全 文 :茶 叶 科 学 2008,28(2):115~122
Journal of Tea Science
收稿日期:2007-10-08 修订日期:2008-01-14
作者简介:顾陈菲(1984— ),女,浙江宁波人,硕士研究生,主要从事免疫药理学方向研究。Email: Gcfei.165@163.com
狭叶茶提取物对小鼠氧化应激性肝损伤的保护作用
顾陈菲 1,宝丽 2,谢果 1,吕艳青 1,姚新生 2,栗原博 1
(1. 暨南大学药学院天然药物与中药研究所,广东 广州 510632;2. 沈阳药科大学中药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘要:研究狭叶茶(Camellia angustifolia Chang)提取物对拘束负荷诱发小鼠应激性肝损伤的保护作用。采用
拘束负荷小鼠应激性肝损伤模型,18 h 拘束负荷诱发小鼠应激性肝损伤,分别用赖氏法测定小鼠血浆和肝组织
丙氨酸转移酶(ALT)活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量、HPLC 法测定谷胱甘肽(GSH)水平、
比色法测定黄嘌呤氧化酶(XOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽 S 转移酶(GST)活性,荧光酶
标仪测定血浆、肝组织及狭叶茶提取物体外抗氧化能力指数(ORAC)。与拘束模型组相比,狭叶茶提取物可
以明显提高拘束负荷小鼠血浆与肝组织匀浆的 ALT 活性和抗氧化能力指数,提高 GSH 水平,增强 GPX 和 GST
活性,有效降低肝组织中 MDA 含量和 XOD 活性,并在体外显示出较强的抗氧化能力。说明狭叶茶提取物对
拘束应激引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能部分来自于减少拘束负荷小鼠氧化应激水
平,清除自由基和抑制脂质过氧化过程。
关键词:狭叶茶;拘束负荷;氧化应激;抗氧化能力指数
中图分类号:TS272 文献标识码:A 文章编号:1000-369X(2008)02-115-08
Protective Effects of Camellia angustifolia Chang on
Oxidative Stress-induced Liver Damage in Mice
GU Chen-fei1, BAO Li2, XIE Guo1, LU Yan-qing1, YAO xin-sheng2, Kurihara Hiroshi 1
(1. Institute of Traditional Chinese Medicine and Natural products, JiNan University, Guangzhou 510632, China;
2. School of Traditional Chinese Materia Medica, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)
Abstract: To investigate the protective effect of Camellia angustifolia Chang extracts (CA. extracts) on restraint
stress-induced liver damage in mice, The mice model of stress-induced liver damage was used in investigation. After
18 h restraint stress on mice 4 days following CA. extracts treatment, the liver damage was established. Alanine
aminotransferase (ALT) and xanthine oxidase(XOD)activities, malondialdehyde (MDA) contents, GSH levels, GPX
and GST activities, as well as oxygen radical absorbance capacity (ORAC) values in liver were determined to
evaluate the hepatoprotective effects. Compared with restraint model group, CA. extracts can markedly reduce ALT
activities, MDA contents and XOD activities, protect the liver damage induced by oxidative stress. Additionally, CA.
extracts can effectively increase the ORAC values both in vivo and in vitro, as well as GSH levels, GPX activities
and GST activities. Oral treatment of CA. extracts was found to reduce restrain-stress-induced liver damage in terms
of above mentioned biochemical parameters, it is considered that this protective effects may be related to its free
radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory effects.
