１１２８，０２２０１１２４）
作者简介：闫鸿羽 （１９９０－），女，在读硕士，从事天然产物药
效物质基础研究，Ｅ－ｍａｉｌ：１０４２１６０３２９＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：杨官娥 （１９６７－），女，教授，从事天然产物药效物
质基础研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｇｕａｎｅ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
·论　著·
北桑寄生提取液对沼泽红假单胞菌生长的影响
闫鸿羽，胡嘉琳，毕磊，张源，杨飞，杨官娥
山西医科大学药学院，山西 太原　０３０００１
摘要：目的　研究北桑寄生提取液对沼泽红假单胞菌生长的影响。方法　通过添加不同质量浓度的常规
培养基和北桑寄生提取液，培养沼泽红假单胞菌，观察活菌量的变化规律、生长曲线及脱氢酶活性。
结果　在全量培养基和无常规培养基中，北桑寄生提取液浓度分别为 （０～６．２５）ｇ／Ｌ和 （０～１２．５０）ｇ／Ｌ，
有利于细菌生长。最佳转化和未转化条件下细菌的脱氢酶活性分别增加９．７２和７．２０倍，活菌数无明显
变化。结论　低质量浓度北桑寄生促进沼泽红假单胞菌生长，反之则表现为抑制作用。高浓度北桑寄生
提取液可以增强脱氢酶活性。
关键词：光合细菌；沼泽红假单胞菌；北桑寄生；脱氢酶活性
中图分类号：Ｒ２８２．２１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００５－３７６Ｘ （２０１６）０９－１００２－０３
ＤＯＩ编码：１０．１３３８１／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｍ．２０１６０９００３
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｏｒａｎｔｈｕｓ　ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄａｎｏｎａｓ　ｐａｌｕｓｔｒｉｓ
ＹＡＮ　Ｈｏｎｇｙｕ＊，ＨＵ　Ｊｉａｌｉｎ，ＢＩ　Ｌｅｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｕａｎ，ＹＡＮＧ　Ｆｅｉ，ＹＡＮＧ　Ｇｕａｎ′ｅ
＊Ｐｈａｒｍａｃｙ　ｏｆ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ，Ｓｈａｎｘｉ　０３０００１，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＹＡＮＧ　Ｇｕａｎ′ｅ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｇｕａｎｅ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｌｏｒａｎｔｈｕｓ　ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄａｎｏｎａｓ
ｐａｌｕｓｔｒｉｓ（ＰＳＢ，ａｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｉｖｅ　Ｒ．ｐａｌｕｓｔｒｉｓ，ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ
ａｎｄ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｉｔｈ　ｔｏｔａｌ－ａｎｄ　ｎｕｌ－ｖｏｌｕｍｅｓ　ｏｆ　ｃｏｎｖｅｎ－
ｔｉｏｎａｌ　ｍｅｄｉａ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌ．ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉｎ　ｔｏｔａｌ－ｏｒ　ｎｕｌ－ｖｏｌｕｍｅｓ　ｏｆ
ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ｍｅｄｉａ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌ．Ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗａｓ
（０ －６．２５）ｇ／Ｌ　ｏｒ（０ －１２．５）ｇ／Ｌ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｔｙ　ｏｆ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　９．９４ｔｉｍｅｓ　ｏｒ
７．２８ｔｉｍｅｓ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｒ　ｎｏｎｅ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｌｉｖｅ
