全 文 :2014 年 2 月
第 4 卷 第 1 期
中 国 渔 业 质 量 与 标 准
Chinese Fishery Quality and Standards
Feb. 2014
Vol. 4 No. 1
江蓠与有益菌协同净化模拟养殖废水效果的研究
洪敏娜,杨莺莺* ,梁晓华,文国樑,李卓佳,杨铿,梁润捷
(中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部南海渔业资源开发利用重点实验室,
广东省渔业生态环境重点实验室,广东 广州,510300)
摘要:通过室内实验研究了细基江蓠繁枝变种(Gracilaria tenuistipitata Var. liui)与有益菌(光合细菌、芽孢杆菌和乳酸
杆菌)净化养殖废水的效果。本实验设置了对照、江蓠、光合细菌 +江蓠、乳酸杆菌 +江蓠、芽孢杆菌 +江蓠 5 个实验
组,跟踪各组在 120 h内对养殖废水的净化效果。结果显示,江蓠与有益菌协同净化养殖废水效果明显,各处理组
NH +4 - N、NO
-
2 - N、NO
-
3 - N、无机氮、PO
3 -
4 - P及 CODMn的去除效果均显著优于对照组(P < 0. 05)。对硝酸氮去除有较
好效果的是光合细菌 +江蓠、乳酸杆菌 +江蓠和芽孢杆菌 +江蓠组,在 48 h均达到 90 %以上;对亚硝氮去除效果最
好的是光合细菌 +江蓠组,在 120 h去除率达到 94%;对氨氮去除效果最好的是乳酸杆菌 +江蓠组,在 120 h 去除率
达 57. 72%;而对磷酸盐和 CODMn的去除效果各处理组差异不显著(P > 0. 05) ,在 72 h的去除率均达 80%以上。本研
究可为工厂化对虾养殖废水处理方案设计提供参考。[中国渔业质量与标准,2014,4(1) :33 - 37]
关键词:江蓠;光合细菌;芽孢杆菌;乳酸杆菌;养殖废水;净化
中图分类号:S945. 1 文献标志码:A 文章编号:2095 - 1833(2014)01 - 0033 - 05
收稿日期:2013 - 12 - 12;接收日期:2014 - 01 - 20
资助项目:现代虾产业技术体系建设专项资金(CARS - 47) ;公益性行业(农业)科研专项(201103034) ;国家农业科技成果转化
资金项目(2012GB23260551) ;广东省海洋渔业推广专项(A201201B02) ;广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻 1222013 -
3、桂科攻 13470002 - 2) ;中央级公益性科研院所基本业务科研费专项资金(中国水产科学研究院南海水产研究所)资助项目
(2012ZD02) ;广东省科技计划项目(2006B20601009) ;广东省海洋经济创新发展区域示范(GD2012 - A01 - 010)
作者简介:洪敏娜(1981 -) ,女,助理工程师,研究方向为水产微生态制剂,hmn1980@ 163. com
通信作者:杨莺莺,研究员,研究方向为养殖环境调控技术与生物修复,yyy402@ 126. com
工厂化和集约化对虾养殖废水中氨氮和亚硝氮
的含量较高,有机氮和磷等含量也较多,对近岸产生
了严重污染。传统的养殖废水处理方法主要有物理
处理法、化学处理法、物理化学处理法和生物处理法
等。近年来,国内外已有利用水生植物净化养殖废水
方面的研究报道[1 - 4]。
细基江蓠繁枝变种(Gracilaria tenuistipitata Var.