Keywords: Camellia angustifolia Chang, restraint stress, oxidative stress, oxygen radical absorbance capacity
狭叶茶为茶科(Theaceae)山茶属(Camellia
Linn.) 茶 组 ( Sect.Thea Dyer ) 茶 系
( Ser.Sinenses ) 植 物 狭 叶 茶 (Camellia
angustifolia Chang)的叶,系多年生野生灌木,
DOI:10.13305/j.cnki.jts.2008.02.013
茶 叶 科 学 28 卷
~ 116 ~
分布于广西大瑶山地区,作为健康茶饮用历史
悠久。山茶属植物富含咖啡因等嘌呤生物碱及
茶多酚类抗氧化活性化合物,具有较大的经济
价值,而狭叶茶的化学成分及生物活性的研究
尚未见报道。对狭叶茶进行研究,挖掘和丰富
茶叶资源,无疑具有重要的意义[1,2]。
Kurihara 等[3]人的研究证明小鼠在应激状
态下,体内产生过剩的氧自由基最终造成机体
内环境失衡的一系列病理生理过程。而肝脏易
受各种应激负荷的影响引起肝损伤。因此可以
设想一些具有抗应激及抗氧化作用的中药或
其活性成分可以通过缓解氧化应激状态及提
高机体的内源性抗氧化能力来改善与预防应
激性疾病的发生。本研究利用拘束负荷模型探
讨狭叶茶提取物的抗应激作用及对体内氧化
应激状态的影响,并对狭叶茶水提物体外抗氧
化能力进行了考察,以期对狭叶茶进一步的开
发提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 狭叶茶提取物制备
本实验采用的狭叶茶采自广西大瑶山地
区,由中山大学生物科学院叶创兴教授鉴定。
取新鲜叶片,沸水蒸 3 min 杀青,烘箱 60℃过
夜烘干粉碎。干燥粗粉 65 g 以 10 倍体积的蒸
馏水加热回流 30 min,连续提取 3 次,过滤后
合并滤液,减压浓缩后冷冻干燥,得狭叶茶提
取物(CA. extracts) 6.7 g,收率为 10.3%。
1.2 药品与化学试剂
茶多酚标准品 GA,C,EC,GC,GCG,
EGC,EGCG,CG 和 ECG 购自美国 Sigma 公
司;丙氨酸转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)、
黄嘌呤氧化酶 (XOD)、谷胱甘肽 S 转移酶
(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及考
马斯亮兰蛋白测定试剂盒购自南京建成生物
工程研究所;谷胱甘肽 (glutathione,GSH,
Kohjin Co., Ltd., Tokyo, Japan);辛烷磺酸钠
(SOS, Tokyo Kasei Kogyo Co., Ltd, Tokyo,
Japan);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);
标准品 Caffeine, theobromine, theophylline,抗
氧 化 标 准 物 Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-
tetramethylchroman-2-carboxylic acid,维生素
E 的水溶性衍生物 ),自由基产生剂 AAPH
(2,2’-azobis-2-amidinopropane-dihydrochloride),
荧光素钠(sodium fluorescein)均购自日本和
光纯药株式会社。
1.3 实验仪器与设备
高效液相色谱系统包括 HITACHI L-6200
型输液泵,L-5020 型柱温箱;ECD-100 型电
化学检测器,Cosmosil 系列 5C18(4.6 mm×150
mm)色谱柱,N2000 色谱数据工作站;MK3
型 酶 标 仪 ; GENios 系 列 荧 光 酶 标 仪 及
Magellan 工作站;ULTRA-TURRAX T8 型组
织匀浆机及 3-18K 型台式高速冷冻离心机等
仪器用于本实验。
1.4 狭叶茶提取物成分分析
狭 叶 茶 提 取 物 成 分 分 析 采 用 Waters
RP-18 column 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 µm),
流动相 A 乙腈-水-磷酸(5:95:0.05),流动相
B 乙腈-水-磷酸(50:50:0.05),流速 1.0 ml/min,
梯度洗脱设定流动相 A 为 0~9 min 90%,9~13
min 调整为 80%,13~23 min 减至 20%。柱温
40℃,进样量 20 µl,检测波长 231 nm。
标准品溶液制备为精密称取茶多酚标准
品 GA、C、EGCG、EC、GC、EGC、GCG、
CG 、 ECG 和 生 物 碱 标 准 品 Caffeine 、
Theobromine、Theophylline,均用乙腈-水-磷
酸(5:95:0.05)溶液配制成 1.0 mg/ml 的溶液,
并依次稀释得到一系列浓度,0.45 µm 微孔过
膜,分别进样 20 µl,以峰面积为纵坐标(Y),
以进样量为横坐标(X),绘制标准曲线。
精密称取狭叶茶提取物 5 mg,用乙腈-水
-磷酸(5:95:0.05)溶液配成 5 mg/ml 样品溶液,
过 0.2 µm 滤膜,续滤液用于成分分析。
1.5 动物分组与给药
雄性 7 周龄清洁级 Balb/c 小鼠购自南方
2 期 顾陈菲,等:狭叶茶提取物对小鼠氧化应激性肝损伤的保护作用
~ 117 ~
医科大学实验动物中心,许可证号 SCXK(粤)
2006-0015。小鼠饲养一周后进行实验。
实验将小鼠随机分为 5 组,每组 10 只,分
别为正常对照组、拘束模型组、250 mg/kg Vc
给药组、400 mg/kg 及 200 mg/kg 狭叶茶高、低