Ｒ．ｐａｌｕｓｔｒｉｓ　ｈａｄ　ｎｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　Ｒ．ｐａｌｕｓｔｒｉｓ　ｗａｓ　ｐｒｏｍｏｔｅｄ　ａｔ　ｌｏｗ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌ．ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ，ｗｈｉｌｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ａｔ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｌ．ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉ－
ｔｉｔｙ　ｏｆ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ｗａｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌ．ｔａｎａｋａｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗａｓ　ｈｉｇｈ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ；Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄａｎｏｎａｓ　ｐａｌｕｓｔｒｉｓ；Ｌｏｒａｎｔｈｕｓ　ｔａｎａｋａｅ；Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ
　　光合细菌分布广泛，具备固定氮和碳、制取氢
气、去除硫等功能［１］。广泛应用于畜牧业、水产养
殖等方面［２－３］。沼泽红假单胞菌 （Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄａｎｏｎ－
ａｓ　ｐａｌｕｓｔｒｉｓ）属于光合细菌紫色非硫菌群红假单胞
菌属。桑寄生科桑寄生属植物北桑寄生 （Ｌｏｒａｎｔｈｕｓ
ｔａｎａｋａｅ　Ｆｒａｎｃｈ．ｅｔ　Ｓａｖ．），寄生于栎、榆、李、桦
属等植物上，在民间多用来强健筋骨、祛除风湿、
降低血压等［４］。沼泽红假单胞菌转化北桑寄生转化
液上清液的槲皮素－３－鼠李糖苷、山奈酚－３－鼠李糖
苷、鼠李素－３－鼠李糖苷、鼠李柠檬素－３－鼠李糖苷含
量明显下降，沉淀中有新成分槲皮素、山奈酚、鼠
李素、鼠李柠檬素出现，且明显提高了转化液的抗
氧化作用。在此基础上探索了最佳生物转化和未转
化条件。本研究考察了不同ｐＨ、不同质量浓度北
桑寄生提取液和常规培养基对沼泽红假单胞菌生长
的影响与最佳转化和未转化条件下沼泽红假单胞菌
生长曲线及脱氢酶活性。
·２００１· 中国微生态学杂志２０１６年９月第２８卷第９期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｍｉｃｒｏｅｃｏｌ，Ｓｅｐ　２０１６，Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．９
１　材料与方法
１．１　材料、仪器与实验条件
１．１．１　材料　北桑寄生产于山西省晋城市历山；沼
泽红假单胞菌由山西大学光合细菌研究室分离鉴定
保藏；常规培养基：乙酸钠 １　６４０ ｍｇ、酵母膏
１　０００ｍｇ、ＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ　７５ｍｇ、ＥＤＴＡ　２０ ｍｇ、
Ｋ２ＨＰＯ４９００ｍｇ、ＫＨ２ＰＯ４ ６００ ｍｇ、ＭｇＳＯ４ ·７Ｈ２Ｏ
２００ｍｇ、ＦｅＳＯ４·７Ｈ２Ｏ　１１．８０ｍｇ、 （ＮＨ４）２ＳＯ４
１　３２０ｍｇ、微量元素１ｍＬ、去离子水定容至１Ｌ。
１．１．２　仪器　ＹＳ－１００型显微镜 （日本 Ｎｉｋｏｎ公
司），超净工作台 （上海新苗医疗器械有限公司），
ＤＬ－５－Ｂ低速离心机 （上海安亭科学仪器厂），７５２－
紫外分光光度计 （上海光谱仪器有限公司）。
１．１．３　实验条件　培养温度 （２５±２）℃，光照强度
２　５００ｌｘ （勒克斯），光照厌氧培养。培养瓶为
１００ｍＬ输液瓶，培养液和玻璃器皿均１２１℃高温湿
热灭菌３０ｍｉｎ，超净工作台在紫外线的照射下灭菌
３０ｍｉｎ，用血球计数法测定活菌数。实验平行操作
３次。
１．２　实验方法
１．２．１　不同ｐＨ、不同质量浓度北桑寄生提取液和
常规培养基对沼泽红假单胞菌活菌数的影响　北桑
寄生药材粉末用５０％的甲醇超声提取２次，合并上
清液并旋干，去离子水稀释至一定体积。按北桑寄
生原药材不同质量分别装入培养瓶中，加常规培养
基或水至１００ｍＬ，ｐＨ 值调至７．０和８．０，即制得
不同常规培养基 （全量培养基，无培养基）含不同
质量浓度北桑寄生提取液 （按北桑寄生原药材算）
培养液。灭菌，接种。所有的样品分别培养３和
５ｄ，测活菌数。
１．２．２　最佳转化和未转化前提下细菌生长曲线　按