liui)属江蓠科江蓠属,是亚热带多年生种类,它是琼
脂工业的重要原料,同时又是鲍养殖的优质新鲜饵
料,具有较高的经济价值[5]。近年来,有研究表明细
基江蓠繁枝变种对 NH +4 - N和PO
3 -
4 - P具有明显的降
解效果[6]。光合细菌、乳酸杆菌和芽孢杆菌作为水
处理微生态制剂同样受到人们的关注,其对养殖水体
的净化作用已经得到人们的普遍肯定[7 - 9]。目前,联
合使用水生植物和有益菌净化养殖废水方面的研究
较少。本研究通过室内实验,模拟富营养化对虾养殖
废水,分别投放细基江蓠繁枝变种和有益菌(光合细
菌、乳酸杆菌和芽孢杆菌) ,观察其 120 h 内对水质的
影响,研究其变化趋势,为工厂化对虾养殖废水处理
方案设计提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 实验材料
实验菌种:荚膜红假单胞菌(Rhodopseudomonas
capsulata)液,活菌量为 5 × 108 CFU /mL;地衣芽孢杆
菌(Bacillus lichenifirmis)粉 末,活 菌 量 为 20 ×
108CFU /g;乳酸杆菌(Lactobacillus LH)液,活菌量为
5 × 108 CFU /mL。3 种有益菌均由中国水产科学研究
院南海水产研究所自行分离和筛选的菌株培养而成。
细基江蓠繁枝变种采自汕尾红海湾鲍鱼场,实验
前在室内暂养 1 周。暂养期水温 25 ~ 30 ℃,盐度15,
pH(7. 8 ± 0. 5) ,光照强度 2 500 ~ 3 500 1x,光周期
(L ∶ D)为 10 ∶ 14。
1. 2 模拟养殖废水的调配
所用养殖废水用虾料浸泡液、藻类营养素
(NH4NO3、K2HPO4)及亚硝酸钠配制而成,用海水晶
调盐度为 15,pH(7. 8 ± 0. 5) ,各项指标见表 1。
中 国 渔 业 质 量 与 标 准 2014
年
表 1 模拟养殖废水的相关指标
Tab. 1 The relative indexes of simulated aquaculture wastewater mg·L -1
指标
Index
NH +4 - N NO
-
2 - N NO
-
3 - N
无机氮
Inorganic nitrogen
PO3 -4 - P CODMn
检测值 1. 46 0. 33 1. 64 3. 45 0. 39 8. 70
1. 3 实验方法
试验分为对照(添加等量培养液)、江蓠、光合细
菌 +江蓠、芽孢杆菌 +江蓠、乳酸杆菌 +江蓠 5 个实
验组,每组设 3 个平行,直接将配好的模拟水分装至
20 L白色聚乙烯桶,每桶 10 L,每隔 24 h定时取样测
定各项水质指标。测定的指标有 NH +4 - N、NO
-
2 - N、
NO -3 - N、PO
3 -
4 - P 和 CODMn。根据罗勇胜等
[6]研究
结果确定江蓠投放密度为 20 g /L。光合细菌投菌量
为 2 × 104CFU /L;乳酸杆菌投菌量为 1 × 104 CFU /L;
芽孢杆菌投菌量为 1 × 104 CFU /L。
1. 4 水质测定方法
pH采用 PHB - 1 便携式 pH 计测定;盐度采用
ATAGO 8603 型盐度计测定;光照强度采用 JD - 3 型
数字式照度计测定;CODMn、NH
+
4 - N、NO
-
2 - N、
NO -3 - N和 PO
3 -
4 - P均采用国标方法测定
[10]。
1. 5 数据处理
各水质指标的去除率按式(1)计算。
R =(C0 - C t)/C0 × 100% 式(1)
式(1)中,R 为降解率;C0 为初始浓度;C t 实验结
束时的浓度。
所得数据以单因素方差分析法进行统计,以检验
各组数据间的显著性差异,显著性水平设置为 P <
