全 文 ：1 9 9 1 于胆 国 外 林 业
一二 , . . 曰 ~ ~ 二 一 , 吧曰. , 弓 ~ ~ . ~ 二 , . . 尸 .一一 ,一 户 , , , . . . , 足 . . , . ,性 , ~ ~ , , , 一 , , 子 、 . 刊 , 州甲 , , , . 一 护, ~ 户一一 ,
1 1
成龄白栋腋芽离体培养诱导小植株再生
译者 : 况成秋
校者 : 吴克贤
前
自 ` {乐 ( Q u o r e u s e r i s P u l a B l u m e )
是 生 长 菇 蘑 和 用 材 的 重 要 树 种 。 由于
以 开插方式进行无性繁殖比较困 难 , 加 之
嫁接不易亲和 , 复活迟援 , 因此 , 选出的优
良个体不能迅速增殖 。 进行栋属 的 育 种 工
作 , 其目的是为生产优 良的香覃提供原木 ,
用选择的优 良个体以无性繁殖方 式 繁 殖 苗
木 , 这不仅是建育种园 , 而且也是取得 良好
育种效果的方法 。 因此 , 采用组织培养法 ,
对栋属进行无性繁殖 , 被认为是一种有效的
方法 。 在标属中 , 己有成龄赤栋和栋再生的
例子 , 但是关于白栋再生成功的报告尚未见
报导 。 笔者用 25 年生 白栋的萌生枝腋芽诱导
小植株 再生的试验结果作如下报道 。
二 . 材料和方法
1
. 材 料的灭菌
试验材料于 1 9 8 7年 1 0 ) j 2 7 日取 自石川县
林业试验林内25 年生白栋单株 。 取 约 60 c m
一长的技条 , 根据伊藤 、 松尾的方法 , 在湿度
为 50 士 10 % 以及湿度 2 5 士 3 ℃ 的 条 件 下 ,
水培泥进萌芽枝生长 , 每天 日光灯照明 16小
时 , 光强度 3 0 0 o L x 。 当萌芽枝伸长到 1 0一2 0
c m / h
, 从叶柄中间部位剪去叶片 , 按腋 芽位
置将其切成 1 一 2 。二长的 Y字型带腋芽小段
供试验之用 。 依 i4 芽枝 仁{,长的先后烦序 , 初
期牛养的时门依次为 1 9 8 7年 1 1 月 17 日 , 3 0
日 , 12 月 3 日 , 2 4 日 。 外植体的灭菌 , 首先
在 7 % 的洒倩中浸 Z m i二 , 再在 3 % 过氧化
氢溶液中浸 3 m i n , 以上两步均需在搅拌器
内搅拌 , 并在常压下进行 。 将灭过菌的外植
体放入净化台内用无菌水冲洗 3 次 , 把 友面
消毒过程中受到药害的茎基部除掉 。 为 防止
盼类物质产生褐变 , 采用井川 、 山本的硝酸
银处理法 , 即将外植体基部的 叨口在经孔径
0
.