１．２．１项下方法配制最佳转化样品 （１０ｇ北桑寄生／
１００ｍＬ去离子水，ｐＨ值８．０）、未转化样品 （２０ｇ
北桑寄生／１００ｍＬ去离子水，ｐＨ 值７．０）、最佳转
化对照品 （ｐＨ＝８．０全量常规培养基）、未转化对
照品 （ｐＨ＝７．０全量常规培养基）。灭菌，接种。
从接种时开始计时，每隔６ｈ测定活菌数。
１．２．３　最佳转化和未转化条件下沼泽红假单胞菌脱
氢酶活性测定方法　菌体固定化方法：收集活化好
湿菌体。以ＰＶＡ为固定材料，固定剂是硼酸溶液。
将制好的沼泽红假单胞菌小球于４℃冰箱中固定
２４ｈ，分别取５ｇ固定化细菌接种于１．２．２项下４个
样品中，培养３ｄ。脱氢酶活性测定方法：选用修改
后的ＴＴＣ （氯化三苯基四氮唑）法［５］，取出４个样
品中的固定化细菌，在无菌工作台剪碎并洗３次，
分别加入９ｍＬ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ　８．４）、３ｍＬ　０．４０％
ＴＴＣ、３ｍＬ　０．３６％ Ｎａ２ＳＯ３、３ｍＬ水，混合均匀，
置于 （３７±１）℃恒温摇床培养，５ｍｉｎ后吸出６ｍＬ
置于离心管中，加入０．６０ｍＬ甲醛溶液，作为空白
对照。剩余液体继续培养３０ｍｉｎ，加入１．２０ｍＬ甲
醛溶液混合均匀，与空白对照一起离心５ｍｉｎ，弃
去上清液，均添加６ｍＬ　８０％丙酮，搅匀，继续培
养１０ｍｉｎ，离心。分别取其上清液，在４８５ｎｍ处
测定吸光度值。脱氢酶活性计算方法：标准曲线Ａ＝
０．０２４Ｃ＋０．０００３，其中Ｃ为 ＴＦ （三苯基甲酯）浓度
（ｍｇ／ｍＬ），Ａ为吸光度，ｒ＝０．９９６２。计算每小时
每毫升菌液产生的ＴＦ的量。
２　结　果
２．１　不同ｐＨ、不同质量浓度北桑寄生提取液和常
规培养基对沼泽红假单胞菌生长的影响　如图１，
在全量培养基中，北桑寄生质量浓度由０ｇ／Ｌ增加
到６．２５ｇ／Ｌ，活菌数逐渐增加，６．２５ｇ／Ｌ时活菌量
最高，说明当北桑寄生药材浓度小于６．２５ｇ／Ｌ时，
有促进细菌生长的作用。随着北桑寄生提取液质量
浓度持续增加，抑制菌体生长。在相同ｐＨ 的全量
培养基中，药材浓度小于６．２５ｇ／Ｌ所对应的活菌量
５ｄ大于３ｄ。在无常规培养基中，北桑寄生浓度低
于１２．５０ｇ／Ｌ时促进细菌生长，大于１２．５０ｇ／Ｌ则
表现为抑制作用。在相同ｐＨ 的无常规培养基中，
药材浓度小于１２．５０ｇ／Ｌ时所对应的活菌量５ｄ大
于３ｄ。在含药培养液中，碱性环境 （酸碱度为
８．０）有助于细菌量增加。
图１　不同ｐＨ值和不同质量浓度北桑寄生提取液对
沼泽红假单胞菌生长的影响
２．２　最佳转化和未转化前提下细菌生长曲线　由
·３００１·中国微生态学杂志２０１６年９月第２８卷第９期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｍｉｃｒｏｅｃｏｌ，Ｓｅｐ　２０１６，Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．９
图２可知，２个对照品生长曲线比较差异无统计学意
义，细菌大约经过２４ｈ由延迟期进入指数期，４８ｈ到
达指数生长期的最高点，５４ｈ后活菌数变化不明显。
图２　最佳转化和未转化条件下沼泽红假单胞菌生长曲线
２．３　最佳转化和未转化前提下脱氢酶活性测定　由
表１可知，未转化样品是其对照品脱氢酶活性的
８．２０倍，最 佳 转 化 样 品 是 最 佳 转 化 对 照 品 的
１０．７２倍。
表１　最佳转化和未转化条件下沼泽红假单胞菌脱氢酶活性
样品
吸光度
（４８５ｎｍ）值
ＴＦ （三苯基甲酯）
浓度 （μｇ／ｍＬ·ｈ）
未转化对照品 ０．２１　 １７４．７５
最佳转化对照品 ０．１７　 １４１．４２
未转化样品 １．７２　 １４３３．０８
最佳转化样品 １．８２　 １５１６．４２
３　讨　论
３．１　以研究结果为线索提出假说　前期实验研究最
佳转化条件下细菌能够将４种糖苷类化合物的糖苷
键水解，初步推断菌体内可能含有糖苷键水解酶，
结合生长曲线推测细菌生长在受到抑制的情况下，
糖苷键水解酶的活性明显提高。未转化与最佳转化
条件的活菌量和脱氢酶活性有相似的变化规律，但
却没有转化北桑寄生，猜测适量的北桑寄生会激发
糖苷酶活性，浓度过高反而会抑制其活性。
３．２　研究结果的重要性　本实验证明了在全量培养
基和无培养基条件下低质量浓度北桑寄生促进沼泽
红假单胞菌生长。将一定质量浓度的北桑寄生开发
为光合细菌促生长剂，也可作为细菌生长的培养基，
对水产养殖、畜禽饲养等方面有重要意义。培养沼
泽红假单胞菌的具体条件应根据用途而定。用于农
牧业、水产养殖等需要大批量生产细菌的情况下，
在考虑节约培养基的前提下，应在无常规培养基条
件下进行培养，北桑寄生药材质量浓度应小于
１２．５０ｇ／Ｌ；用于生物转化中药提取液时，应在充分
考虑药理活性的前提下，提高转化效率。
３．３　研究的创新性和先进性　沼泽红假单胞菌是光
合细菌的一种，菌体蛋白质含量达６１．２４％，是一
种优良的蛋白源［６］，有很好的应用前景和研究价值。
添加一定量沼泽红假单胞菌能够显著提高泥鳅生存
水域中溶氧 （ＤＯ），有效调节氮磷比值 （Ｎ／Ｐ），起