0. 05。
2 结果与讨论
2. 1 各处理组对 NH +4 - N的降解效果
由图 1 - a可以看出,NH +4 - N浓度在 48 h 后,对
照组是处于平缓上升的趋势,而其他各实验组都是处
于下降的趋势,在 96 h,各混合组的降解率均达到了
55%以上,而江蓠组降解率低于各混合组,为 37%。
氨氮是水体中无机氮的主要存在形式,以离子氨
(NH +4 )和分子氨(NH3)的形式存在。其中分子氨对
水产养殖动物有毒害作用。浓度过高会抑制养殖动
物生长,甚至死亡,即使在安全浓度范围内,对养殖动
物生理功能也有显著的影响。因此控制氨氮是健康
养殖的关键措施之一[7]。由图 1 - a 可看出,对照组
氨氮的浓度一直呈上升的趋势,而处理组呈下降趋
势,其中光合细菌 +江蓠组氨氮的浓度在 24 h 时是
升高的,之后也呈下降趋势。可能是由于光合细菌培
养基中含有 NH +4 - N
[11 - 12],刚开始加入实验水体中
有益菌与江蓠还没来得及吸收,所以引起水体中的氨
氮浓度升高。而在 96 h,光合细菌 +江蓠组、芽孢杆
菌 +江蓠组氨氮浓度又呈上升趋势,这可能是由于反
硝化作用,将亚硝酸盐转变成氨所致[13]。
2. 2 各处理组对 NO -2 - N的降解效果
由图 1 - b可看出,对 NO -2 - N的净化效果:江蓠
+光合细菌组 >江蓠 +芽孢杆菌组 >江蓠 +乳酸杆
菌组,120 h 去除率分别为 94. 54%、88. 83% 和
85. 71%,而对照组和江蓠组亚硝氮升高至 184%和
80%。可见各混合组与江蓠组、对照组间存在显著性
差异(P < 0. 05)。
各实验组的亚硝氮是波动趋势,均是先升后降的
M型,这可能是由于亚硝氮处于氨氮转化为亚硝氮和
亚硝氮转化为硝氮的两个反应的中间体,受氨氮和硝
氮浓度影响,同时受有益菌的种类影响[9],所以处于
一种不稳定的状态。96 h后,各处理组均处于下降的
趋势。在 120 h,江蓠组对亚硝氮的降解效果是升高
的,这与罗勇胜等[14]的研究结果一致。有研究表明,
光合细菌、芽孢杆菌和乳酸杆菌降亚硝氮的效果非常
明显[7,9,15],而本实验的研究结果跟其他学者的研究
结果一致。由表 2 可看出,120 h 各混合组的降解效
果均优于江蓠组和对照组,均达到了 85%以上(P <
0. 05)。其中以光合细菌 +江蓠组的降解效果最优,
达到了 94. 54%。
2. 3 各处理组对 NO -3 - N的降解效果
由图 1 - c 可以看出,各实验组对 NO -3 - N 均有
去除作用。净化效果:江蓠 +芽孢杆菌组 >江蓠 +光
合细菌组 >江蓠 +乳酸杆菌组 >江蓠组。120 h 各处
理组的去除率分别为 98. 11%、96. 06%、91. 78%和
86. 48%,而对照组仅为 39. 20%(表 2)。可见各实验
组净化效果均优于对照组(P < 0. 05)。
43
第 1 期 洪敏娜,等:江蓠与有益菌协同净化模拟养殖废水效果的研究
图 1 不同处理组对 NH +4 - N、NO
-
2 - N、NO
-
3 - N、无机氮、PO
3 -
4 - P和 CODMn的降解效果
Fig. 1 Degradation effect of NH+4 -N,NO
-
2 -N,NO
-
3 -N,inorganic nitrogen,PO
3 -
4 -P and CODMnin treatment groups
表 2 120 h时模拟养殖废水中相关指标的降解率
Tab. 2 Degradation rate of the relative indexes in simulated aquaculture wastewater in 120 h 珋x ± SE;%
组别 Groups CODMn NH +4 - N NO
-