剂量组,正常对照组和拘束负荷模型组均灌胃
同体积蒸馏水,每天 1 次,第 4 d 给药 30 min
后模型组和狭叶茶高低剂量组以及 Vc 给药组
给予一次性拘束 18 h(14:00~8:00)。小鼠拘束
装置参考文献[4]改制,为通风良好的 50 ml 尖底
聚丙烯塑料离心管,拘束期间小鼠不能进食饮
水,正常对照组小鼠为非拘束禁食禁水小鼠。
1.6 测定方法
赖氏法测定血浆和肝组织 ALT 活性,
TBARS 法测定肝组织 MDA 水平,比色法测
定肝组织黄嘌呤氧化酶(XOD)活性,GSH-Px
活性及 GST 活性,均采用试剂盒方法。HPLC
法测定 GSH 水平[5]。
1.7 抗氧化能力指数(ORAC)的测定
本实验参照 Davalos 等人方法[6,7]并加以
改进。其原理为荧光素钠在 485 nm 光激发下,
发射 527 nm 荧光,可以被 AAPH 释放的过氧
自由基氧化而使荧光特性消失。当抗氧化剂存
在时,可与荧光素钠竞争氧化剂,减缓其荧光
消退的速度。根据这一特性,可用来测定样品
氧自由基清除活性。具体测定方法是将 96 孔
板每个微孔中加入待测样品溶液 20 µl,再加
入磷酸钾缓冲液 20 µl 和 AAPH 140 µl (终浓
度 12.8 mmol/L),最后添加荧光素钠 20 µl
至终浓度为 63 nmol/L,立即启动反应并迅速
将酶标板置于预温 37℃的荧光酶标仪中开始
测定。采用动力学方式,每 2 min 测定一个点,
至荧光强度衰减为零为止。ORAC 值是以 20
µmol/L 的 Trolox 在荧光衰减曲线上对应的保
护积分面积作为标准对照计算。
1.8 统计学处理
实验数据以 mean±S.E ( x ± s) 表示,采用
SPSS 软件,利用 ANOVA 检验进行统计学处
理,P<0.05 有统计学意义。
2 结果
2.1 狭叶茶提取物的分析结果
精密吸取 20 µl 对照品溶液,按 1.4 所述
色谱条件测定,以色谱峰面积为纵坐标,对照
品质量浓度为横坐标作线性回归,得到 EC 的
标准曲线 y=0.8213x-0.9737(R=99.90%),Caff
的标准曲线 y=0.4421x-0.5112(R=99.58%)。
同时取 20 µl 样品溶液进样,结果表明在 CA.
extracts 中 EC 含量为 4.06 mg/g .dry wt,Caff
含量为 0.97 mg/g .dry wt(图 1 A,B)。
2.2 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠血浆和
肝组织匀浆 ALT 水平的影响
与正常对照组相比,拘束负荷诱发小鼠血
浆和肝组织 ALT 水平明显升高。Vc 对照组和
CA. extracts 高、低剂量组均能显著降低拘束
负荷小鼠血浆 ALT 水平(P<0.01),其中高
剂量组的血浆和肝组织匀浆均具极显著意义,
提示具有一定量效关系(表 1)。
2.3 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠肝组
织 MDA 含量及 XOD 活性的影响
拘束负荷小鼠肝组织 MDA 含量显著升高
至正常组的 1.5 倍(P<0.01)。Vc 给药组和
CA. extracts 高、低剂量组均能显著降低拘束
负荷小鼠肝组织 MDA 含量;
与正常组相比,拘束负荷小鼠肝组织
XOD 活性显著升高(P<0.01)。Vc 对照组和
CA. extracts 高、低剂量组对拘束负荷小鼠肝
组织 XOD 活性的升高有不同程度的改善作
用,其中低剂量组效应与阳性药组相当,高低
剂量组有很好的量效关系(表 2)。
2.4 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠肝组
织 GSH 水平的影响
与正常组相比应激模型组小鼠肝组织匀
茶 叶 科 学 28 卷
~ 118 ~
0.0 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 8.8 10.0 11.3 12.5 13.8 15.0 16.3 17.5 18.8 20.0 21.3 23.0
-50
0
50
100
150
200
250 _ _mAU
min
1 - GA - 3.442
2 - Tb - 4.308
3 - GC - 5.5424 - TP - 6.500 5 - EGC - 10.200
6 - TC - 10.867
7 - C - 11.550
8 - CAFF - 12.300
9 - EC - 16.442
10 - EGCG - 17.275
11 - GCG - 18.258
12 - ECG - 19.767
13 - CG - 19.933
WVL:231 nm
A(标准品)
0.0 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 8.8 10.0 11.3 12.5 13.8 15.0 16.3 17.5 18.8 20.0 21.3 23.0
-200
500
1,000
1,500
2,200 06 9 2 #70 [modified by dionexg] 石芽茶 UV_VIS_3
mAU
min
1 - 10.550
2 - CAFF - 12.417
3 - 14.442
4 - 15.867
5 - EC - 16.508
6 - 17.575
7 - 17.908 8 - 18.792
9 - 19.058
10 - 19.558
11 - 20.40812 - 20.475
WVL:231 nm
B(CA. extracts)
图 1 CA. extracts 的 HPLC 色谱图(231 nm)
Fig. 1 HPLC chromatograph of CA. extracts at 231 nm
表 1 狭叶提取物对拘束负荷小鼠血浆和肝组织匀浆 ALT 水平的影响