到改善养殖水体微环境的作用［７］，也对水产品生产
废水有净化功能［８］。沼泽红假单胞菌ＰＳＢ０７－１５能
够有效地生物修复菊酯类农药在辣椒和土壤中的残
留［９］，修复农业生产环境中残留的农药。初步研究
发现沼泽红假单胞菌能显著降低铅中毒大鼠血铅含
量，增加尿铅和粪铅的排泄量［１０］，对开发排铅的药
品或保健品有重要意义。目前对沼泽红假单胞菌的
研究主要集中在渔业、农业、医疗保健等实际应用
方面，前期工作研究了槲寄生、枸杞对光合细菌生
长的影响，初次对北桑寄生对沼泽红假单胞菌生长
的影响进行研究。
３．４　研究的误差及有关设想　图１和图２是两批细
菌做出的结果，可能会存在一定的误差，但沼泽红
假单胞菌在北桑寄生影响下活菌量变化趋势是一致
的。低浓度北桑寄生促进细菌生长，猜测北桑寄生
提取物中某些成分能够刺激细菌的生长活性，下一
步将从基因水平阐明北桑寄生是如何通过调节基因
功能来促进沼泽红假单胞菌生长。
参考文献
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Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ｓｔｒａｉｎ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，
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ｐｌａｎｔａｒｉｃｉｎ　ＬＲ１４：ａ　ｎｏｖｅｌ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ－
ｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ　ＬＲ／１４［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　＆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，
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［８］ Ｇｏｎｇ　ＨＳ，Ｍｅｎｇ　ＣＸ，Ｗａｎｇ　Ｈ．Ｐｌａｎｔａｒｉｃｉｎ　ＭＧ　ａｃｔｉｖｅ　ａｇａｉｎｓｔ
Ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍ
ＫＬＤＳ１．０３９１ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＪｉａｏｋｅ，ａ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ
ｃｒｅａｍ　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，２０１０，２１：８９－９６．
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ａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｕｎｇａｌ　Ｂｉｏｌ，２０１４，１１８（２）：２６４－２７５．
［１０］　Ｓｍａｏｕｉ　Ｓ，Ｅｌｅｕｃｈ　Ｌ，Ｂｅｊａｒ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ
ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ　ＢａｃＴＮ６３５ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｌａｎｔａｒｕｍｓｐ．ＴＮ６３５［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　＆Ｂｉｏ－
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ｐｌａｎｔａｒｕｍｆｍｂ１０［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ，２０１５，３６（１７）：１４０－１４５．（ｉｎ
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　收稿日期：２０１６－０２－１５　修回日期：２０１６－０３－１６　本文编辑：
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李兵
（上接第１００４页）
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　收稿日期：２０１６－０３－０１　修回日期：２０１６－０３－２９　本文编辑：李兵
·０１０１· 中国微生态学杂志２０１６年９月第２８卷第９期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｍｉｃｒｏｅｃｏｌ，Ｓｅｐ　２０１６，Ｖｏｌ．２８Ｎｏ．９