2 - N NO
-
3 - N PO
3 -
4 - P
无机氮
Inorganic nitrogen
对照组 67. 44 ± 1. 73a 25. 59 ± 10. 77a 184. 41 ± 6. 07a 39. 20 ± 4. 08a 14. 23 ± 5. 95a 5. 03 ± 5. 50a
江蓠组 80. 76 ± 0. 76b 40. 97 ± 4. 20b 80. 75 ± 7. 50b 86. 48 ± 1. 16b 97. 49 ± 0. 37b 53. 42 ± 3. 56b
光合细菌 +江蓠组 88. 17 ± 0. 49c 36. 20 ± 4. 86b 94. 54 ± 1. 10c 96. 06 ± 0. 26c 96. 24 ± 0. 41b 66. 84 ± 2. 37c
乳酸杆菌 +江蓠组 86. 28 ± 1. 12bc 57. 72 ± 0. 24c 85. 71 ± 1. 23d 91. 78 ± 0. 39bc 97. 64 ± 0. 73b 76. 43 ± 0. 73d
芽孢杆菌 +江蓠组 88. 10 ± 0. 61c 26. 89 ± 2. 88d 88. 83 ± 0. 98cd 98. 11 ± 0. 10c 93. 84 ± 0. 46bc 70. 63 ± 0. 39cd
注:* 同一列中标注不同字母的存在显著性差异 (P < 0. 05)。
已有研究表明,硝酸盐是许多海区藻类生长的主
要原料,藻类可利用周围环境中的硝酸盐作为氮源,
经过一系列酶的还原作用,将硝酸盐一步步地转化成
为氨氮后,成为合成有机物质的原料[16 - 17]。也有研
53
中 国 渔 业 质 量 与 标 准 2014
年
究认为硝酸盐对水生动物没有不良影响,过高的硝态
氮对养殖动物也有毒性,硝态氮主要是通过影响养殖
动物渗透作用和对氧的运输来影响养殖动物的生
长[18]。较高浓度的硝态氮,如果不能及时被微生物
或植物吸收转化为其他形式带走,一直会处于三态氮
的动态循环中。一旦水体溶氧不足,随时都会转入反
硝化过程,又以氨氮和亚硝酸盐的形式危害水生动
物。而且浓度太高也会引起水体的富营养化[7]。因
此需利用一些有益菌或藻类来降解。如果使用单一
的藻类或微生物会有弊端,而利用藻类与有益菌的协
同作用可以提高对 NO -3 - N的降解效果,本实验就证
明了这一点。由图 1 - c 可以看出,各处理组对
NO -3 - N的降解效果分别是江蓠 + 芽孢杆菌组 > 江
蓠 +光合细菌组 >江蓠 +乳酸杆菌组 >江蓠组。
2. 4 各处理组对无机氮的降解效果
由图 1 - d可以看出,在 48 h,各实验组对无机氮
的降解率均达到了 54%以上;在 120 h,各组的降解
率是混合组优于江蓠组优于对照组,而各混合组均比
对照组高出 58%(P < 0. 05)。
可溶性无机氮营养盐是浮游植物可以直接吸收
利用的物质,也是反映水质状况的重要指标,通过测
定无机氮的降解效果,对于动态监测水质状况具有重
要的现实意义。
2. 5 各处理组对 PO3 -4 - P的降解效果
由图 1 - e可以看出,各处理组对磷酸盐的去除
效果非常明显,且各组间差异不大(P > 0. 05)。由表
2 可以看出,120 h 降解率分别为:江蓠 +乳酸杆菌组
(97. 64%)、江蓠组(97. 49%)、江蓠 + 光合细菌组
(96. 24%)、江蓠 +芽孢杆菌组(93. 84%)。
水体富营养化的根本原因是营养物质的增加,使
得藻类和有机物增加所致,而磷是控制水体富营养化
过程的关键性营养物[19]。由图 1 - e 可得出,各处理
组对 PO3 -4 - P的降解效果非常明显,而且各组间差异
不大(P > 0. 05) ,均达到 90% 以上,这与其他学
者[6,8,13]的研究结果相同。