Table 1 Effects of CA. extracts on ALT levels in plasma and liver tissue obtained from mice loaded with restraint stress
( x ± s, n=10)
组别 Treatment Plasma(IU/L) Liver (IU/mg prot)
正常对照 Normal control
模型对照 Restraint stress control
Vc 对照 Restraint stress + Vc (250 mg/kg)
低剂量 Restraint stress+ CA. extracts(200 mg/kg)
高剂量 Restraint stress +CA. extracts(400 mg/kg)
81.72±1.63
132.68±0.81△
83.49±1.55*
108.10±0.98*
99.46±1.32*
65.44±2.22
81.82±2.31△
68.23±1.40*
64.67±1.89*
63.42±1.09*
注:与正常组相比△P<0.01,与拘束模型组相比*P<0.01。
Note: The significance of differences from the normal control at △P<0.01 and stress control at *P<0.01.
表 2 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠肝组织 MDA 含量及 XOD 活性的影响
Table 2 Effects of CA. extracts on MDA and XOD index in liver tissue obtained from mice loaded with restraint stress
( x ± s, n=10)
组别 Treatment MDA(nmol/mg prot) XOD(U/mg prot)
正常对照 Normal control
模型对照 Restraint stress control
Vc 对照 Restraint stress + Vc (250 mg/kg)
低剂量 Restraint stress+ CA. extracts(200 mg/kg )
高剂量 Restraint stress +CA. extracts(400 mg/kg)
2.24±0.07
3.36±0.24△
1.52±0.11*
1.54±0.25*
1.11±0.10**
6.24±0.18
7.14±0.23△
6.15±0.20**
6.20±0.29*
5.74±0.25**
注:与正常组相比△P<0.01,与拘束模型组相比**P<0.01, *P<0.05。
Note: The significance of differences from the normal control at △P<0.01 and stress control at **P<0.01, *P<0.05.
浆的 GSH 水平下降了 41.2% (0.29±0.03 µg/mg
tissue vs 0.41±0.03 µg/mg tissue)。与应激模型
组相比,CA. extracts 给药组均可提高小鼠肝
脏 GSH 水平。Vc 组,CA. extracts 高、低剂量
组 GSH 水平分别为 0.40±0.03 µg/mg tissue,
0.46±0.04 µg/mg tissue 和 0.45±0.03 µg/mg
tissue,GSH 水平分别比应激模型升高 39.7%,
63.3%和 54.4%,显示一定的量效关系(图 2)。
2 期 顾陈菲,等:狭叶茶提取物对小鼠氧化应激性肝损伤的保护作用
~ 119 ~
2.5 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠肝组织
GPX 和 GST 活性的影响
小鼠肝组织 GPX 和 GST 活性在拘束负荷
后相比正常组显著降低(GPX: 29.06±1.92 vs
48.88±2.20 U/mg prot),(GST: 114.68±1.01 vs
160.78±3.23 U/mg prot)(P<0.01)。CA. extracts
各剂量组对拘束负荷小鼠肝组织 GPX 和 GST
活性降低均有一定的改善作用,其改善程度均
具极显著意义(P<0.01)(表 3)。
表 3 狭叶茶对拘束负荷小鼠肝组织 GST、GPX 活性的影响
Table 3 Effects of CA. extracts on GPX and GST index in liver tissue obtained from mice loaded with restraint stress
( x ± s, n=10)
组别
Treatment
GPX
(U/mg prot)
GST
(U/mg prot)
正常对照 Normal control
模型对照 Restraint stress control
Vc 对照 Restraint stress + Vc (250 mg/kg)
低剂量 Restraint stress+ CA. extracts.(200 mg/kg)
高剂量 Restraint stress + CA. extracts(400 mg/kg)
48.88±2.20
29.06±1.92△
39.17±0.55*
45.80±1.33*
46.11±1.67*
160.78±3.23
114.68±1.01△
147.35±4.97*
139.01±5.31*
140.96±4.12*
注:与正常组相比△P<0.01,与拘束模型组相比*P<0.01。
Note: The significance of differences from the normal control at △P<0.01 and stress control at *P<0.01.