4 5 o m的滤器除菌的 1 0 0 o p p m 硝酸银 溶 液
中浸 3 5 , 待硝酸银涪液浸透组织 , 再 将 外
植体插入 2 。 5%的琼脂凝胶中 浸 3 o m 三n , 然
后接种于诱导芽伸长的培养基上进行培养。
接种后初期培养的 7 天内 , 要注意观察杂菌
污染的情况 , 及时将未受污染的材料移植到
新培养基中 。 把装有试验材料的 试 管 置 于
25 士 3 ℃ 的恒温室内培养 , 每 日用 日光贡丁照
明 1 6 h , 光照强度约 8 0 0 0一 1 0 0 0 0 L x 。
2
、 芽伸长培养基
这种培养基是以W F M 中加 l o o m g / l 肌
解 , 2 0 9 / l蔗糖为基本培养基 , 再加入琼脂 6
g /工以 及 细胞分裂素类 。 此培养基使用的细
胞分裂素有 6 一 节基嚓吟 ( B A P ) , 异戊烯
基嗓补令) Z i p ) 月)硫酸腺嗓吟 ( 4 尸U ) 3 个
种类连同未加激素处理的共设 13 个处理 , 各
处理细胞分裂素的浓度如 (表 l ) 所示 。
3
、 促进生根和生根培养基
外植 沐的腋芽经过 10 天左 右的培养 , 即
可见其开始仲长 。 经 3 0天培养 , 在新芽仁1,长
到 l 一 2 c n : , 可将其切下并移到生根培养基
中。 为了防止渴变 , 仍按井 出、 山本的方法 ,
把 切 iJ 修成 斜 而 , )刊S T S处理 切日 。 即在
经孔径 o . 4 5 lt n 的滤器除菌的 O . 02 m M 硝酸银
溶液 与0 . 16 m M硫代硫酸钠等量混合 液中及
成龄白栋旅芽离体培养诱导小植株再生
5 5 , 再用 2 . 5%球脂凝胶处理 30 m i n , 然后插
入生根培养基中 。 以芽伸长培养基为基本培
养墓 , 加凉脂 7 . 0 9 / l 和植物生长激素类及活
性炭 1 0 9 / l 共设 14 个处理 , 见 (表 2 ) 。 表中
1B 人经过滤除菌 , 以 浓度 50 0P p m 的 BI A 溶
液浸泡 3 5 , 井在 0 . 2 p p m 的工B 人和 o . o o Z p p
m 的 N A A 共存的条件一「, 尽量使 N A A浸透
在堵养基内的材料中 。 同时 , 制备不添加活
性炭而只添加 1 0 9 l/ 泡 沸石的培养基 。
4
、 小植株在温室内的驯化
把已生出根的幼小植株 , 移至经水冲洗
过为妮石培养基 中 , 用透明塑料布复盖 , 放
汉 `;宜温室内 10 天 。 然后移植到含有无机盐的
营 莽体中 , 移放在温室 中。 一个月后调查其
成活率 。 在温室内安装上喷雾灌水装置 , 用
以调节温度 。
三 、 结果与调查
1
、 材料灭菌
庄初期培养过程中 , 由于杂 菌 污 染 ,
吐20 个外植体中有 9
表 1
个被 污 染 , 污 染 率 为
2
.
1%
。 在此之 前 , 笔者曾从室外生长的植
株 切取根部 , 用水培使其发生萌芽枝作为试
材 , 污染率 也不高 。 在继续培养的过程中 , 可
看到一部分萌芽枝褐变枯死 。 褐变枯死原因
之一是 由于多酚类物质与铁离子形成 铁单宁
的缘故 。 由于这些物质从切口和灭菌损伤的
部位大量溢出 , 因而被 认为有缓慢的杀菌作
用 。 如能控制因灭菌而引起的损伤而积 , 就
能进一步减少材料的褐变枯死 。
2
、 幼苗的生长发育状况 -
不 同浓度的激素对幼苗形成率 ( 形成幼
苗的外植体数 /供试材料数 )的影响见 (表 1 ) 。
从一个外植体形成苗的数量 来看 , 添加
0
.
2 p p m B 八 P的培养基效果最好 , 每个外 植
体的苗数达 2 . 75 株 。 在低浓度的 B A P O . 05 、
o
.