2. 6 各处理组对 CODMn的降解效果
由图 1 - f 可以看出,对 CODMn的降解效果各实
验组在 48 h的降解率均达到 80%以上,且各组间相
差不大,可见各实验组对 CODMn的去除效果明显。
CODMn是作为衡量水中有机物质含量多少的指
标,由于有机物是主要的还原性污染物,CODMn可作
为衡量水质受有机物污染程度的综合标志,是水质检
测的基本综合指标。相关研究表明,江蓠和江蓠 +益
生菌能较好地降解 COD[20]Mn ,而本研究也给出了同样
的结果。在 120 h 内,各处理组都能较好地降解
CODMn,降解率达到 80%以上,且混合组略优于江蓠
组,说明了有益菌与江蓠协同作用降解 CODMn效果
明显。
3 结论
本研究结果表明,江蓠与有益菌协同净化模拟养
殖水体效果明显。对硝酸氮去除均有较好效果的是
江蓠 +芽孢杆菌、光合细菌 +江蓠和乳酸杆菌 +江蓠
组;对亚硝氮去除效果最好的是光合细菌 +江蓠组;
对氨氮去除效果最好的是乳酸杆菌 +江蓠组;对磷酸
盐、CODMn的去除效果各组差异不大;各处理组对模
拟养殖废水各指标的降解效果均优于对照组,且差异
明显(P < 0. 05)。
由上可见,江蓠与有益菌协同净化养殖废水模式
可行,实用性强,操作简单。各养殖场可根据当地水
质情况,选择合适的处理方式,净化养殖用水。本研
究为工厂化对虾养殖废水处理方案设计提供科学依
据,对推进水产养殖可持续健康发展具有重要意义。
参考文献:
[1] 李秀辰,张国琛,崔引安,等. 孔石莼对养鲍污水的
静态净化研究[J]. 农业工程学报,1998,14(1) :173
- 176.
[2] 刘静雯,董双林,马甡,等. 温度和盐度对几种大型
海藻生长率和 NH4 - N 吸收的影响[J]. 海洋学报,
2001,23(2) :109 - 116.
[3] Cinzia F,Antonella C,Maurizio F,et al. Sulphadime-
thoxine and Azolla filiculoides Lam.:a model for drug re-
mediation[J]. Water Res,2002,36:3398 - 3403.
[4] Cohen I,Meori A. Ulva lactuca biofilters for marine fish-
pond effluents. I. Ammonia uptake kinetics and nitrogen
content[J]. Bot Marina,1991,34:475 - 482.
[5] 范晓,韩丽君,周天成,等. 中国沿海经济海藻化学
成分的测定[J]. 海洋与湖沼,1995,26(2) :200
- 207.
[6] 罗勇胜,李卓佳,文国樑,等. 细基江蓠繁枝变种净
化养殖废水投放密度的初步研究[J]. 南方水产,
2006,2(5) :7 - 11.
[7] 李卓佳,周海平,杨莺莺,等. 乳酸杆菌(Lactobacil-
lus spp.)LH对水产养殖污染物的降解研究[J]. 农业
环境科学学报,2008,27 (1) :342 - 349.
[8] 刘波,刘文斌. 芽孢杆菌对水产养殖环境的净化作用
63
第 1 期 洪敏娜,等:江蓠与有益菌协同净化模拟养殖废水效果的研究
[J]. 渔业现代化,2004,31(2) :7 - 8.
[9] 罗勇胜,李卓佳,杨莺莺,等. 光合细菌与芽孢杆菌
协同净化养殖水体的研究[J]. 农业环境科学学报,
2006,25(增刊) :206 - 210.
[10] 国家质量监督检验检疫总局 . GB 17378. 4—1998 海洋
监测规范[S]. 北京:中国标准出版社,1998.
[11] 陈明耀. 生物饵料培养[M]. 北京:中国农业出版社,
1995:17 - 24.