表 4 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠血浆和肝组织 ORAC 指数的影响
Table 4 Effects of CA. extracts on ORAC index in plasma and liver tissue obtained from mice loaded with restraint stress.
( x ± s, n=10)
组别
Treatment
Plasma
(µmol/L, Trolox equivalents)
Liver
(µmol/L,Trolox equivalents)
正常对照 Normal control
模型对照 Restraint stress control
Vc 对照 Restraint stress + Vc (250 mg/kg)
低剂量 Restraint stress + CA. extracts(200 mg/kg)
高剂量 Restraint stress + CA. extracts (400 mg/kg)
110.61±4.61
98.66±3.36△
124.23±4.63**
110.33±3.50*
115.56±4.64**
40.60±1.88
26.49±1.48△△
53.98±3.08**
38.26±1.21**
56.93±2.36**
注:与正常组相比△△P<0.01, △P<0.05;与拘束模型组相比**P<0.01, *P<0.05。
Note: The significance of differences from the normal control at △△P<0.01, △P<0.05, and stress control at **P<0.01, *P<0.05.
图 2 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠肝组织 GSH 水平的影响
Fig. 2 Effect of CA.extracts on GSH levels in liver (µg/mg tissue) homogenization obtained from mice loaded with restraint stress
注: Normal , Model, Vc, CA.extracts Low 和 CA.extracts High 分别代表正常对照组,拘束模型组,Vc 对照组,CA.extracts 低剂量组和
CA.extracts 高剂量组。与正常组相比△p<0.01,与模型组相比*p<0.01。
Note: Normal , Model, Vc, CA.extracts Low and CA.extracts High represent normal control, stress control, Vc (250 mg/kg), CA.extracts (200
mg/kg) and CA.extracts( 400 mg/kg) group, respectively. △p<0.01 vs normal control; *p<0.01 vs stress control.
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
CA.ex.C CA.ex.M CA.ex.Vc CA.ex.L CA.ex.H
Le
ve
l o
f G
SH
in
li
ve
r(u
g/
mg
ti
ssu
e * *
*
△
Le
ve
l o
f
G
SH
in
liv
er
(µ
g/
m
g
tis
su
e)
茶 叶 科 学 28 卷
~ 120 ~
2.6 狭叶茶提取物对拘束负荷小鼠血浆和
肝组织 ORAC 指数的影响
拘束负荷对小鼠抗氧化能力降低影响很
大,在血浆和肝组织 ORAC 指数上的反映为
拘束模型组比正常对照组分别降低了 10.8%
和 34.8%,均有显著性差异。而给予 CA.
extracts 后 ORAC 指数接近或者超过正常对照
组,其中高剂量组的血浆和肝组织 ORAC 指
数分别比模型组高 17.1%和 115%,具极显著
意义,并显示良好的剂量依存关系(表 4)。
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
2 22 42 62 82 102 time/ min
相
对
荧
光
强
度
Re
la
tiv
e
Fl
uo
re
sc
en
ce
In
te
ns
ity -AAPH
+AAPH
20µMTrolox
31.2µg/mLCA.ex.
7.8µg/mLCA.ex.
1.95µg/mLCA.ex.
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
2 22 42 62 82 102 time /min
相
对
荧
光
强
度
Re
la
tiv
e
Fl
uo
re
sc
en
ce
In
te
ns
ity -AAPH
+AAPH
20µMTrolox
31.2µg/mLVc
7.8µg/mLVc
1.95µg/mLVc
0
50
100
150
200
250
300
31.2 15.6 7.8 3.9 1.95 浓度(ug/ml)
O
R
A
C
指
数
(u
m
ol
/L
T
ro
lo
x
eq
ui
va
le
nt
s)
CA.ex.