0 6 7 p p m 的培养基中 , 形成苗的株数 分 别
减少到 1 . n 和 0 . 8 8 。 在 O . 4 p p m B A P 的 培 养
基中 , 虽然芽的分化比较活跃 , 但是许多芽
不能生长 , 苗数减少到 1 . 82 。 这里的原因很
多 , 诸如出现异常叶化 , 也就是通常所说的
玻璃化现象。 增田以海棠果作萍果的砧木 ,
以 高浓度 B A P促进叶条异常 化 , 再以 低 浓
细胞分裂素对苗形成数且的影响
培养的 形成苗的 形成苗
的数量
每个外植体
的平均苗数
旧一
苗形成培养基中
的细饱分裂素
种类 浓度
(
v
p p m )
外植体数
( A )
外植体数
( B )
0
形成苗的
外植体的
百分数
( B / A ) ( C / A )
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8
有9 9 1 aN 4 国 外 林 业
度 的 B A P处理 , 外植体就可形成键全 的植
株 , 这种现象已有报道 。
添加 Z IP 的培养基与添加 B A P的培养基
进行比较 , 添加 Z IP 者苗 茎 的生长有细长倾
向 , 但平均苗数减少到 0 . 9一 1 . 1株 , 而且在
外植体的基部形成大量的愈伤组织 , 愈伤组
织越大引起幼叶产生萎黄病症越多 。
添加 4 P U 的培养基与添加 B A P的培养
基相比 , 前者苗茎生长短粗 , 每个外植体平
均苗数较少 , 为 。 一 0 . 8株 。
从上述试验结果看 , 对白栋来说 , 在各
细胞分裂素中 , 以 B A P o . Z p p m 最为适宜 。
培养基中材料的褐变对苗形成率有一定
的影响 , 褐变严重的占试样的 9 0 . 7% , 褐变
较轻者占试样的 58 . 1% 。 另外 , 取自较粗枝
条的外植体褐变倾向较重 。 如果茎的褐变不
严重 , 对苗形成的影响就不大 。
3
、 生根培养基与生根率的关系
生根培养基对生根率以 及生根所需天数
的影响详见 (表 2 ) 。
只有加入活性炭的培养基才能诱导根的
形成 。 添加活性炭的培养基能抑制大部分幼
苗渴变 。 在不加活性炭和只加泡沸石的培养
基中 , 数周之内因幼苗发生褐变而导致全部
枯死 。 目前虽然对活性炭的作用 不 十 分 明
确 , 但从其特性看 , `臼能吸附培养基中影响
生长的有害物质 。 试验表明 , 把无根苗移植
到生根培养基后 , 生根所需时间 平 均 长 达
5 ~ 1 09 天 , 从这一点也可说明添加活 性 炭
对防止褐变效果显著 。 另外 , 井出 、 山本 曾
在培养基中添加活性炭使赤栋的生根获得成
功 。
其次 , 从促进生根的效果看 , 经 S O0 p p m
I B A 浸蘸 3 5的处理 , 其有 效 性 明 显 高 于
仅在培养基中添加N A A和 工B A 者 。 例如 ,
在 o . 0 0 0 2 p p m 和 o . 0 0 2 p p m 的各组合中 , 经
浸蘸处理者生根率均表现最高 , 分别为 75 %
和 56 % 。 井冈等在中国醋栗的实验报告 中 也
采用了 .] 0 0 0 p p m I B A 浸蘸 3 5的方法 , 使生
根率明显提高 。
另一方面 , 在生根培养基各组合中 , 由
于添加了活性炭 , N A A 和 I B A 的作用 变 得
不甚明显 。 此外 , 生根率与芽伸长培养基和
生根培养基的交互作用不大 , 仅本试验结果
还不能清楚地说明这个问题 。 一系列的试验
表明 , 若想使幼苗生长 良好 , 就必须将幼苗
表 2 生根培养基中的植物生长激素和漆加物对幼苗生根的影响
. . , . , ` . . 曰比 . . .一~ ~一 ,一一~ 二 2一一 . 之~一一一一 ~ . 思一~ ~ r 二一一N 人入 I B A 添加物 培养的 生根的( v p p m ) ( v p p m ) 生根苗的百分数 幼苗生很所需的时问 (天 )平均 最少 最多3 5 2 5加002935407弘8000 . 0 0 20 . 0 0 20 . 0 0 20 . 0 0 20 . 0 0 20 . 0 〔)20 . 0 02