[12] 中国科学院微生物研究所. 菌种保藏手册[M]. 北
京:科学出版社,1980:119.
[13] 周德庆. 微生物学教程[M]. 第 2 版. 北京:高等教育
出版社,2002.
[14] 罗勇胜,李卓佳,文国樑,等. 细基江蓠繁枝变种净
化养殖废水投放密度的初步研究[J]. 南方水产,
2006,2(5) :7 - 11.
[15] 刘慧玲,张红莲,李细钊. 光合细菌 I 的分离及其对
水体中亚硝酸盐降解的研究[J]. 水产科学,2005,24
(6) :32 - 33.
[16] Berges J A,Hageman R H. Nitrate reductase activity
quantitatively predicts the rate of nitrate incorporation un-
der steady state light limitation :a revised assay and char-
acterization of the enzyme in three species of marine phy-
toplankton[J]. Limnol Oceanogr,1997,40(1) :82 -
93.
[17] Leanne J,Tracy A,Fred L. A high sensitivity nitrate re-
ductase assay and its application to vertically migrating
Rhizosoleniamats[J]. Aquat Microb Ecol,1997,12:95
- 104.
[18] 葛国昌. 海水鱼类增养殖学[M]. 青岛:青岛海洋大
学出版社,1991:28 - 30.
[19] 丁学锋,蔡景波,杨肖娥,等. EM菌与水生植物黄花
水龙(Jussiaea stipulacea Ohwi)联合作用去除富营养化
水体中氮磷的效应[J]. 农业科学学报,2006,25(5) :
1324 - 1327.
[20] 李卓佳,罗勇胜,文国樑. 细枝江蓠繁枝变种与益生
菌净化养殖废水的研究[J]. 热带海洋学报,2007,26
(5) :72 - 75.
The synergetic effect of Gracilaria tenuistipitata and
probiotics on simulated aquaculture wastewater purification
HONG Minna,YANG Yingying* ,LIANG Xiaohua,WEN Guoliang,LI Zhuojia,YANG Keng,LIANG Runjie
(South China Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences;Key Laboratory of
South China Sea Fishery Resources Exploitation and Utilization,Key Laboratory of Fishery
Ecology and Environment,Ministry of Agriculture,Guangzhou 510300,China)
Abstract:The synergetic effect of Gracilaria tenuistipitata Var. liui and probiotics on simulated aquaculture wastewater
purification was studied in laboratory. One control group and four treatment groups including Gracilaria,photosynthetic
bacteria + Gracilaria,Lactobacillus + Gracilaria,Bacillus + Gracilaria were considered. The effect of simulated aqua-
culture wastewater purification among 120 h was studied. The results showed that,compared with control group,deg-
radation of NH +4 - N,NO
-
2 - N,NO
-
3 - N,inorganic nitrogen,PO
3 -
4 - P,and CODMn in treatment groups showed sig-
nificant difference(P < 0. 05). The effect of NO -2 - N degradation in the three treatment groups of photosynthetic bacte-
ria + Gracilaria,Lactobacillus + Gracilaria and Bacillus + Gracilaria was good,and degradation rates of NO -3 - N were
all more than 90% in 48 h. The degradation rate of NO -2 - N in photosynthetic bacteria + Gracilaria groups was 94% in
120 h. The degradation rate of NH +4 - N in Lactobacillus + Gracilaria groups was 57. 72% in 120 h. The degradation
rates of PO3 -4 - P and CODMn were more than 80% in 72 h,and showed no significant difference between treatmeat
groups (P > 0. 05). This study can provide a scientific reference for designing industrialized shrimp aquaculture
wastewater treatment program. [Chinese Fishery Quality and Standards,2014,4(1) :33 - 37]
Key words:Gracilaria tenuistipitata;photosynthetic bacteria;Bacillus;Lactobacillus;aquaculture wastewater;purification
Corresponding author:YANG Yingying,yyy402@ 126. com
73