Vc
图 3 不同浓度狭叶茶提取物与 Vc 体外 ORAC 荧光衰减曲线及 ORAC 值比较
Fig. 3 Dose-Dependent Inhibition, by CA.extracts and Vc of Fluorescence Decay Induced by AAPH.
浓度(µg/ml)
A
B
C
mol/L Trolox
l .ex
l .e
l .ex
mol/L Trolox
/ l Vc
l Vc
. / l Vc
2 期 顾陈菲,等:狭叶茶提取物对小鼠氧化应激性肝损伤的保护作用
~ 121 ~
2.7 狭叶茶提取物体外 ORAC 测定
CA. extracts 在体外能显著延缓荧光物质
被活性氧自由基淬灭的速度 ,且具有明显的量
效关系。图 3A 和 3B 分别代表了作为抗氧化
物的 CA. extracts 和 Vc 的 ORAC 荧光衰减曲
线,Trolox 作为抗氧化标准对照品,能有效对
抗 AAPH 产生的氧化作用所导致的荧光衰减。
图 3C 提示 CA. extracts 显示比 Vc 更强的抗氧
化能力。
3 讨论
肝脏易受各种应激刺激的影响,对于情绪
变化或机体在调节情志因素引起的各种应激
反应时,也都会影响到肝脏的正常生理功能。
本实验中发现,小鼠拘束 18 h 后血浆 ALT 活
性显著升高,应激负荷引起急性肝损伤发生。
在肝损伤发病过程中,活性氧自由基具有关键
性作用[9]。实验也证明拘束应激负荷小鼠血浆
ALT 活性增高的同时,血浆脂质过氧化产物
MDA 水平显著增高,而机体内水溶性小分子
抗氧化物质 GSH 含量明显下降,提示拘束负
荷诱发的氧化应激增加了对巯基蛋白质和含
巯基酶的破坏作用 [10]。同时我们也注意到肝
组织内 GPX,GST 及抗氧化能力指数水平因
拘束应激负荷而减少提示着肝组织内的内源
性抗氧化能力消耗 [11]。说明拘束负荷使小鼠
机体处于一种氧化应激状态。一般认为机体中
过量的自由基导致脂肪酸链和细胞膜完整性
的破坏[12,13],是肝损伤的主要作用机制之一。
与拘束应激模型组相比,CA. extracts 能
够显著降低拘束应激所致小鼠血浆 ALT 活性
的升高,同时显著降低肝组织 MDA 含量和
XOD 活性。上述结果说明了 CA. extracts 能够
有效缓解拘束负荷小鼠机体的氧化应激状态,
降低氧化应激诱发的过量自由基和脂质过氧
化对肝脏的损伤作用。在体内 ORAC 实验中
发现,CA. extracts 能够显著提高拘束负荷小
鼠肝组织的抗氧化能力指数,并能明显升高肝
组织中的 GSH 含量。此外,也改善了拘束负
荷小鼠肝组织中的 GST 和 GPX 活性,提高其
催化 GSH 反应的能力。CA. extracts 对 GSH
含量和抗氧化能力指数的影响说明,其可作为
外源性抗氧化剂对机体内的抗氧化物质起到
保护的作用,减少机体过氧化损伤程度,从而
改善了应激性肝损伤的发生。
从天然资源中寻找有效的抗氧化物质用
于防治疾病和维持机体健康已成为人们关注
的话题,通过 CA. extracts 的 HPLC 分析发现
其主成分为表儿茶素,在干叶片中的含量大于
0.4%。同时,在体外实验中发现不同浓度 CA.
extracts 能明显延缓荧光物质被活性氧自由基
淬灭的速度,而且具有比 Vc 更强的体外清除
自由基的能力。Kurihar 等人在利用 ORAC 方
法测定表儿茶素的体外抗氧化能力时也发现,
表儿茶素具有比 Vc 和茶叶中其他儿茶素类化
合物更优越的抗氧化能力[4]。这可能是由于表
儿茶素能抑制原来的自由基链锁反应,同时对
多元不饱和脂肪酸自由基、单线态氧、烷基过
氧化物自由基等也都有清除效能[3,14]。因此,
CA. extracts 能有效减缓拘束负荷小鼠机体的
氧化应激状态,降低氧化应激诱发脂质过氧化
对肝脏的损伤作用,可能与表儿茶素的清除自
由基能力,有效起到防止氧化损伤和维持细胞
正常生理功能方面的作用有关[8]。
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