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泡沸石
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八曰.。.八曰门…nU门曰n月土一、énIJ勺
注; · 在 s o o p p : : 的 IB A中浸蘸 ; 二 A · C活性炭。
1 4 国 外 林 业 1 9 9 1 N0 4
鹤卵和雏鸟的采集及运输
译者 : 郑 琳
校者 : 傅承剑
鸟类遗传材料是保证鸟类繁育和恢复稀
有鸟类的关键 。 首先是在繁育场 中 孵 出 雏
鸟, 其次是扩大遗传的多样性 。
苏联 自然保护研究所与农业部自然保护
局从 1 9 7 7年开始联合 , 从事稀有鸟类的繁育
工作 , 收集 一鸟卵 、 雏鸟及其运输 , 其中有鹤
形 日、 雁形日 、华形口 , 而更主要的是鹤形 目
中的自鹤 ( G r u s l e u e o g e r a n u s P a l l a s ) 。
运送到繁育场的遗传材料是卵 、 雏鸟或
成鸟。 捕捉与运输这些材料都需要特殊的方
法与工具 。 此文重点论述选择运送繁育对象
的运输方法 。
运送的卵应具备以下儿个条件 : ( 1 )材
料较容易收集 , 应在路途中用最少的人员 ;
( 2 ) 包装小巧玲珑 , 最好选用飞机 , 用集
装箱运输 (甚至运大量的卵 ) , 经常观察它
们 的状况 。 以 下因素是成败的关键 : ( 工 )
必须预先了解具体种的人工孵化全部详情 ;
( 2 ) 应有时间限度 , 采集的卵与孵化器中
孵化的卵之问 , 不得超过 30 一 4 0 1 , 间隔时
间的长短是降低死亡 率的先决条件。 因此 ,
要运用直升飞机或其它先进运输工具 ; ( 3 )
要求保持在 一定的温度与湿度下翻卵 , 泞意
避免震动 ; ( 4 ) 卵在运输途中有孵出的可
置于适宜的培养基中 , 这样 寸有利于根的生
成 。
4
、 温室的驯化
根是从幼苗的 一部分形成层 分 化 而 来
的 , 而愈伤组织中看不到任何 分 化 。 在 温
室中进行驯化 , 5 0个苗 中有柱株获得成功 ,
驯化率为 82 % 。 如果小植株仅有 1 c m 以下的
短根 , 则驯化不能顺 利地进行。
能 , 因此应补充设备和较复杂的运输工具 。
运输未孵化或已孵化的卵时 , 其它遗传
材料应一 并运送 , 并阐明卵的孵化程度 。 新
鲜卵运输方便 , `仑们不受严格的保泥和时问
约束 。
人工孵化的第 1 天比孵出前更重要 , 因
不能确定卵是否已开始孵化 , 否则会造成 卵
的大量废弃 , 有 时 对 卵 的产 出日期难以确
定 。 应指出的是 , 在运输中没有孵化的合格
卵很可能是产卵尚未结束前产下的卵 。 在雁
形目 、 鸡形目与某些具有较长产卵期的鸟类
中 , 采集卵的时间较长 , 而在鹤类 , 时间则
较短 。
毫无疑问 , 已经开始孵化的卵 , 易于人
工孵化 , 同时鉴别受精或未受精也容易 , 其
缺点是要保证严格的运送时间 , 甚至雏鸟可
能在运输途中孵出。
为避免上述情况 , 要把雏鸟运送到繁育
场 , 其中最重要的是 : ( 1 ) 最适宜的自然
条件下 , 鸟类在发育过程中 , 通过出壳这一
重要发育界 限 , 形成富有生活能力的个休 ;
( 2 ) 虽然材料与设备充足 , 但 是 缺 乏 时
间 ; ( 3 ) 在运输雏鸟途中 , 工作人员可能
暗中放入过多的雏鸟 , 造成门题 , 为此必须
保证为它们贮备充足的饲料 , 严格执行防疫
卫生规则 。
在已知的技术条件下 , 可成功地运输不
同 日龄的雏鸟一一 由生 一民绒羽到 飞 羽 的 雏
鸟 。 其特点是 , 用集装箱运输 , 要求较少的
食物与较稀的装运密度 。 技术重点在于训练
雏鸟自己吃食与取暖 , 出飞的幼鸟有较强的
生活能力 , 可以在较长时间内缺少食物和加